Infecção por Papilomavírus Humano e Genotipagem de Vírus no Câncer de Colo Uterino na Venezuela (HPI)

Na Venezuela, o câncer cervical é a segunda principal causa de mortalidade por câncer em mulheres. Nos países desenvolvidos, embora não seja a primeira causa de mortalidade por câncer, ocupa um lugar de destaque na patologia neoplásica (Cannistra, 1996; Dey, 1998).

O Papiloma Vírus Humano (HPV) está envolvido no desenvolvimento do câncer cervical, especialmente os oncogênicos tipos 16 e 18 (Koskela, 2000; Markowska, 1999).

Até o momento, ainda não se sabe quais tipos de HPV são mais frequentes na Venezuela. Vários estudos feitos neste país concluíram que o HPV 16 é o tipo predominante na patologia cervical (Graterol 2006, Correnti 1997, Muñoz 2003), mas não foi realizada uma genotipagem HVP para detectar todos os tipos envolvidos em pacientes com câncer cervical. Também não foi estabelecido quais tipos de HPV estão mais freqüentemente envolvidos em verrugas genitais na Venezuela.

O objetivo desta investigação é realizar uma genotipificação do HPV no câncer cervical e na neoplasia intraepitelial cervical 2 e 3 na Venezuela para determinar quais tipos estão mais frequentemente relacionados a esta doença em nosso país.

4. DESENHO DO ESTUDO:

4.1. Coleta de amostras cervicais:

1. Com a aprovação prévia do comitê de ética (Instituto Venezolano de Investigaciones Cientificas e Instituto de Oncología Luis Razetti), vamos coletar blocos de parafina de 300 pacientes com diagnóstico histológico de CIN 2-3 ou câncer cervical estágio I.

As amostras serão obtidas dos arquivos das Unidades de Patologia dos seguintes centros médicos na Venezuela: Instituto de Oncología Luis Razetti, Anatomía Patológica Universidad Central de Venezuela (Caracas), Hospital Oncológico Pérez Carreño (Valencia), Maracaibo, Barquisimeto, Ciudad Bolívar, Puerto La Cruz, Mérida e Barinas.

Critério de inclusão:

1. Blocos de parafina com CIN 2/3 e biópsias de câncer cervical em estágio I obtidas entre 2001 e 2011.
2. Bloqueia adequadamente a identificação para obter informações pessoais e clínicas do paciente.

4.2. Procedimentos de biologia molecular:

1. Manuseio histológico do tecido: identificação prévia das lesões patológicas conforme descrito nos critérios de inclusão por um patologista especialista (amostra com lesão, mas sem necrose), o bloco de parafina será cortado em lâminas de 5 a 7 µm com novas lâminas e luvas para cada corte. Será obtida 1 lâmina que será distribuída da seguinte forma: uma amostra será enviada ao Laboratório de Virología Molecular do Instituto Venezolano de Investigaciones Científicas; a amostra remanescente será guardada para posterior avaliação caso seja necessário. Cada lâmina será colocada em um recipiente próprio e será identificada por um número de série, a fim de preservar a intimidade do paciente e evitar resultados tendenciosos.
2. Desparafinização conforme descrito em Coombs 1999.
3. Digestão de tecidos, extração de DNA e precipitação conforme descrito em Gravitt 2000.
4. A genotipagem do HPV será detectada pelo sistema INNOLiPA. Os resultados serão correlacionados com informações clínicas.