CTL specifici per EBV in seguito all'anticorpo CD45 nei pazienti con virus di Epstein-Barr (EBV) + carcinoma nasofaringeo (NPC) (CLANC)

Saranno valutate tre diverse dosi di CTL: livello di dose I: 2 x 10e7/m2; livello di dose II: 5 x 10e7/m2; livello di dose III: 1 x 10e8/m2

Giorno 1 YTH 24/54 800ug/kg oltre 8 ore; Giorno 2 YTH 24/54 800ug/kg oltre 8 ore; Giorno 3 Riposo; Giorno 4-6 Infusione CTL (a condizione che il livello di CD45 Mab <100 ug/ml).

Generazione di CTL specifici per EBV

Dopo il consenso sul protocollo di approvvigionamento separato per la preparazione del CTL il paziente donerà fino a 60-70 cc di sangue periferico. 10-20 cc di questo saranno utilizzati per la costituzione di una linea cellulare linfoblastoide trasformata da EBV (EBV-LCL) mediante infezione con il virus prodotto dalla linea cellulare master B95-8. Ci vorranno dalle quattro alle sei settimane per stabilire gli EBV-LCL. 30-40 cc di sangue periferico saranno utilizzati per generare CTL specifici per EBV. La linea CTL sarà preparata mediante co-coltivazione dell'EBV-LCL irradiato con PBMC del paziente. Dopo l'insediamento, le linee CTL saranno controllate per identità, fenotipo e coltura microbiologica e criopreservate prima della somministrazione secondo le SOP. La specificità antigenica di ciascuna linea CTL sarà determinata mediante saggio di citotossicità e quando possibile con reagenti tetramerici.

Anticorpi monoclonali CD45

L'anti-CD45 è una combinazione in quantità uguali (peso per volume) di due anticorpi monoclonali diretti verso epitopi non sovrapposti sul CD45 umano. È una gammaglobulina purificata, concentrata e sterile, principalmente IgG monomerica, prodotta dal surnatante dei due cloni di ibridoma IgG2b di ratto, YTH 24 e YTH 54. Gli ibridomi sono stati prodotti come fusioni tra splenociti di ratti DA immunizzati con leucociti umani e la linea di mieloma di ratto Y3. La combinazione dei due MAbs esercita un effetto sinergico in vitro sulla citotossicità mediata dal complemento dei globuli bianchi ed è stato dimostrato che elimina quasi tutti i leucociti passeggeri dai reni del donatore prima del trapianto. I Mab anti-CD45 sono stati prodotti in condizioni cGMP presso il Therapeutic Antibody Center di Oxford e presso il Baylor College of Medicine e supereranno i test di sicurezza richiesti dalla FDA.

Amministrazione cellulare

I pazienti saranno premedicati con difenidramina 1 mg/kg EV (max 50 mg) e paracetamolo 10 mg/kg PO (max 650 mg). I linfociti T specifici per EBV verranno somministrati mediante iniezione endovenosa nell'arco di 1-10 minuti attraverso una linea periferica o centrale. I pazienti ambulatoriali possono essere curati in clinica. Il monitoraggio sarà effettuato secondo gli standard istituzionali per la somministrazione di emoderivati, con l'eccezione che l'iniezione sarà praticata da un medico. Se necessario, verranno prescritti antiemetici nel dosaggio appropriato per ciascun paziente. I pazienti riceveranno cure di supporto per tossicità acuta o cronica, inclusi componenti del sangue o antibiotici e altri interventi a seconda dei casi.

Somministrazione di anticorpi

I pazienti saranno premedicati con difenidramina 1 mg/kg EV (max 50 mg) e paracetamolo 10 mg/kg PO (max 650 mg). 800 ug/kg di CD45 Mab verranno somministrati in 2 infusioni endovenose giornaliere nell'arco di 8 ore. L'aliquota di anticorpi da infondere arriverà nell'area di trattamento portata a mano dal medico curante o da un incaricato designato. L'aliquota dell'anticorpo sarà diluita in quantità minime di soluzione fisiologica. La soluzione risultante è stabile per 24 ore. La soluzione anticorpale viene somministrata mediante una pompa a siringa in dosi incrementali, 0,2-0,8 mg nella prima ora e fino a 10 mg/ora successivamente, per un tempo totale di infusione di un massimo di 6 ore. Un'infermiera registrata e un medico devono essere prontamente disponibili.