Měření dopadu doplňku stravy s vysokým obsahem vlákniny, aleuronem s vysokým obsahem antioxidantů na biomarkery kardiovaskulárních onemocnění a střevní mikroflóry u dospělých s vysokým indexem tělesné hmotnosti

CÍLE STUDIE Obecným cílem studie je vyhodnotit, zda suplementace potravy bohatou na aleuron z pšenice modifikuje profil kardiovaskulárního a metabolického rizika u subjektů se zvýšeným metabolickým rizikem.

Primárními cíli studie je vyhodnotit, zda doplněk stravy bohatý na pšeničný aleuron modifikuje:

1. celkový plazmatický homocystein (tHcy)
2. plazmatické metabolity související s metabolismem homocysteinu (včetně betainu, dimethylglycinu, methioninu, cholinu, folátu, riboflavinu, vitaminu B6);
3. sekundární polyfenolové metabolity lidské biofluidní (odvozené od mikrobioty);
4. koncentrace fekálních žlučových kyselin a fekálních sterolů.
5. profil fekální mikroflóry vytvořený pomocí sekvenování Illumina

Sekundárními cíli je vyhodnotit, zda doplněk stravy bohatý na pšeničný aleuron upravuje:

1. profilování metabolitů na bázi MS v plazmě a moči;
2. hladiny celkového cholesterolu, triglyceridů, LDL- a HDL-cholesterolu;
3. hladiny glukózy a inzulínu v séru;
4. antropometrické indexy;
5. hladiny izoprostanu v moči;
6. markery střevní permeability v plazmě;

7. Hladiny C-reaktivního proteinu jako marker zánětu

   Přehled návrhu studie a koncové body Studie je nastavena jako placebem kontrolovaná, randomizovaná, dvojitě zaslepená paralelní studie se 2 testovacími potravinami, pšeničnými potravinami bohatými na aleuron nebo kontrolními potravinami (placebo). Primární a sekundární cílové parametry jsou uvedeny ve výše uvedené části CÍLE STUDIE.

   Přehled designu Účastníci budou identifikováni a přijati na U.O.S. di Dietetica a Nutrizione Clinica, St Chiara, APSS Trento a Fondazione Edmund Mach. Účastníci budou informováni o cílech a postupech studie a budou předem prověřeni na základě kritérií pro zařazení/vyloučení. V případě způsobilosti podepíší informovaný souhlas a vstoupí do studie s návštěvou T-1, prováděnou na klinice mezi 8.00 a 9.00 hod., kde bude provedeno klinické a biochemické hodnocení zdravotního stavu. Pokud jsou subjekty stále způsobilé pro studii podle všech vylučovacích kritérií, budou zařazeny do studie a randomizovány tak, aby dostávaly aktivní suplementaci nebo placebo při návštěvě T0, o 2 týdny později (období záběhu). Při návštěvách T-1 a T0 bude poskytnuto dietní poradenství. Účastníkům bude doporučeno dodržovat středomořské stravovací návyky a praktikovat mírnou fyzickou aktivitu.

   Klinická návštěva, klinické testy a odběr krve budou provedeny po celonočním hladovění na začátku zaváděcí fáze (návštěva T-1). Při návštěvě T0 (2. týden) a T1 (6. týden) budou provedeny klinické testy, odběr krve, stolice a moči. Před návštěvou T0 a T1 budou účastníci studie distribuovat a čtyři po sobě jdoucí dny rozdávat čtyřdenní potravinový deník.

   Každý účastník bude podroben:

   • Klinické a biochemické vyšetření k vyloučení možného stavu onemocnění (T-1, týden 0): anamnestický dotazník, EKG, hemokrom, kreatinin, jaterní enzymy.
   • Odběr krve (30 ml) pro biochemické analýzy (T-1 - týden 0-, T0 - týden 2- a T1 - týden 6-).
   • Sběr stolice a moči za 24 hodin pro biochemické analýzy (T0 - týden 2- a T1 - týden 6-).
   • Antropometrické hodnocení: systolický a diastolický krevní tlak, tepová frekvence, výška a hmotnost pro výpočet BMI a obvod pasu a boků (T-1 -týden 0-, T0 - týden 2- a T1 - týden 6-).

   Všechny návštěvy proběhnou na klinice mezi 8:00 a 9:00, nalačno. Každá návštěva bude trvat cca 1 hodinu. Účastníci budou požádáni, aby neupravovali svou současnou stravu, s výjimkou zavedení suplementů jako náhrady za odpovídající potraviny. Budou také požádáni, aby se vyhýbali lékům, doplňkům a integrátorům a aby okamžitě informovali monitory o jakémkoli stavu onemocnění nebo změnách v předepisování léků (nové nebo současné lékové terapie).

   Nábor účastníků Účastníci budou identifikováni a přijati na U.O.S. di Dietetica a Nutrizione Clinica, St Chiara, APSS Trento a Fondazione Edmund Mach. Budou mezi nimi pracovníci jak institucí, tak veřejnost. Účastníci budou informováni o cílech a postupech studie a budou předem prověřeni na základě kritérií pro zařazení/vyloučení. V případě způsobilosti podepíší informovaný souhlas a vstoupí do studie s návštěvou T-1, během níž bude provedeno klinické a biochemické hodnocení zdravotního stavu. Pokud subjekty zůstanou způsobilé pro studii podle všech kritérií pro zařazení/vyloučení, budou zařazeny do studie a randomizovány tak, aby dostávaly aktivní suplementaci nebo placebo při návštěvě T0, o dva týdny později (období záběhu).

   Suplementace Po dvoutýdenní zaváděcí fázi budou účastníci randomizováni tak, aby dostávali suplementaci buď jídlem bohatým na pšeničný aleuron nebo placebem po dobu čtyř týdnů dvojitě zaslepeným způsobem.

   Dietní poradenství Dietní poradenství bude poskytnuto při návštěvách T-1 a T0. Účastníkům bude doporučeno dodržovat středomořské stravovací návyky a praktikovat mírnou fyzickou aktivitu.

   Sledování Intervence bude zahrnovat čtyřtýdenní období léčby. Klinická návštěva, klinické testy a odběr krve budou provedeny po celonočním hladovění při návštěvě T-1 - týden 0-. Klinické testy, odběr krve a odběr stolice a moči budou provedeny při návštěvě T0 a T1 (T0 den před suplementací, T1 bude 4. týden po léčbě buď potraviny s přídavkem aleuronu nebo potraviny s placebem). Při návštěvě T-1 bude podán jednoroční dotazník o četnosti jídla. Před návštěvou T0 a T1 bude proveden týdenní dotazník o četnosti jídla.

   Klinické hodnocení Elektrokardiogram. Při screeningu bude provedeno 12svodové EKG. Elektrokardiografy budou přezkoumány a interpretovány U.O.S. di Dietetica a Nutrizione Clinica, St Chiara, APSS Trento.

   Arteriální krevní tlak (BP) bude měřen podle pokynů pro hypertenzi ISH/WHO 2004. Bude použit 'OMRON HEM705CP Oscilometrický monitor krevního tlaku'. Subjekty budou ponechány v klidu a sedět po dobu 10 minut před měřením krevního tlaku na pravé paži; První opatření bude zrušeno; druhé a třetí opatření bude následovat po prvním po 2 minutách, na uvolněné a nahé paži as úhlem paže ve stejné úrovni srdce. Pro analýzu bude použit průměr posledních dvou měření.

   Hmotnost a výška budou měřeny na standardní stupnici s připojeným výškoměrem pro měření výšky a budou zaznamenány jako nejbližší 100 g a 1 cm, je-li to nutné. Opatření budou prováděna na subjektech bez bot, kabátů nebo těžkého oblečení. BMI se vypočítá jako kg/m2.

   Obvod pasu (umbilikální) bude měřen podle Národního institutu zdraví, Národního institutu srdce, plic a krve. Klinické pokyny pro identifikaci, hodnocení a léčbu nadváhy a obezity u dospělých; důkazní zpráva. V praxi, kdy subjekt stojí vzpřímeně s uvolněným břichem, paží po stranách a chodidly u sebe, bude obvod pasu měřen s přesností na 0,1 cm na úrovni uprostřed mezi dolním okrajem žebra a hřebenem kyčelního kloubu. páskou po celém těle ve vodorovné poloze. Obvod boků bude měřen na bitrochanterické úrovni. Vypočítá se poměr obvodu pasu k obvodu boků (WHR).

   Dotazníky. Všechny informace budou shromážděny a zaznamenány do ověřených dotazníků, včetně osobní identifikace, anamnézy a informací o rizikových faktorech KVO, užívání drog, fyzické aktivitě a stravovacích návycích. Kromě toho bude shromažďován třídenní deník jídla.

   Odběr krve a odběr moči Pacientům, kteří se zdrželi kouření po dobu alespoň 6 hodin, bude odebrána krev (≤ 30 ml) z antekubitální žíly s minimální stází mezi 8:00 a 9:00 po 12 hodinách nalačno. Od každého účastníka bude odebrána moč za 24 hodin. Změří se objem moči a 5 alikvotů po 5 ml se uloží při -80 °C.

   Odběr vzorků stolice Vzorky stolice budou zpracovány do 2 hodin od výroby vzorku. Stručně, 1 g alikvoty stolice budou později smíchány s RNA a uloženy při -80 °C pro pozdější DNA. Vzorky stolice budou také zmraženy přímo na -80 °C pro analýzu metabolitů.

   Laboratorní testy (U.O.S. di Dietetica e Nutrizione Clinica, St Chiara, APSS Trento) Vzorky krve budou centrifugovány podle požadavků testů, které mají být provedeny, ihned po odběru krve. Plazma nebo sérum budou odděleny, zčásti okamžitě testovány a zbývající frakce uložena při -80°C.

   Cholesterol, triglyceridy, HDL cholesterol a glukóza budou hodnoceny chromogenními testy. LDL cholesterol bude vypočítán podle Friedewaldova vzorce.

   Hladiny inzulínu budou hodnoceny pomocí ELISA. Počet krvinek bude hodnocen standardními testy. C-RP bude měřen nefelometrickými testy; F2-isoprostany budou měřeny v moči jako míra oxidačního stresu, specifickou soupravou EIA (Cayman Chemicals, Ann Arbor, Michigan, USA), po čištění chromatografií na pevné fázi (kolony SepPack).

   Laboratorní testy (Fondazione Edmund Mach [FEM]) Plazmový LPS, LPS specifický IgG, CD14, LPS-vazebný protein a 8-Isorpostan v moči budou měřeny spektrofotometricky pomocí komerční soupravy ELISA.

   Profilování metabolitů v moči a plazmě (FEM). Vzorky moči a krve (plazmy a séra) budou podrobeny jak cílené metabolomice (UPLC-MS/MS pro netěkavé sloučeniny a GC-MS/MS pro těkavé sloučeniny), tak necílené metabolomice (ULPC-Q-TOF-MS a Nano -FTMS-Q-TOF pro netěkavé a GC-TOF pro těkavé sloučeniny) (Vanza et al., 2001 2012). Pro cílené profilování metabolitů plazmy bude použita souprava Biocrates AbsoluteIDQ® p180 na bázi MS, která generuje přesné kvantitativní údaje o 180 lidských metabolitech souvisejících s rizikem onemocnění diabetem. Rovněž bude aplikována specifická cílená analýza pro kvantifikaci sérových lipidových profilů, žlučových kyselin, SCFA a mikrobiálních polyfenolových metabolitů v biofluidách (včetně stolice) pomocí UPLC/QqQ-MS/MS (Vrhovsek et al., 2012).

   Analýza fekální mikroflóry (FEM). Změny fekální mikrobiologie budou hodnoceny pomocí 454 pyrosekvenační metagenomiky. Stručně řečeno, po dodání vzorků stolice bude metagenomická DNA extrahována pomocí FastDNA SPIN Kit for FECES od MPbio.com. Pomocí univerzálních bakteriálních primerů bude oblast V1-V3 včetně genu 16S rRNA přítomného ve fekální metagenomické DNA amplifikována a podrobena 454-pyrosequenování. Adaptéry multiplexních identifikátorů (MID) budou použity pro sadu GS FLX Titanium Chemistry - Extended MID Set k získání sekvencí o délce asi 600 bp, které budou BLASTOVÁNY proti veřejně dostupným 16S rRNA fylogenetickým databázím pomocí potrubí QIIME (http://qiime.org / ) poskytování dobré druhové identifikace lidské střevní mikroflóry. Cílem je celkem 20 000 použitelných sekvencí na vzorek stolice. Po kontrole kvality a mikrobiální ekologické analýze budou použity vícerozměrné statistiky ke korelaci změn ve složení a struktuře fekální mikroflóry u subjektů po konzumaci potravin doplněných aleuronem ve srovnání s kontrolními potravinami (De Filippo et al., 2010). K potvrzení změn v mikrobiálních populacích identifikovaných z pyrosekvenačních metagenomických dat bude použita kvantitativní PCR s druhově a skupinově specifickými primery. Pomocí qPCR budou spočítány celkové bifidobakterie, celkové enterobakterie, celkové bakterie a laktobacily ve všech vzorcích stolice. To bude minimum a bude fungovat jako nezávislá kontrola kvality pyrosekvenování. Kromě toho a v závislosti na tom, co je vidět z hlediska změn na úrovni druhu z pyrosekvenování, budou použity druhově specifické primery pro potvrzení všech statisticky významných rozdílů pozorovaných při srovnání mezi aleuronem a kontrolními časovými body krmení.

   Randomizace a zaslepení Účastníci rozvrstvení podle pohlaví budou randomizováni k léčbě aleuronem nebo placebem podle elektronicky generovaného čísla poskytnutého statistikem. Kliničtí výzkumníci a laboratorní personál budou zaslepeni ohledně randomizace.

   Studijní produkty (chlebová mouka, sušenky, cereálie RTE) dodá společnost Cargill zaslepeným způsobem, ale označí je buď E nebo W, aby se odlišily úpravy. Testované produkty budou baleny v podobných obalech a v denních porcích. Placebo potraviny obsahují stejné složky jako aktivní potraviny s výjimkou celulózy nahrazující aleuron a jsou velmi podobné druhému ve velikosti, tvaru a barvě.

   Léčba Suplementace studie bude zavedena do denní stravy podle preference účastníka na celkovou dávku 27 g aleuronu/den nebo ekvivalentní dávku placeba. Jeden krajíc chleba (35 g) obsahuje 4,8 g aleuronu; jedna sušenka (15 g) obsahuje 4,5 g aleuronu; 36 g cereálií RTE obsahuje 9 g aleuronu. Placebo potraviny obsahují stejné přísady jako aktivní potraviny s výjimkou celulózy nahrazující obsah vlákniny aleuronu a jsou velmi podobné posledně jmenované ve velikosti, tvaru a barvě. Studované produkty (aktivní nebo placebo) budou poskytovány v obalech produktů, které budou označeny v místním jazyce s kódovým číslem studie, kódovým číslem místa, jménem výrobce, číslem pacienta, číslem studijní návštěvy, číslem šarže, pokyny pro skladování a data vypršení platnosti. Produkty budou účastníkům vydány při návštěvě T0.

   Délka a rozvrh studie Po dvoutýdenní zaváděcí fázi budou účastníci randomizováni do skupiny s jídlem suplementovaným Aleuronem nebo do skupiny s placebem na 4 týdny dietní intervence.

   Celková doba trvání studie, včetně záběhu a léčby, bude 6 týdnů. Nábor subjektů bude zahájen po příznivém posouzení výzkumnou a etickou komisí APSS a první subjekty zahájí zaváděcí období do dvou týdnů od tohoto počátečního bodu. Subjekty budou přijímány po dobu 6 měsíců a studie bude dokončena do 8 měsíců od doby náboru prvního subjektu.

   Kritéria pro ukončení V souladu s Helsinskou deklarací, směrnicemi ICH pro správnou klinickou praxi a předpisy Úřadu pro kontrolu potravin a léčiv (FDA) Spojených států má subjekt právo kdykoli z jakéhokoli důvodu odstoupit ze studie, aniž by byla dotčena jeho budoucí lékařskou péči lékařem nebo v ústavu. Zkoušející a sponzor mají také právo odvolat subjekty ze studie (viz níže). Sponzor se navíc může rozhodnout studii ukončit kdykoli a z jakéhokoli důvodu.

   Pokud se subjekt (nebo jeho zákonně oprávněný zástupce) rozhodne odstoupit, bude vynaloženo veškeré úsilí k tomu, aby byla pozorování dokončena a nahlášena co nejdůkladněji. Úplné závěrečné hodnocení by mělo být provedeno v době, kdy subjekt odstoupil, měl by být zaznamenán důvod odstoupení a měl by být učiněn pokus o provedení následného hodnocení.

   Subjekty mohou být ze studie vyloučeny z následujících důvodů:

   • závažné porušení protokolu ze strany vyšetřovatele
   • významný nesoulad ze strany subjektu
   • odmítnutí subjektu pokračovat v léčbě nebo pozorování
   • nepřijatelná toxicita
   • rozhodnutí zkoušejícího, že ukončení je v nejlepším lékařském zájmu subjektu
   • nesouvisející zdravotní onemocnění nebo komplikace
   • těhotenství
   • důkaz o zneužívání alkoholu nebo návykových látek Subjekty, které přeruší studii nebo jsou ze studie vyřazeny, nebudou nahrazeny.

   Postup pro předčasné ukončení

   Pokud subjekt přeruší před dokončením studie, bude získán důvod a datum přerušení. Bude také získáno datum poslední dávky studijního produktu. V případě předčasného přerušení by měly být provedeny následující postupy:

   • Klinické testy (systolický a diastolický krevní tlak, tepová frekvence, výška a hmotnost pro výpočet BMI a obvod pasu a boků),
   • Odběr krve, stolice a moči
   • Týdenní dotazník pro stažení jídla V případě, že se subjekt nemůže vrátit na následnou návštěvu, místo by se mělo pokusit subjekt kontaktovat telefonicky a sledovat případné nežádoucí účinky.

   Pokud subjekt odvolá souhlas s přijímáním studijního produktu, bude mu doporučeno, aby zůstal ve studii bez léčby za účelem shromažďování údajů o bezpečnosti.

   Postupy odpovědnosti za produkt studie Produkty studie (aktivní nebo placebo) budou poskytovány v obalech produktů, které budou označeny v místním jazyce kódovým číslem studie, kódovým číslem místa, jménem výrobce, kódovým číslem produktu, číslem studijní návštěvy , číslo šarže, pokyny pro skladování a data expirace. Produkty budou účastníkům vydány při návštěvě T0. Chléb bude zmrazen v porcích po 2 bocháncích a sušenky budou zmrazeny v porcích po 2 sušenkách, které si účastníci před konzumací doma rozmrazí.

   Údržba náhodných kódů Randomizační kódy pro účastníky budou uchovávány v zapečetěné obálce na FEM. Informace o kódu produktu budou u společnosti Cargill uloženy v zapečetěné obálce.

   Kontrola zdrojových dat Všechna data shromážděná v průběhu studie budou získána z primárních zdrojů, které byly zaznamenány v písemných a elektronických dokumentech, jako je lékařská dokumentace subjektu. Výsledky klinických vyšetření, laboratorní nálezy a EKG záznamy budou zaznamenány do elektronické zdravotní dokumentace subjektu. Žádná data nebudou vložena přímo do formuláře zprávy o případu (CRF), aniž by byla přenesena z nějakého jiného předchozího zdroje, jako jsou písemné nebo elektronické záznamy.

   Výběr a stažení subjektů Kritéria pro zařazení Alespoň jedna z následujících podmínek: Věk 18-65 let; BMI >27 kg/m^2. Kritéria vyloučení Subjekty mají být vyloučeny z účasti ve studii, pokud splňují kterékoli z následujících kritérií vyloučení: glykémie nalačno >300 mg/dl; triglyceridy >500 mg/dl; nekontrolovaná hypertenze (TK >160/100 mm Hg při antihypertenzní léčbě); kardiovaskulární onemocnění (infarkt myokardu, perkutánní transluminální koronární angioplastika nebo bypass koronární arterie, nestabilní angina pectoris, mrtvice, onemocnění periferních tepen); hypo- nebo hypertyreóza; akutní zánětlivá onemocnění; těžká gastrointestinální onemocnění; selhání srdce, jater, ledvin nebo plic nebo jiné život ohrožující onemocnění s prognózou < 5 let; chronické užívání systémových kortikosteroidů, antikoagulancií, protizánětlivých léků nebo léků snižujících hladinu lipidů a antidiabetik; léčba během předchozích 6 týdnů jakýmkoliv lékem, o kterém je známo, že ovlivňuje hladiny lipoproteinů nebo fekální mikroflóru (konkrétně antibiotika); potravinové intolerance; příjem alkoholu >5 nápojů denně nebo užívání omamných látek; užívání antioxidačních vitaminových nebo minerálních doplňků; speciální dieta; těhotenství, kouření.

   Souběžná léková terapie Jakákoli terapie, kterou subjekt obdržel během jednoho měsíce před začátkem studie a/nebo podávaná během studie, bude považována za souběžnou terapii. Takové ošetření musí být zdokumentováno na příslušné stránce CRF a v lékařských záznamech subjektů. Jakékoli změny souběžné terapie během studie musí být jasně zaznamenány a důvod změny by měl být zdokumentován.

   Během studie nebude povoleno použití následujících léků:

   Kortikosteroidy, antikoagulancia, protizánětlivé léky, léky snižující hladinu lipidů a antidiabetika; jakékoli léky, o kterých je známo, že ovlivňují hladiny lipoproteinů nebo fekální mikroflóru (konkrétně antibiotika), doplňky stravy, probiotika, prebiotika nebo bylinky, s výjimkou zvládání nežádoucích účinků.

   Compliance u subjektů [0072] Pro hodnocení kompliance se suplementací budou měřeny močové fenoly u subjektů suplementovaných potravou bohatou na aleuron v čase TO a T1. Kromě toho budou všechny nepoužité nebo prázdné balíčky na konci každého týdne spolu s vlastním záznamem použitých porcí vráceny vyšetřovatelům.

   Zaznamenávání a hlášení nežádoucích příhod Nežádoucí příhody Nežádoucí příhody, vyžádané i nevyžádané, budou zaznamenávány v průběhu studie a po dobu 30 dnů po posledním ošetření studijními produkty.

   Nežádoucí příhoda (AE) je jakákoli fyzická nebo klinická změna nebo onemocnění, které subjekt pociťuje kdykoli v průběhu studie, ať už se to považuje za související nebo nesouvisející s použitím studovaného produktu. To zahrnuje nástup nové nemoci a exacerbaci již existujících stavů. Abnormální laboratorní hodnoty nebo výsledky testů by obecně neměly být považovány za AE, pokud nevyvolávají klinické příznaky nebo symptomy nebo nevyžadují terapeutickou intervenci. Nežádoucí události budou pečlivě sledovány, dokud nebudou vyřešeny.

   Doslovný popis příhody, její vztah ke studovanému produktu a zda byla příhoda zaznamenána také jako závažná nežádoucí příhoda (SAE) musí být uvedena v CRF nežádoucích příhod pro každou AE zaznamenanou v tabulce subjektu. Jakékoli nežádoucí účinky, které se vyskytnou po prvním postupu studie a během celého průběhu studie, během postupu závěrečné studie, by měly být hlášeny, ať už se má za to, že souvisí s produktem studie, či nikoli. Každý záznam musí obsahovat datum a čas zahájení a ukončení, závažnost, závažnost, vztah ke studijnímu produktu a akci/výsledek. Všechny nežádoucí účinky by měly být zaznamenávány pomocí terminologie definované v lékařském slovníku pro regulační činnosti (MedDRA), verze 10.

   Statistické analýzy Plánovaný zápis a zdůvodnění Velikost vzorku 34 byla určena k detekci změny 0,4 μmol/l celkového homocysteinu (tHcy) v plazmě se standardní odchylkou 0,5 μmol/l (převzato z Price et al., 2010) pomocí Snedecor a Cochranova rovnice s a 0,05 a 1-p 0,9 (Dell et al., 2002). Vezmeme-li v úvahu předchozí studii s aleuronem u zdravých jedinců podle Price et al., (2010), a potřebu zohlednit případy, kdy předčasně ukončili studium, navrhujeme v této studii přijmout 40 jedinců na léčebnou skupinu.

   Pro každou skupinu budou uvedeny bazální charakteristiky. Případné zbytkové rozdíly mezi aktivní stravou a skupinou s placebem po randomizaci budou zváženy pro úpravu v multivariabilních modelech ve všech dalších analýzách. Spojité proměnné budou vyjádřeny jako průměry +/- směrodatná odchylka nebo mediány s mezikvartilovými rozpětími a v procentech u kategoriálních proměnných. Data po intervenci budou porovnána pomocí ANOVA s použitím obecného lineárního modelu se základní linií jako kovariátou. Data se zkresleným rozložením budou před analýzou logaritmicky transformována. Pro stanovení vztahů mezi proměnnými bude použita jednoduchá a vícenásobná lineární regrese a nezávislé t-testy provedené k vyhodnocení rozdílů v udávané shodě mezi skupinami. Výsledky budou vyjádřeny jako průměr +/- SEM a rozdíly budou považovány za významné při P < 0,05.

   Pro analýzu primárních cílových bodů bude přijat princip „intention to treat“: hodnocení účinnosti bere v úvahu počáteční randomizaci nezávisle na dodržování léčby subjektu.

   Hlavní analýza bude založena na srovnání rozdílu středních hladin na konci studie u subjektů suplementovaných aktivními potravinami a subjektů, kterým bylo podáváno placebo.

   Hlavní analýza bude založena na srovnání rozdílu v průměrných hladinách na konci studie u subjektů suplementovaných aktivními potravinami a u placebových potravin suplementovaných.

   Časové rozdíly mezi léčebnými rameny budou vyhodnoceny analýzou rozptylu pro opakovaná měření (postup GLM, SAS Institute Inc. Uživatelská příručka SAS/STAT, verze 9.1.3 pro WINDOWS. Cary, NC: SAS Institute Inc. 1989).

   Hladina významnosti bude alfa=0,05 dvouocasý.

   Demografické a výchozí charakteristiky Demografické a výchozí charakteristiky, včetně, ale bez omezení na ně, věku, pohlaví, rasy, etnického původu, tělesné hmotnosti, výšky a indexu tělesné hmotnosti, krevního tlaku a stravovacích návyků budou zpracovány pomocí deskriptivních statistik Základní hodnocení Jakékoli abnormální nálezy na základním elektrokardiogramu hodnocení, screening léků nebo screening virů budou shrnuty popisně.

   Laboratorní hodnoty Laboratorní údaje z každého odběru vzorků a změny od výchozí hodnoty budou pro každou návštěvu shrnuty podle průměru, mediánu, standardní odchylky, minima a maxima.

   PŘÍMÝ PŘÍSTUP KE ZDROJOVÝM ÚDAJŮM/DOKUMENTŮM Regulační orgány si mohou přát provést audity činností klinického výzkumu za účelem vyhodnocení souladu se zásadami GCP. Regulační orgán si také může přát provést inspekci (během studie nebo i po jejím dokončení). Je-li kontrola požadována regulačním orgánem a/nebo IRB, musí zkoušející neprodleně informovat sponzora nebo jeho pověřenou osobu. Zkoušející musí souhlasit s poskytnutím přístupu regulačním orgánům k dokumentaci související se studií. Zkoušející umožní sponzorovi pomáhat při odpovídání na jakékoli citace a rovněž přijímat kopie jakýchkoli dokumentů poskytnutých inspektorovi/auditorovi.

   ETIKA Institucionální kontrolní komise/etická komise Před implementací této studie bude protokol a informovaný souhlas přezkoumán Comitato etico per le Sperimentazioni Cliniche c/o APSS di Trento. Před zahájením studie musí být na místě uloženo podepsané a datované prohlášení, že protokol a informovaný souhlas byly schváleny Comitato etico per le Sperimentazioni Cliniche c/o APSS di Trento. Na webu musí být rovněž uveden seznam členů Comitato etico per le Sperimentazioni Cliniche c/o APSS di Trento. Jakékoli změny protokolu, jiné než administrativní, musí být schváleny Comitato etico per le Sperimentazioni Cliniche c/o APSS di Trento.

   Informovaný souhlas Formuláře informovaného souhlasu budou podepsány.

   Zveřejnění a důvěrnost Podpisem protokolu Vyšetřovatel souhlasí s tím, že bude veškeré informace poskytnuté společností Cargill uchovávat v přísné důvěrnosti a bude vyžadovat podobnou důvěrnost od svých zaměstnanců a IRB.

   Studijní dokumenty poskytnuté společností Cargill (protokoly, brožury pro zkoušejícího a další materiály) budou náležitě uloženy, aby byla zajištěna jejich důvěrnost. Informace poskytnuté společností Cargill zkoušejícímu nesmějí být poskytnuty jiným osobám bez přímého písemného souhlasu společnosti Cargill, s výjimkou rozsahu nezbytného k získání informovaného souhlasu od subjektů, které se chtějí zúčastnit studie.

   ZPRACOVÁNÍ DAT A VEDENÍ ZÁZNAMŮ Zdrojová data/dokumentace jsou definována jako první místo, kde jsou data zaznamenávána. Veškeré zdrojové dokumenty musí být udržovány a musí být možné je na místě získat. Zkoušející musí uchovávat zdrojové dokumenty pro každý předmět studie.

   Údaje shromážděné o CRF během studie budou zdokumentovány anonymním způsobem a subjekty budou identifikovány pouze čísly subjektů a iniciálami. Pokud je výjimečně z bezpečnostních nebo regulačních důvodů nutné identifikovat subjekt, společnost Cargill a zkoušející jsou povinni zachovat tyto informace v tajnosti.

   Všechny údaje zapsané na CRF musí být čitelně zaznamenány černým inkoustem. Je-li nutná oprava, měla by být provedena přeškrtnutím nesprávného záznamu jedním řádkem a zadáním správných informací vedle něj. Opravu musí parafovat a datovat zkoušející nebo určená kvalifikovaná osoba. Jakékoli požadované informace, které nejsou získány tak, jak je uvedeno v protokolu, by měly mít vysvětlení pro vynechání uvedené v CRF. Kopie CRF každého subjektu spolu se souvisejícími dotazy musí být uchovávána v místě studie.

   Všechny informace o CRF musí být vysledovatelné ke zdrojovým dokumentům, které jsou obecně vedeny ve složce subjektu. Zdrojové dokumenty by měly obsahovat všechny demografické a lékařské informace včetně laboratorních údajů, EKG atd. a také kopii podepsaného formuláře informovaného souhlasu, který by měl obsahovat číslo studie a název studie.

   Základní dokumenty, jak jsou uvedeny níže, musí zkoušející uchovat po dobu, kterou Cargill určí na začátku studie. Cargill uvědomí zkoušejícího/instituci, když záznamy týkající se studie již nebudou vyžadovány. Vyšetřovatel podpisem protokolu souhlasí s dodržováním postupů uchovávání dokumentů. Mezi základní dokumenty patří mimo jiné protokoly, reklamní materiály, zprávy o AE, zdrojové záznamy předmětu, korespondence IRB, formuláře souhlasu, životopisy, protokoly monitorovacích návštěv, laboratorní záznamy, referenční rozsahy, certifikace, dokumentace kontroly kvality a jakékoli další příslušné dokumenty.

   Jakákoli změna nebo doplnění tohoto protokolu vyžaduje písemný dodatek protokolu, který musí být před implementací schválen společností Cargill. Pokud dojde k podstatným změnám v návrhu studie, musí být IRB oznámeno, a je-li to nutné, schválit změnu před zařazením nových subjektů.

   Všechny postupy správy dat budou podrobně popsány v samostatných, konkrétně identifikovaných souborech, které budou souhrnně označovány jako Plán správy dat (DMP).