EBV-spezifische CTLs nach CD45-Antikörper bei Patienten mit Epstein-Barr-Virus (EBV) + Nasopharynxkarzinom (NPC) (CLANC)

Es werden drei verschiedene CTL-Dosen bewertet: Dosisstufe I: 2 x 10e7/m2; Dosisstufe II: 5 x 10e7/m2; Dosisstufe III: 1 x 10e8/m2

Tag 1 YTH 24/54 800 ug/kg über 8 Std.; Tag 2 YTH 24/54 800 ug/kg über 8 Std.; Tag 3 Ruhe; Tag 4–6 CTL-Infusion (vorausgesetzt CD45-Mab-Spiegel < 100 μg/ml).

Erzeugung von EBV-spezifischen CTL

Nach Zustimmung zum separaten Beschaffungsprotokoll für die CTL-Präparation spendet der Patient bis zu 60-70 ml peripheres Blut. 10-20 cc davon werden für die Etablierung einer EBV-transformierten lymphoblastoiden Zelllinie (EBV-LCL) durch Infektion mit Virus verwendet, das von der B95-8-Master-Zelllinie produziert wird. Die Einrichtung der EBV-LCLs dauert etwa vier bis sechs Wochen. 30-40 cc peripheres Blut werden verwendet, um EBV-spezifische CTLs zu erzeugen. Die CTL-Linie wird durch Kokultivierung des bestrahlten EBV-LCL mit Patienten-PBMC hergestellt. Nach der Etablierung werden die CTL-Linien auf Identität, Phänotyp und mikrobiologische Kultur überprüft und vor der Verabreichung gemäß SOPs kryokonserviert. Die Antigenspezifität jeder CTL-Linie wird in einem Zytotoxizitätsassay und wenn möglich mit Tetramer-Reagenzien bestimmt.

CD45 monoklonale Antikörper

Anti-CD45 ist eine Kombination in gleichen Mengen (Gewicht für Volumen) von zwei monoklonalen Antikörpern, die gegen nicht überlappende Epitope auf menschlichem CD45 gerichtet sind. Es ist ein gereinigtes, konzentriertes und steriles Gammaglobulin, hauptsächlich monomeres IgG, das aus dem Überstand der beiden Ratten-IgG2b-Hybridomklone YTH 24 und YTH 54 hergestellt wird. Die Hybridome wurden als Fusionen zwischen Splenozyten von DA-Ratten, die mit menschlichen Leukozyten immunisiert wurden, und der Rattenmyelomlinie Y3 hergestellt. Die Kombination der beiden MAbs übt in vitro eine synergistische Wirkung auf die komplementvermittelte Zytotoxizität von weißen Blutkörperchen aus, und es wurde gezeigt, dass sie fast alle Passagier-Leukozyten aus Spendernieren vor der Transplantation entfernt. Anti-CD45-Mabs wurden unter cGMP-Bedingungen am Therapeutic Antibody Centre in Oxford und am Baylor College of Medicine hergestellt und werden die von der FDA geforderten Sicherheitstests bestehen.

Zellverwaltung

Die Patienten werden mit Diphenhydramin 1 mg/kg i.v. (max. 50 mg) und Acetaminophen 10 mg/kg p.o. (max. 650 mg) vorbehandelt. EBV-spezifische T-Zellen werden durch intravenöse Injektion über 1-10 Minuten entweder über einen peripheren oder einen zentralen Zugang verabreicht. Ambulante Patienten können in der Klinik behandelt werden. Die Überwachung erfolgt gemäß den institutionellen Standards für die Verabreichung von Blutprodukten, mit der Ausnahme, dass die Injektion von einem Arzt verabreicht wird. Bei Bedarf werden Antiemetika in angemessener Dosierung für jeden Patienten verschrieben. Die Patienten erhalten eine unterstützende Behandlung bei akuter oder chronischer Toxizität, einschließlich Blutkomponenten oder Antibiotika, und gegebenenfalls andere Interventionen.

Antikörper-Verabreichung

Die Patienten werden mit Diphenhydramin 1 mg/kg i.v. (max. 50 mg) und Acetaminophen 10 mg/kg p.o. (max. 650 mg) vorbehandelt. 800 ug/kg CD45 Mabs werden als 2 tägliche intravenöse Infusionen über 8 Stunden verabreicht. Das zu infundierende Antikörper-Aliquot wird vom behandelnden Arzt oder einem ernannten Vertreter in der Hand in den Behandlungsbereich gebracht. Das Antikörper-Aliquot wird in minimalen Mengen normaler Kochsalzlösung verdünnt. Die resultierende Lösung ist für 24 Stunden stabil. Die Antikörperlösung wird durch eine Spritzenpumpe in inkrementellen Dosen von 0,2–0,8 verabreicht mg in der ersten Stunde und danach bis zu 10 mg/Stunde für eine Gesamtinfusionsdauer von maximal 6 Stunden. Eine diplomierte Krankenschwester und ein Arzt müssen verfügbar sein.