Lo sviluppo di test immunologici umani specifici per l'antigene del recettore del folato

Incidenza del cancro ovarico

Il cancro ovarico è il primo tasso di mortalità delle neoplasie ginecologiche con un tasso di sopravvivenza globale a 5 anni di solo il 20-30%. Negli ultimi anni è diventata una malattia sempre più importante e anche l'incidenza del cancro alle ovaie è aumentata negli ultimi anni a Taiwan. La mancanza di sintomi, le difficoltà nella diagnosi precoce, i marcatori tumorali accurati insufficienti e la mancanza di informazioni sulla biologia del tumore ovarico contribuiscono alla prognosi sfavorevole nelle pazienti con carcinoma ovarico. I parametri prognostici per i carcinomi ovarici sono lo stadio del tumore, il sottotipo istologico, il grado di malignità e il tumore residuo dopo il trattamento chirurgico. Tuttavia, questi fattori presentano un quadro incompleto della biologia tumorale del carcinoma ovarico e sono spesso correlati. Pertanto, l'identificazione di nuovi fattori biologici predittivi del decorso e della prognosi della malattia individuale sarebbe estremamente utile. Dai dati sopra menzionati, il cancro alle ovaie è davvero una malattia che dovrebbe essere rispettata, tuttavia, a Taiwan c'era pochissimo lavoro di ricerca incentrato su di esso.

Trattamento del cancro ovarico

Il carcinoma ovarico epiteliale (EOC) e il carcinoma mulleriano extraovarico sono entità patologiche simili che condividono una preferenza per il coinvolgimento della cavità peritoneale. Il modello di diffusione di questi tumori presenta una sfida e opportunità uniche per l'immunoterapia. I pazienti con EOC che hanno una malattia in stadio I (localizzata alle ovaie) dopo una stadiazione chirurgica ottimale, hanno un tasso di sopravvivenza a 5 anni del 90%, senza cambiamenti significativi a 10 anni. Al contrario, i pazienti con diffusione oltre le ovaie hanno tassi di sopravvivenza mediani che diminuiscono a < 10% per i pazienti con malattia voluminosa residua dopo l'intervento chirurgico e il trattamento con chemioterapia combinata a base di platino. Uno studio randomizzato di chemioterapia di prima linea in pazienti con EOC con masse residue superiori a 1 cm dopo l'intervento chirurgico iniziale, ha mostrato un periodo di sopravvivenza mediano di 38 mesi per cisplatino/paclitaxel, significativamente maggiore di 24 mesi per il braccio di trattamento cisplatino/citossano. In un'analisi ad interim di uno studio di equivalenza, la sopravvivenza dopo carboplatino/paclitaxel non era peggiore rispetto a cisplatino/paclitaxel. Anche se la diagnosi precoce è un obiettivo importante degli sforzi di ricerca clinica in corso, non è chiaro se l'EOC avanzato inizi come un processo multicentrico che coinvolge le ovaie e la superficie peritoneale. È ormai accertato che i fattori ereditari contribuiscono allo sviluppo dell'EOC. Le mutazioni della linea germinale BRCA1 e BRCA2 rappresentano circa il 10% di tutte le EOC. In una donna con una mutazione BRCA 1 o 2, il rischio per tutta la vita di cancro ovarico varia dal 16% al 44%. Con la disponibilità commerciale di test genetici per BRCA1 e BRCA2, più donne vengono identificate come ad alto rischio di cancro ovarico. Non ci sono linee guida chiare sulla prevenzione del cancro per questi individui. Sebbene l'ooforectomia profilattica sia un'opzione ragionevole per le donne che hanno completato la gravidanza, queste donne sono ancora a rischio di sviluppare il cancro peritoneale. Chiaramente, sono necessarie altre opzioni per la prevenzione.

Immunoterapia per il cancro ovarico

Nello sviluppo di efficaci strategie immunitarie per l'EOC, dovrebbe esserci una distinzione tra approcci preventivi e terapeutici. Si prevede che l'immunoprevenzione (immunoprofilassi) sarà sviluppata per le donne che sono a maggior rischio di sviluppare l'EOC. Al contrario, l'immunoterapia verrebbe utilizzata come adiuvante della chirurgia o in combinazione con la chemioterapia o altri farmaci biologici come la chemioimmunoterapia o la biochemoimmunoterapia. I pazienti con malattia non rilevabile dopo essere stati rimessi in scena dopo la chemioterapia potrebbero essere presi in considerazione per l'immunoterapia con la presunzione che la maggioranza abbia effettivamente micrometastasi. Lo sviluppo di concetti immunologici efficaci per la prevenzione o il trattamento dell'EOC richiederà la comprensione dei principi dell'immunologia tumorale, i meccanismi di azione della gamma in espansione di molecole immunomodulanti, l'identificazione e la caratterizzazione degli antigeni tumorali e la determinazione dei fattori del microambiente che potrebbero impatto sui diversi meccanismi immuno-effettori. Al ricercatore clinico sono stati forniti molti agenti immunodiretti, ma i progressi nella loro integrazione nelle terapie standard sono stati alquanto lenti.

Recettore dei folati

Il recettore del folato (FR), una glicoproteina di membrana di 38 kDa, è rappresentato da una famiglia omologa di glicoproteine, due delle quali (FR-a e FR-b) sono attaccate alla superficie cellulare da un'ancora di glicosil-fosfatidilinositolo; la terza isoforma (FR-) e la sua versione troncata (FR-9) sono costitutivamente secrete a causa della mancanza di un segnale efficiente per la modificazione del glicosil-fosfatidilinositolo. FR-a è espresso in alcune cellule epiteliali normali ed è elevato in alcuni carcinomi, mentre FR-b è un marcatore di differenziazione mieloide ed è elevato in alcuni tumori maligni non epiteliali. FR-9 è espresso nei tessuti ematopoietici. Al momento, la FR è al centro dell'attenzione come bersaglio del tumore per molteplici approcci sperimentali nella terapia del cancro. Un nuovo approccio utilizza anticorpi bifunzionali per indirizzare le cellule T al FR sulla superficie delle cellule di carcinoma ovarico. Con questo approccio è stata ottenuta l'inibizione selettiva della crescita delle cellule tumorali. Gli anticorpi chimerici, che si legano sia a FR che a CD3 o CD28, hanno prodotto risultati impressionanti in un modello xenogenico e in pazienti con carcinoma ovarico avanzato. Allo stesso modo, una molecola chimerica costituita da una catena singola, Fv di anticorpo anti-FR e interleuchina 2 era efficace nell'inibire la crescita tumorale in vivo. In alternativa, i coniugati di acido folico dell'anticorpo anti-recettore delle cellule T a catena singola potrebbero mobilitare la risposta delle cellule T contro i tumori ricchi di FR. Sfruttando la natura non distruttiva dell'internalizzazione mediata da FR di macromolecole accoppiate con folato, è stato dimostrato che citotossine come momordin, esotossina di Pseudomonas e maytansinoidi producono l'uccisione selettiva di cellule ricche di FR. Inoltre, la tossicità di tali coniugati dipendeva dalla densità del recettore sulla superficie cellulare. Anche i radiofarmaci coniugati con folato sembrano offrire un mezzo per l'imaging tumorale/radioterapia. È stato dimostrato che i liposomi rivestiti di folato colpiscono selettivamente le cellule tumorali ricche di FR e l'uccisione selettiva delle cellule maligne è stata ottenuta incapsulando la doxorubicina nei liposomi. Con una strategia simile, è stato possibile fornire oligonucleotidi antisenso contro il recettore del fattore di crescita epidermico a cellule tumorali ricche di FR. Inoltre, il targeting selettivo di un vettore adenovirale verso cellule tumorali ricche di FR è stato ottenuto in presenza di un anticorpo per l'ablazione del tropismo virale endogeno. Infine, diversi studi hanno dimostrato che FR, quando espresso ad alti livelli, potrebbe offrire la via di assorbimento preferita di nuove classi di farmaci antifolati che prendono di mira la glicinammide ribonucleotide formiltransferasi e la timidilato sintasi. Una forma solubile di FR è stata rilevata nel siero e nell'ascite di pazienti con carcinoma ovarico. È stato riportato che il FR è selettivamente sovraespresso nel 90% dei carcinomi ovarici non mucinosi e in alcuni altri tessuti maligni. Il recettore è stato rilevato solo in pochi altri tipi di cellule normali, ma non nel normale epitelio della superficie ovarica. Sembra che FR potrebbe essere un potenziale antigene bersaglio per l'immunoterapia del cancro ovarico.

Epitopi del recettore del folato per l'aplotipo umano

L'incidenza dell'aplotipo HLA-A2 è superiore al 50% nei paesi occidentali. L'incidenza dell'aplotipo HLA-A2 è di circa il 30% a Taiwan. Sono stati identificati gli epitopi specifici del recettore del folato nell'aplotipo HLA-A2. Sono rispettivamente E39 (FR, 191-199) EIWTHSTKV ed E75 (FR, 245-253) LLSLALMLL. Sembra che i recettori dei folati possano essere un antigene bersaglio per l'immunoterapia del carcinoma ovarico.

Il nostro team di ricerca si è concentrato per diversi anni sullo sviluppo di un vaccino contro il cancro e sull'immunoterapia. Le nostre strutture di laboratorio sono state anche istituite per valutare i test immunologici umani per l'antigene E7 del virus del papilloma umano di tipo 16 grazie alla sovvenzione sostenuta dal National Taiwan University Hospital. È molto importante impostare vari test immunologici specifici per il recettore dei folati sugli esseri umani per valutare l'effetto del vaccino antitumorale o dell'immunoterapia per il cancro ovarico nei futuri studi clinici. Quindi vorremmo fornire questa proposta per affrontare lo sviluppo di test immunologici specifici per il recettore dei folati negli esseri umani. Diversi sono gli obiettivi di questo progetto:

1. sviluppare e utilizzare saggi per misurare i CTL rispetto ai recettori dei folati e,
2. per valutare le risposte immunologiche specifiche del recettore del folato tra controlli normali e pazienti con carcinoma ovarico.