Разработка иммунологических анализов человека, специфичных для антигена рецептора фолиевой кислоты

Заболеваемость раком яичников

Рак яичников занимает первое место по смертности среди гинекологических злокачественных новообразований с общей 5-летней выживаемостью всего 20-30%. В последние годы это заболевание становится все более и более важным, и заболеваемость раком яичников также увеличилась в последние годы на Тайване. Отсутствие симптомов, трудности ранней диагностики, недостаточно точные онкомаркеры и отсутствие информации о биологии опухоли яичников способствуют неблагоприятному прогнозу у больных раком яичников. Прогностическими параметрами рака яичников являются стадия опухоли, гистологический подтип, степень злокачественности и остаточная опухоль после хирургического лечения. Однако эти факторы представляют собой неполную картину опухолевой биологии рака яичников и часто взаимосвязаны. Таким образом, идентификация новых биологических факторов, предсказывающих индивидуальное течение болезни и прогноз, была бы чрезвычайно полезной. Судя по приведенным выше данным, рак яичников действительно является заболеванием, которое следует уважать, однако на Тайване было проведено очень мало исследований, посвященных этому заболеванию.

Лечение рака яичников

Эпителиальный рак яичников (ЭРЯ) и экстраовариальная мюллерова карцинома являются сходными патологическими состояниями, которые имеют общее предпочтение поражения брюшной полости. Характер распространения этих опухолей представляет собой проблему и уникальные возможности для иммунотерапии. Пациенты с ЭРЯ, у которых есть стадия I заболевания (локализованная в яичниках) после оптимального хирургического стадирования, имеют 5-летнюю выживаемость 90% без существенных изменений через 10 лет. Напротив, у пациентов с распространением за пределы яичников медиана выживаемости снижается до < 10% для пациентов с массивным остаточным заболеванием после операции и лечения комбинированной химиотерапией на основе платины. Рандомизированное исследование химиотерапии первой линии у пациентов с ЭРЯ с остаточными образованиями более 1 см после первоначальной операции показало средний период выживаемости 38 месяцев для группы цисплатин/паклитаксел, что значительно больше, чем 24 месяца для группы лечения цисплатином/цитоксаном. В промежуточном анализе исследования эквивалентности выживаемость после комбинации карбоплатин/паклитаксел была не хуже, чем для комбинации цисплатин/паклитаксел. Несмотря на то, что ранняя диагностика является важной целью текущих клинических исследований, неясно, начинается ли прогрессирующий ЭРЯ как мультицентрический процесс, вовлекающий яичники и поверхность брюшины. В настоящее время установлено, что наследственные факторы способствуют развитию ЭРЯ. Мутации зародышевой линии BRCA1 и BRCA2 составляют примерно 10% всех EOC. У женщин с мутацией BRCA 1 или 2 пожизненный риск рака яичников колеблется от 16% до 44%. Благодаря коммерческой доступности генетического тестирования на BRCA1 и BRCA2 все больше женщин выявляются как подверженные высокому риску развития рака яичников. Четких рекомендаций по профилактике рака для этих людей не существует. Хотя профилактическая овариэктомия является разумным вариантом для женщин, завершивших деторождение, эти женщины все еще подвержены риску развития рака брюшины. Очевидно, что необходимы другие варианты профилактики.

Иммунотерапия рака яичников

При разработке эффективных иммунологических стратегий лечения ЭРЯ следует различать профилактические и терапевтические подходы. Предполагается, что иммунопрофилактика (иммунопрофилактика) будет разработана для женщин с повышенным риском развития ЭРЯ. Напротив, иммунотерапия может использоваться в качестве адъюванта к хирургическому вмешательству или в сочетании с химиотерапией или другими биологическими препаратами в качестве химиоиммунотерапии или биохимиоиммунотерапии. Пациенты с неопределяемым заболеванием после повторной стадии химиотерапии могут быть рассмотрены для иммунотерапии с предположением, что у большинства действительно есть микрометастазы. Разработка эффективных иммунологических концепций профилактики или лечения ЭРЯ потребует понимания принципов иммунологии опухолей, механизмов действия растущего набора иммуномодулирующих молекул, идентификации и характеристики опухолевых антигенов, а также определения факторов микроокружения, которые могут воздействие на различные иммунно-эффекторные механизмы. Клиническим исследователям было предоставлено множество иммунно-направленных агентов, но прогресс в их интеграции в стандартную терапию был несколько медленным.

Фолатный рецептор

Рецептор фолиевой кислоты (FR), мембранный гликопротеин с молекулярной массой 38 кДа, представлен гомологичным семейством гликопротеинов, два из которых (FR-a и FR-b) прикреплены к поверхности клетки гликозил-фосфатидилинозитоловым якорем; третья изоформа (FR-) и ее укороченная версия (FR-9) конститутивно секретируются из-за отсутствия эффективного сигнала для модификации гликозилфосфатидилинозитола. FR-a экспрессируется в некоторых нормальных эпителиальных клетках и повышен в некоторых карциномах, тогда как FR-b является маркером миелоидной дифференцировки и повышен в некоторых неэпителиальных злокачественных опухолях. FR-9 экспрессируется в гемопоэтических тканях. В настоящее время FR является основным направлением в качестве мишени опухоли для многочисленных экспериментальных подходов в терапии рака. В одном новом подходе используются бифункциональные антитела для нацеливания Т-клеток на FR на поверхности клеток карциномы яичника. С помощью этого подхода было получено селективное ингибирование роста опухолевых клеток. Химерные антитела, которые связываются как с FR, так и с CD3 или CD28, дали впечатляющие результаты в ксеногенной модели и у пациентов с распространенным раком яичников. Аналогично, химерная молекула, состоящая из одноцепочечного Fv антитела против FR и интерлейкина 2, эффективно ингибировала рост опухоли in vivo. Альтернативно, конъюгаты фолиевой кислоты с одноцепочечными антителами против Т-клеточного рецептора могут мобилизовать Т-клеточный ответ против опухолей, богатых FR. Используя преимущество неразрушающего характера FR-опосредованной интернализации макромолекул, связанных с фолиевой кислотой, было показано, что цитотоксины, такие как момордин, экзотоксин Pseudomonas и майтансиноиды, вызывают избирательное уничтожение клеток, богатых FR. Более того, токсичность таких конъюгатов зависела от плотности рецепторов на клеточной поверхности. Радиофармацевтические препараты, конъюгированные с фолиевой кислотой, также, по-видимому, являются средством визуализации опухоли/лучевой терапии. Было показано, что липосомы, покрытые фолиевой кислотой, избирательно нацеливаются на богатые FR опухолевые клетки, а селективное уничтожение злокачественных клеток достигается путем инкапсулирования доксорубицина в липосомы. С помощью аналогичной стратегии можно было доставить антисмысловые олигонуклеотиды против рецептора эпидермального фактора роста в опухолевые клетки, богатые FR. Кроме того, селективное нацеливание аденовирусного вектора на опухолевые клетки, богатые FR, было достигнуто в присутствии антитела, подавляющего эндогенный вирусный тропизм. Наконец, несколько исследований показали, что FR, когда он экспрессируется на высоких уровнях, может предложить предпочтительный путь поглощения новых классов антифолатных препаратов, которые нацелены на глицинамид-рибонуклеотид-формилтрансферазу и тимидилат-синтазу. Растворимая форма ФР обнаружена в сыворотке крови и асците больных раком яичников. Сообщается, что FR избирательно сверхэкспрессируется в 90% немуцинозных карцином яичников и в некоторых других злокачественных тканях. Рецептор был обнаружен только в нескольких других нормальных типах клеток, но не в нормальном поверхностном эпителии яичников. Представляется, что FR может быть потенциальным антигеном-мишенью для иммунотерапии рака яичников.

Эпитопы рецептора фолиевой кислоты для человеческого гаплотипа

Заболеваемость гаплотипом HLA-A2 составляет более 50% в западных странах. Заболеваемость гаплотипом HLA-A2 составляет около 30% на Тайване. Идентифицированы специфические эпитопы рецептора фолиевой кислоты в гаплотипе HLA-A2. Это E39 (FR, 191–199) EIWTHSTKV и E75 (FR, 245–253) LLSLALMLL соответственно. Похоже, что рецепторы фолиевой кислоты могут быть антигеном-мишенью для иммунотерапии рака яичников.

Наша исследовательская группа в течение нескольких лет занималась разработкой противораковой вакцины и иммунотерапии. Наши лабораторные помещения также были созданы для оценки иммунологических анализов человека на антиген E7 вируса папилломы человека типа 16 за счет гранта, поддержанного больницей Национального университета Тайваня. Очень важно провести различные иммунологические анализы, специфичные для фолатных рецепторов, на людях для оценки эффекта противораковой вакцины или иммунотерапии рака яичников в будущих клинических испытаниях. Таким образом, мы хотели бы представить это предложение, касающееся разработки иммунологических анализов, специфичных для рецепторов фолиевой кислоты, у людей. В этом проекте несколько целей:

1. разработать и использовать тесты для измерения ЦТЛ к рецепторам фолиевой кислоты и,
2. для оценки иммунологических реакций, специфичных для рецептора фолиевой кислоты, между нормальным контролем и пациентами с раком яичников.