Infekce lidským papilomavirem a genotypizace viru u rakoviny děložního čípku ve Venezuele (HPI)

Ve Venezuele je rakovina děložního čípku druhou nejčastější příčinou úmrtí na rakovinu u žen. Ve vyspělých zemích, i když to není první příčina úmrtnosti na rakovinu, zaujímá pozoruhodné místo v neoplastické patologii (Cannistra, 1996; Dey, 1998).

Human Papilloma Virus (HPV) se podílí na vzniku rakoviny děložního čípku, zejména onkogenních typů 16 a 18 (Koskela, 2000; Markowska, 1999).

Dodnes stále není známo, které typy HPV jsou ve Venezuele častější. Několik studií provedených v této zemi dospělo k závěru, že HPV 16 je převládajícím typem v cervikální patologii (Graterol 2006, Correnti 1997, Muñoz 2003), ale nebyla provedena genotypizace HVP, která by detekovala všechny typy zahrnuté u pacientek s rakovinou děložního čípku. Nebylo zjištěno, které typy HPV se častěji podílejí na genitálních bradavicích ve Venezuele.

Cílem tohoto výzkumu je provést genotypizaci HPV u karcinomu děložního čípku a cervikální intraepiteliální neoplazie 2 a 3 ve Venezuele s cílem zjistit, které typy jsou u nás častěji příbuzné tomuto onemocnění.

4. DESIGN STUDIE:

4.1. Odběr vzorků děložního čípku:

1. Předchozí souhlas etické komise (Instituto Venezolano de Investigaciones Cientificas a Instituto de Oncología Luis Razetti) odebereme parafínové bloky 300 pacientkám s histologickou diagnózou CIN 2-3 nebo I. stádia rakoviny děložního čípku.

Vzorky budou získány z archivů patologických jednotek následujících lékařských center ve Venezuele: Instituto de Oncología Luis Razetti, Anatomía Patológica Universidad Central de Venezuela (Caracas), Hospital Oncológico Pérez Carreño (Valencie), Maracaibo, Barquisimeto, Ciudad Bolívar, Puerto La Cruz, Mérida a Barinas.

Kritéria pro zařazení:

1. Parafinové bloky s CIN 2/3 a biopsie rakoviny děložního čípku stadia I získané v letech 2001 až 2011.
2. Správně blokuje identifikaci za účelem získání osobních a klinických informací o pacientovi.

4.2. Postupy molekulární biologie:

1. Histologická manipulace s tkání: předchozí identifikace patologických lézí, jak je popsáno v kritériích pro zařazení odborným patologem (vzorek s lézí, ale bez nekrózy), parafínový blok bude nařezán na 5 až 7 µm sklíčka s novými čepelemi a rukavicemi pro každý řez. Získá se 1 sklíčko, které bude distribuováno následovně: jeden vzorek bude zaslán Laboratorio de Virología Molecular del Instituto Venezolano de Investigaciones Científicas; zbývající vzorek bude v případě potřeby uchován pro další vyhodnocení. Každé sklíčko bude umístěno ve správné nádobě a bude označeno sériovým číslem, aby se zachovala intimita pacienta a zabránilo se zkreslení výsledků.
2. Deparafinizace, jak je popsáno v Coombs 1999.
3. Štěpení tkání, extrakce DNA a precipitace, jak je popsáno v Gravitt 2000.
4. Genotypizace HPV bude detekována systémem INNOLiPA. Výsledky budou korelovány s klinickými informacemi.