Vývoj lidských imunologických testů specifických pro antigen receptoru kyseliny listové

Výskyt rakoviny vaječníků

Karcinom vaječníků je první úmrtností gynekologických malignit s celkovým pětiletým přežitím pouze 20–30 %. V posledních letech se stává stále důležitějším onemocněním a na Tchaj-wanu se v posledních letech zvyšuje také výskyt rakoviny vaječníků. Nedostatek symptomů, potíže s včasnou diagnózou, nedostatečně přesné nádorové markery a nedostatek informací o biologii ovariálního nádoru přispívají ke špatné prognóze u pacientek s karcinomem ovaria. Prognostickými parametry pro ovariální karcinomy jsou stadium tumoru, histologický podtyp, stupeň malignity a reziduální tumor po chirurgické léčbě. Tyto faktory však představují neúplný obraz biologie nádoru rakoviny vaječníků a často spolu souvisí. Identifikace nových biologických faktorů predikujících individuální průběh a prognózu onemocnění by tedy byla mimořádně užitečná. Z výše uvedených údajů je rakovina vaječníků skutečně nemocí, která by měla být respektována, nicméně na Tchaj-wanu bylo velmi málo výzkumných prací zaměřených na ni.

Léčba rakoviny vaječníků

Epiteliální ovariální karcinom (EOC) a extraovariální Müllerův karcinom jsou podobné patologické entity, které preferují postižení peritoneální dutiny. Šíření těchto nádorů představuje výzvu a jedinečné příležitosti pro imunoterapii. Pacientky s EOC, které mají onemocnění ve stádiu I (lokalizované na vaječnících) po optimálním chirurgickém stagingu, mají 5letou míru přežití 90 %, bez významné změny po 10 letech. Naproti tomu u pacientek s rozšířením mimo vaječníky se střední míra přežití snižuje na < 10 % u pacientek s objemným reziduálním onemocněním po operaci a léčbě kombinovanou chemoterapií na bázi platiny. Randomizovaná studie chemoterapie první linie u pacientů s EOC s reziduálními masami většími než 1 cm po úvodní operaci ukázala střední dobu přežití 38 měsíců pro cisplatinu/paklitaxel, významně delší než 24 měsíců pro léčebnou větev cisplatina/cytoxan. V prozatímní analýze studie ekvivalence nebylo přežití po karboplatině/paklitaxelu horší než po cisplatině/paklitaxelu. I když je včasná diagnostika důležitým cílem probíhajícího klinického výzkumného úsilí, není jasné, zda pokročilá EOC začíná jako multicentrický proces zahrnující vaječníky a peritoneální povrch. Nyní je zjištěno, že k rozvoji EOC přispívají dědičné faktory. Zárodečné mutace BRCA1 a BRCA2 tvoří přibližně 10 % všech EOC. U ženy s mutací BRCA 1 nebo 2 se celoživotní riziko rakoviny vaječníků pohybuje od 16 % do 44 %. S komerční dostupností genetického testování na BRCA1 a BRCA2 je stále více žen identifikováno jako ženy s vysokým rizikem rakoviny vaječníků. Neexistují žádné jasné pokyny pro prevenci rakoviny pro tyto jedince. Ačkoli je profylaktická ooforektomie rozumnou možností pro ženy, které dokončily porod, tyto ženy jsou stále ohroženy rozvojem peritoneálního karcinomu. Je zřejmé, že jsou zapotřebí další možnosti prevence.

Imunoterapie pro rakovinu vaječníků

Při vývoji účinných strategií EOC založených na imunitě by se měl rozlišovat mezi preventivními a terapeutickými přístupy. Předpokládá se, že bude vyvinuta imunoprevence (imunoprofylaxe) pro ženy, které jsou vystaveny zvýšenému riziku rozvoje EOC. Na rozdíl od toho by se imunoterapie používala jako adjuvans k operaci nebo v kombinaci s chemoterapií nebo jinými biologickými látkami, jako je chemoimunoterapie nebo biochemoimunoterapie. Pacienti s nedetekovatelným onemocněním po přestavení léčby po chemoterapii by mohli být zvažováni pro imunoterapii s předpokladem, že většina má ve skutečnosti mikrometastázy. Vývoj účinných konceptů prevence nebo léčby EOC založených na imunitě bude vyžadovat pochopení principů nádorové imunologie, mechanismů působení rozšiřujícího se pole imunomodulačních molekul, identifikaci a charakterizaci nádorových antigenů a stanovení faktorů mikroprostředí, které by mohly vliv na různé mechanismy imunitních efektorů. Klinickému výzkumníkovi bylo poskytnuto mnoho imunitně řízených činidel, ale pokrok v jejich integraci do standardních terapií byl poněkud pomalý.

Folátový receptor

Folátový receptor (FR), 38 kDa membránový glykoprotein, je reprezentován homologní rodinou glykoproteinů, z nichž dva (FR-a a FR-b) jsou připojeny k buněčnému povrchu pomocí glykosyl-fosfatidylinositolové kotvy; třetí izoforma (FR-) a její zkrácená verze (FR-9) jsou konstitutivně secernovány kvůli nedostatku účinného signálu pro modifikaci glykosyl-fosfatidylinositolu. FR-a je exprimován v některých normálních epiteliálních buňkách a je zvýšený u některých karcinomů, zatímco FR-b je myeloidní diferenciační marker a je zvýšený u některých neepiteliálních malignit. FR-9 je exprimován v hematopoetických tkáních. V současnosti je FR hlavním zaměřením na nádorový cíl pro různé experimentální přístupy v terapii rakoviny. Jeden nový přístup používá bifunkční protilátky k cílení T buněk na FR na povrchu buněk karcinomu vaječníků. Tímto přístupem bylo dosaženo selektivní inhibice růstu nádorových buněk. Chimérické protilátky, které se vážou jak na FR, tak na CD3 nebo CD28, poskytly působivé výsledky v xenogenním modelu a u pacientek s pokročilým karcinomem vaječníků. Podobně chimérická molekula sestávající z jednořetězcového Fv anti-FR protilátky a interleukinu 2 byla účinná při inhibici růstu nádoru in vivo. Alternativně by konjugáty kyseliny listové jednořetězcové protilátky proti receptoru T buněk mohly mobilizovat odpověď T buněk proti nádorům bohatým na FR. S využitím nedestruktivní povahy FR-zprostředkované internalizace makromolekul spojených s folátem bylo prokázáno, že cytotoxiny, jako je momordin, Pseudomonas exotoxin a maytansinoidy, produkují selektivní zabíjení buněk bohatých na FR. Kromě toho toxicita takových konjugátů byla závislá na hustotě receptoru na buněčném povrchu. Zdá se, že radiofarmaka konjugovaná s folátem také nabízejí prostředky pro zobrazování nádorů/radiační terapii. Ukázalo se, že liposomy potažené folátem selektivně cílí na nádorové buňky bohaté na FR a selektivní zabíjení maligních buněk bylo dosaženo zapouzdřením doxorubicinu v liposomech. Podobnou strategií bylo možné dodat antisense oligonukleotidy proti receptoru epidermálního růstového faktoru do nádorových buněk bohatých na FR. Kromě toho bylo dosaženo selektivního cílení adenovirového vektoru na nádorové buňky bohaté na FR v přítomnosti protilátky k odstranění endogenního virového tropismu. Konečně několik studií ukázalo, že FR, pokud je exprimován ve vysokých hladinách, by mohl nabídnout preferovanou cestu příjmu nových tříd antifolátových léků, které se zaměřují na glycinamid ribonukleotid formyltransferázu a thymidylátsyntázu. Solubilní forma FR byla detekována v séru a ascitu pacientek s rakovinou vaječníků. Bylo hlášeno, že FR je selektivně nadměrně exprimována u 90 % nemucinózních ovariálních karcinomů a v některých dalších maligních tkáních. Receptor byl detekován pouze v několika dalších normálních typech buněk, ale ne v normálním ovariálním povrchovém epitelu. Zdá se, že FR by mohla být potenciálním cílovým antigenem pro imunoterapii rakoviny vaječníků.

Epitopy folátového receptoru pro lidský haplotyp

Incidence haplotypu HLA-A2 je v západních zemích přes 50 %. Incidence haplotypu HLA-A2 se na Tchaj-wanu pohybuje kolem 30 %. Byly identifikovány specifické epitopy folátového receptoru v haplotypu HLA-A2. Jsou to E39 (FR, 191-199) EIWTHSTKV a E75 (FR, 245-253) LLSLALMLL, v daném pořadí. Zdá se, že folátové receptory by mohly být cílovým antigenem pro imunoterapii rakoviny vaječníků.

Náš výzkumný tým se již několik let zaměřuje na vývoj vakcíny proti rakovině a imunoterapii. Naše laboratorní zařízení byla také zřízena pro vyhodnocení lidských imunologických testů na antigen E7 lidského papilomaviru typu 16 z grantu podporovaného National Taiwan University Hospital. Je velmi důležité nastavit různé imunologické testy specifické pro folátový receptor u lidí, aby se vyhodnotil účinek vakcíny proti rakovině nebo imunoterapie rakoviny vaječníků v budoucích klinických studiích. Rádi bychom tedy předložili tento návrh, abychom se zabývali vývojem imunologických testů specifických pro folátový receptor u lidí. V tomto projektu je několik cílů:

1. vyvinout a používat testy pro měření CTL na folátové receptory a,
2. vyhodnotit imunologické reakce specifické pro folátový receptor mezi normálními kontrolami a pacientkami s rakovinou vaječníků.