叶酸受体抗原特异性人体免疫学测定的发展

卵巢癌的发病率

卵巢癌是死亡率第一位的妇科恶性肿瘤，总体5年生存率仅为20-30%。 近年来成为越来越重要的疾病，台湾近年卵巢癌的发病率也有所增加。 症状的缺乏、早期诊断的困难、准确的肿瘤标志物不足以及卵巢肿瘤生物学信息的缺乏导致卵巢癌患者的预后不良。 卵巢癌的预后参数是肿瘤分期、组织学亚型、恶性程度和手术治疗后的残留肿瘤。 然而，这些因素呈现出卵巢癌肿瘤生物学的不完整图景，并且经常相互关联。 因此，鉴定预测个体病程和预后的新生物学因素将非常有用。 从上述数据来看，卵巢癌确实是一种值得尊重的疾病，但台湾却鲜有针对它的研究工作。

卵巢癌的治疗

上皮性卵巢癌 (EOC) 和卵巢外 Müllerian 癌是相似的病理实体，它们都倾向于累及腹膜腔。 这些肿瘤的扩散模式为免疫疗法带来了挑战和独特的机会。 在最佳手术分期后患有 I 期疾病（局限于卵巢）的 EOC 患者的 5 年生存率为 90%，10 年时无显着变化。 相比之下，扩散到卵巢以外的患者的中位生存率在手术和铂类联合化疗后有大块残留病灶的患者中降至 < 10%。 一项针对初始手术后残留肿块大于 1 cm 的 EOC 患者进行一线化疗的随机试验显示，顺铂/紫杉醇的中位生存期为 38 个月，明显大于顺铂/环磷酰胺治疗组的 24 个月。 在一项等效性试验的中期分析中，卡铂/紫杉醇治疗后的生存期并不比顺铂/紫杉醇治疗差。 尽管早期诊断是正在进行的临床研究工作的重要目标，但尚不清楚晚期 EOC 是否以涉及卵巢和腹膜表面的多中心过程开始。 现已确定遗传因素有助于 EOC 的发展。 种系 BRCA1 和 BRCA2 突变约占所有 EOC 的 10%。 在具有 BRCA 1 或 2 突变的女性中，卵巢癌的终生风险范围为 16%-44%。 随着 BRCA1 和 BRCA2 基因检测的商业可用性，越来越多的女性被确定为卵巢癌的高危人群。 对于这些人，没有明确的癌症预防指南。 尽管预防性卵巢切除术对于已生育的女性来说是一个合理的选择，但这些女性仍有患腹膜癌的风险。 显然，还需要其他预防措施。

卵巢癌的免疫疗法

在为 EOC 制定有效的基于免疫的策略时，应该区分预防和治疗方法。 预计将为 EOC 发展风险增加的女性开发免疫预防（免疫预防）。 相反，免疫疗法将用作手术的辅助手段，或与化学疗法或其他生物制剂联合使用，如化学免疫疗法或生物化学免疫疗法。 化疗后重新分期后疾病无法检测的患者可以考虑接受免疫治疗，假设大多数患者确实有微转移。 开发用于预防或治疗 EOC 的有效的基于免疫的概念将需要了解肿瘤免疫学原理、不断扩大的免疫调节分子阵列的作用机制、肿瘤抗原的鉴定和表征，以及可能影响肿瘤抗原的微环境因素的确定。对不同免疫效应机制的影响。 已经为临床研究人员提供了许多免疫导向剂，但将它们整合到标准疗法中的进展有些缓慢。

叶酸受体

叶酸受体 (FR) 是一种 38 kDa 的膜糖蛋白，由同源糖蛋白家族代表，其中两个（FR-a 和 FR-b）通过糖基-磷脂酰肌醇锚附着在细胞表面；第三种异构体 (FR-) 及其截短版本 (FR-9) 由于缺乏糖基-磷脂酰肌醇修饰的有效信号而组成性分泌。 FR-a 在一些正常上皮细胞中表达，并在某些癌中升高，而 FR-b 是一种骨髓分化标志物，在一些非上皮恶性肿瘤中升高。 FR-9 在造血组织中表达。 目前，FR 作为癌症治疗中多种实验方法的肿瘤靶点是一个主要焦点。 一种新方法使用双功能抗体将 T 细胞靶向卵巢癌细胞表面的 FR。 通过这种方法获得了肿瘤细胞的选择性生长抑制。 结合 FR 和 CD3 或 CD28 的嵌合抗体在异种模型和晚期卵巢癌患者中产生了令人印象深刻的结果。 类似地，由抗FR抗体的单链Fv和白细胞介素2组成的嵌合分子在体内有效抑制肿瘤生长。 或者，单链抗 T 细胞受体抗体的叶酸偶联物可以调动 T 细胞对富含 FR 的肿瘤的反应。 利用 FR 介导的叶酸偶联大分子内化的非破坏性特性，细胞毒素如苦瓜素、假单胞菌外毒素和美登木素被证明可以选择性地杀死富含 FR 的细胞。 此外，此类缀合物的毒性取决于细胞表面的受体密度。 叶酸结合的放射性药物似乎也提供了一种肿瘤成像/放射治疗方法。 叶酸包被的脂质体被证明可以选择性地靶向富含 FR 的肿瘤细胞，并且通过将阿霉素包裹在脂质体中来选择性地杀死恶性细胞。 通过类似的策略，可以将针对表皮生长因子受体的反义寡核苷酸递送至富含 FR 的肿瘤细胞。 此外，在存在消除内源性病毒嗜性的抗体的情况下，已经实现了将腺病毒载体选择性靶向富含 FR 的肿瘤细胞。 最后，几项研究表明，当 FR 以高水平表达时，可以为靶向甘氨酰胺核糖核苷酸甲酰转移酶和胸苷酸合酶的新型抗叶酸药物提供首选摄取途径。 已在卵巢癌患者的血清和腹水中检测到可溶形式的 FR。 据报道，FR 在 90% 的非粘液性卵巢癌和一些其他恶性组织中选择性过表达。 该受体仅在少数其他正常细胞类型中检测到，但在正常卵巢表面上皮细胞中未检测到。 看来FR可能是卵巢癌免疫治疗的潜在靶抗原。

人类单倍型叶酸受体表位

HLA-A2单倍型在西方国家的发生率超过50%。 HLA-A2单体型在台湾的发生率约为30%。 已经鉴定了 HLA-A2 单倍型中叶酸受体的特定表位。 它们分别是 E39 (FR, 191-199) EIWTHSTKV 和 E75 (FR, 245-253) LLSLALMLL。 看来叶酸受体可能是卵巢癌免疫治疗的靶抗原。

我们的研究团队多年来一直专注于癌症疫苗和免疫疗法的开发。 我们的实验室设施也已建立，以评估人类乳头状瘤病毒 16 型 E7 抗原的人体免疫学检测，并获得国立台湾大学医院的资助。 在未来的临床试验中，建立各种人类叶酸受体特异性免疫学检测，以评估癌症疫苗或卵巢癌免疫疗法的效果非常重要。 因此，我们想提供此提案以解决人类叶酸受体特异性免疫测定的发展问题。 这个项目有几个目标：

1. 开发和利用测定法来测量叶酸受体的 CTL，以及
2. 评估正常对照和卵巢癌患者之间的叶酸受体特异性免疫反应。