Medición del impacto de la suplementación dietética con aleurona alta en fibra y antioxidante en biomarcadores de enfermedades cardiovasculares y microbiota intestinal en adultos con índice de masa corporal alto

OBJETIVOS DEL ESTUDIO El objetivo general del estudio es evaluar si la suplementación con alimentos ricos en aleurona de trigo modifica los perfiles de riesgo cardiovascular y metabólico en sujetos con riesgo metabólico elevado.

Los objetivos principales del ensayo son evaluar si la suplementación con alimentos ricos en aleurona de trigo modifica:

1. homocisteína plasmática total (tHcy)
2. metabolitos plasmáticos relacionados con el metabolismo de la homocisteína (incluyendo betaína, dimetilglicina, metionina, colina, folato, riboflavina, vitamina B6);
3. metabolitos de polifenoles secundarios (derivados de microbiota) de biofluidos humanos;
4. concentraciones fecales de ácidos biliares y esteroles fecales.
5. perfil de microbiota fecal generado mediante secuenciación Illumina

Los objetivos secundarios son evaluar si la suplementación con alimentos ricos en aleurona de trigo modifica:

1. perfiles de metabolitos basados ​​en MS en plasma y orina;
2. niveles de colesterol total, triglicéridos, colesterol LDL y HDL;
3. niveles séricos de glucosa e insulina;
4. índices antropométricos;
5. niveles de isoprostano en orina;
6. marcadores de permeabilidad intestinal en plasma;

7. Niveles de proteína C reactiva como marcador de inflamación

   Descripción general del diseño del estudio y criterios de valoración El estudio se configura como un ensayo paralelo doble ciego, aleatorizado, controlado con placebo con 2 alimentos de prueba, alimentos ricos en aleurona de trigo o alimentos de control (placebo). Los criterios de valoración primarios y secundarios se proporcionan en la sección anterior, OBJETIVOS DEL ESTUDIO.

   Descripción general del diseño Los participantes serán identificados y reclutados en la U.O.S. di Dietetica e Nutrizione Clinica, St Chiara, APSS Trento y Fondazione Edmund Mach. Los participantes serán informados sobre los objetivos y procedimientos del estudio y serán preseleccionados sobre la base de los criterios de inclusión/exclusión. Si es elegible, firmará el consentimiento informado e ingresará al estudio con la visita T-1, realizada en la clínica entre las 8:00 y las 9:00 a. m., donde se realizará una evaluación clínica y bioquímica del estado de salud. Si los sujetos siguen siendo elegibles para el estudio de acuerdo con todos los criterios de exclusión, se incluirán en el ensayo y se aleatorizarán para recibir la suplementación activa o el placebo en la visita T0, 2 semanas después (período de preinclusión). Se realizará un asesoramiento dietético en las visitas T-1 y T0. Se recomendará a los participantes que sigan hábitos dietéticos mediterráneos y practiquen una actividad física moderada.

   La visita clínica, las pruebas clínicas y la extracción de sangre se realizarán tras una noche de ayuno al inicio de la fase de rodaje (visita T-1). Se realizarán exámenes clínicos, extracción de sangre, recolección de heces y orina, en la visita T0 (semana 2) y T1 (semana 6). Los participantes del estudio distribuirán un diario de alimentos de cuatro días y lo completarán durante cuatro días consecutivos antes de la visita T0 y T1.

   Cada participante estará sujeto a:

   • Evaluación clínica y bioquímica para descartar posible estado de enfermedad (T-1, semana 0): cuestionario anamnésico, ECG, hemocromo, creatinina, enzimas hepáticas).
   • Extracción de sangre (30 ml) para análisis bioquímicos (T-1 -semana 0-, T0 -semana 2- y T1 -semana 6-).
   • Recolección de heces y orina de 24 hrs para análisis bioquímicos (T0 - semana 2- y T1 - semana 6-).
   • Evaluación antropométrica: presión arterial sistólica y diastólica, pulso, talla y peso para cálculo de IMC y perímetros de cintura y cadera (T-1 -semana 0-, T0 -semana 2- y T1 -semana 6-).

   Todas las visitas se realizarán en la clínica entre las 8.00 y las 9.00 horas, en ayunas. Cada visita tendrá una duración aproximada de 1 h. Se solicitará a los participantes que no modifiquen su dieta actual, a excepción de la introducción de suplementos en sustitución de los alimentos correspondientes. También se les pedirá que eviten fármacos, suplementos e integradores y que comuniquen inmediatamente a los monitores cualquier estado de enfermedad o cambios en la prescripción de fármacos (terapia farmacológica nueva o actual).

   Reclutamiento de participantes Los participantes serán identificados y reclutados en la U.O.S. di Dietetica e Nutrizione Clinica, St Chiara, APSS Trento y Fondazione Edmund Mach. Incluirán trabajadores de ambas instituciones y miembros del público. Los participantes serán informados sobre los objetivos y procedimientos del estudio y serán preseleccionados sobre la base de los criterios de inclusión/exclusión. Si es elegible, firmará el consentimiento informado e ingresará al estudio con la visita T-1, durante la cual se realizará una evaluación clínica y bioquímica del estado de salud. Si los sujetos siguen siendo elegibles para el estudio de acuerdo con todos los criterios de inclusión/exclusión, se incluirán en el ensayo y se aleatorizarán para recibir la suplementación activa o el placebo en la visita T0, dos semanas después (período de preinclusión).

   Suplementación Después de una fase inicial de dos semanas, los participantes serán asignados al azar para recibir suplementos con alimentos ricos en aleurona de trigo o alimentos placebo durante cuatro semanas de manera doble ciego.

   Asesoramiento dietético El asesoramiento dietético se administrará en las visitas T-1 y T0. Se recomendará a los participantes que sigan hábitos dietéticos mediterráneos y practiquen una actividad física moderada.

   Seguimiento La intervención incluirá períodos de tratamiento de cuatro semanas. La visita clínica, las pruebas clínicas y la extracción de sangre se realizarán después de un ayuno nocturno en la visita T-1 - semana 0-. Las pruebas clínicas, la extracción de sangre y la recolección de heces y orina se realizarán en la visita T0 y T1 (T0 el día antes de la suplementación, T1 será la semana 4 después del tratamiento, ya sea alimentos suplementados con aleurona o alimentos suplementados con placebo). Se administrará un cuestionario de frecuencia de alimentos de recuerdo de un año en la visita T-1. Se realizará un cuestionario de frecuencia de alimentos recordado de una semana antes de la visita T0 y T1.

   Evaluación clínica Electrocardiograma. Se realizará un ECG de 12 derivaciones en la selección. Los electrocardiógrafos serán revisados ​​e interpretados por U.O.S. di Dietetica e Nutrizione Clinica, St Chiara, APSS Trento.

   La presión arterial (PA) se medirá de acuerdo con las guías para hipertensión de ISH/WHO 2004. Se utilizará el 'Monitor de presión arterial oscilométrico OMRON HEM705CP'. Los sujetos se mantendrán descansando y sentados durante 10 minutos antes de medir la presión arterial en el brazo derecho; La primera medida será descargada; el segundo y el tercer compás seguirán al primero de 2 minutos cada uno, con el brazo relajado y desnudo y con el ángulo del brazo al mismo nivel del corazón. Para el análisis se utilizará la media de las dos últimas medidas.

   El peso y la altura se medirán en una escala estándar, con un altímetro adjunto para las medidas de altura y se registrarán como iguales a los 100 g y 1 cm más cercanos, si es necesario, respectivamente. Las medidas se llevarán a cabo en sujetos sin zapatos, abrigos o ropa pesada. El IMC se calculará como kg/m2.

   La circunferencia de la cintura (umbilical) se medirá de acuerdo con los Institutos Nacionales de Salud, el Instituto Nacional del Corazón, los Pulmones y la Sangre. Guías clínicas para la identificación, evaluación y tratamiento del sobrepeso y la obesidad en adultos; el informe de pruebas. En la práctica, con el sujeto de pie erguido con el abdomen relajado, el brazo a los lados y los pies juntos, se medirá la circunferencia de la cintura, con una aproximación de 0,1 cm, a un nivel medio entre el margen inferior de la costilla y la cresta ilíaca con el Cinta adhesiva por todo el cuerpo en posición horizontal. La circunferencia de la cadera se medirá a nivel bitrocantérico. Se calculará la relación entre la circunferencia de la cintura y la cadera (WHR).

   Cuestionarios. Toda la información será recogida y registrada en cuestionarios validados, incluyendo identificación personal, historial médico e información sobre factores de riesgo de ECV, consumo de drogas, actividad física y hábitos alimentarios. Además se recogerá un diario alimentario de tres días.

   Muestreo de sangre y recolección de orina Se recolectará sangre (≤ 30 ml) de una vena antecubital, con estasis mínima entre las 8:00 y las 9:00 a.m. después de un ayuno de 12 h, de sujetos que se abstuvieron de fumar durante al menos 6 h. Se obtendrán recolecciones de orina de 24 h de cada participante. Se medirá el volumen de orina y se almacenarán 5 alícuotas de 5 ml a -80°C.

   Recolección de muestras fecales Las muestras fecales se procesarán dentro de las 2 horas posteriores a la producción de la muestra. Brevemente, se mezclarán alícuotas de heces de 1 g con ARN más tarde y se almacenarán a -80 °C para el ADN posterior. Las muestras fecales también se congelarán directamente a -80 °C para el análisis de metabolitos.

   Pruebas de laboratorio (U.O.S. di Dietetica e Nutrizione Clinica, St Chiara, APSS Trento) Las muestras de sangre se centrifugarán de acuerdo con los requisitos de las pruebas a realizar, inmediatamente después de la extracción de sangre. El plasma o el suero se separarán, en parte se analizarán inmediatamente y la fracción restante se almacenará a -80 °C.

   El colesterol, los triglicéridos, el colesterol HDL y la glucosa se evaluarán mediante ensayos cromogénicos. El colesterol LDL se calculará según la fórmula de Friedewald.

   Los niveles de insulina serán evaluados por ELISA. Los recuentos de células sanguíneas se evaluarán mediante pruebas estándar. C-RP se medirá mediante ensayos nefelométricos; Los F2-isoprostanos se medirán en orina como medida de estrés oxidativo, mediante kit EIA específico (Cayman Chemicals, Ann Arbor, Michigan, EE. UU.), previa purificación por cromatografía en fase sólida (columnas SepPack).

   Pruebas de laboratorio (Fondazione Edmund Mach [FEM]) El LPS plasmático, la IgG específica de LPS, el CD14, la proteína de unión a LPS y el 8-isorpostano urinario se medirán espectrofotométricamente utilizando un kit ELISA comercial.

   Perfil de metabolitos urinarios y plasmáticos (FEM). Las muestras de orina y sangre (plasma y suero) se someterán a metabolómica dirigida (UPLC-MS/MS para compuestos no volátiles y GC-MS/MS para compuestos volátiles) y metabolómica no dirigida (ULPC-Q-TOF-MS y Nano -FTMS-Q-TOF para no volátiles y GC-TOF para compuestos volátiles) (Vanza et al., 2001 2012). Para el perfil de metabolitos específicos del plasma, se utilizará el kit Biocrates AbsoluteIDQ® p180 basado en MS, que genera datos cuantitativos precisos sobre 180 metabolitos humanos relacionados con el riesgo de enfermedad diabética. También se aplicarán análisis dirigidos específicos para la cuantificación de perfiles de lípidos séricos, ácidos biliares, SCFA y metabolitos de polifenoles microbianos en biofluidos (incluidas las heces) utilizando UPLC/QqQ-MS/MS (Vrhovsek et al., 2012).

   Análisis de microbiota fecal (FEM). Los cambios en la microbiología fecal se evaluarán utilizando la metagenómica de pirosecuenciación 454. Brevemente, después de la entrega de muestras fecales, el ADN metagenómico se extraerá utilizando el kit FastDNA SPIN para FECES de MPbio.com. Usando cebadores bacterianos universales, la región V1-V3 que incluye el gen 16S rRNA presente en el ADN metagenómico fecal se amplificará y se someterá a 454-pirosecuenciación. Los adaptadores de identificador múltiplex (MID) se utilizarán para la química de titanio GS FLX - conjunto MID extendido para obtener secuencias de aproximadamente 600 pb de longitud que se CORPORARÁ contra las bases de datos filogenéticas de 16S rRNA disponibles públicamente utilizando la canalización QIIME (http://qiime.org / ) proporcionando buenas identificaciones a nivel de especie de la microbiota intestinal humana. El objetivo es un total de 20.000 secuencias utilizables por muestra fecal. Tras el control de calidad y el análisis ecológico microbiano, se emplearán estadísticas multivariadas para correlacionar los cambios en la composición y estructura de la microbiota fecal en sujetos después del consumo de alimentos suplementados con aleurona en comparación con los alimentos de control (De Filippo et al., 2010). Se empleará PCR cuantitativa con cebadores específicos de especies y grupos para confirmar los cambios en las poblaciones microbianas identificadas a partir de los datos metagenómicos de pirosecuenciación. Usando qPCR, se enumerarán las bifidobacterias totales, las enterobacterias totales, las bacterias totales y los lactobacilos en todas las muestras fecales. Este será un mínimo y actuará como control de calidad independiente para la pirosecuenciación. Además, y dependiendo de lo que se observe en términos de cambios en el nivel de especie a partir de la pirosecuenciación, se emplearán cebadores específicos de especie para confirmar todas las diferencias estadísticamente significativas observadas en la comparación entre la aleurona y los puntos de tiempo de alimentación de control.

   Aleatorización y cegamiento Los participantes, estratificados por sexo, serán asignados al azar al tratamiento con aleurona o con placebo mediante un número generado electrónicamente proporcionado por el estadístico. Los investigadores clínicos y el personal de laboratorio no conocerán la aleatorización.

   Los productos del estudio (harina de pan, galletas, cereales RTE) serán entregados por Cargill de manera ciega pero marcados con E o W para diferenciar los tratamientos. Los productos de prueba se envasarán en envoltorios similares y en porciones diarias. Los alimentos placebo contienen los mismos ingredientes que los alimentos activos excepto que la celulosa sustituye a la aleurona y son muy similares a estos últimos en tamaño, forma y color.

   Tratamiento La suplementación del estudio se introducirá en la dieta diaria según preferencia del participante hasta un total de 27 g de Aleurona/día o dosis equivalente de placebo. Una rebanada de pan (35 g) contiene 4,8 g de aleurona; una galleta (15 g) contiene 4,5 g de aleurona; 36 g de cereales listos para el consumo contienen 9 g de aleurona. Los alimentos placebo contienen los mismos ingredientes que los alimentos activos excepto que la celulosa sustituye al contenido de fibra de aleurona y son muy similares a estos últimos en tamaño, forma y color. Los productos del estudio (activo o placebo) se proporcionarán en paquetes de productos que estarán etiquetados en el idioma local con el número de código del estudio, el número de código del sitio, el nombre del fabricante, el número del paciente, el número de visita del estudio, el número de lote, las instrucciones de almacenamiento. y fechas de caducidad. Los productos se dispensarán a los participantes en la visita T0.

   Duración y programación del estudio Después de una fase inicial de dos semanas, los participantes serán asignados aleatoriamente al grupo de alimentos suplementados con aleurona o al grupo suplementado con placebo durante 4 semanas de intervención dietética.

   La duración total del estudio, incluidos el período inicial y el tratamiento, será de 6 semanas. El reclutamiento de sujetos comenzará con la evaluación favorable del comité de investigación y ética de APSS y los primeros sujetos comenzarán el período de prueba dentro de las dos semanas posteriores a este punto de inicio. Los sujetos serán reclutados durante un período de 6 meses y el estudio se completará en 8 meses desde el momento del reclutamiento del primer sujeto.

   Criterios de interrupción Criterios De acuerdo con la Declaración de Helsinki, las Directrices de Buenas Prácticas Clínicas de la ICH y las Regulaciones de la Administración de Drogas y Alimentos de los Estados Unidos (FDA), un sujeto tiene derecho a retirarse del estudio en cualquier momento y por cualquier motivo sin perjuicio de su /su futura atención médica por el médico o en la institución. El Investigador y el Patrocinador también tienen derecho a retirar sujetos del estudio (ver más abajo). Además, el Patrocinador puede optar por finalizar el estudio en cualquier momento y por cualquier motivo.

   Si un sujeto (o el representante legalmente autorizado de un sujeto) decide retirarse, se harán todos los esfuerzos para completar e informar las observaciones de la manera más completa posible. Se debe realizar una evaluación final completa en el momento del retiro del sujeto, se debe registrar el motivo del retiro y se debe intentar realizar una evaluación de seguimiento.

   Los sujetos pueden ser eliminados del estudio por razones que incluyen las siguientes:

   • violación significativa del protocolo por parte del investigador
   • incumplimiento significativo por parte del sujeto
   • negativa del sujeto a continuar el tratamiento o las observaciones
   • toxicidad inaceptable
   • decisión del investigador de que la terminación es lo mejor para el interés médico del sujeto
   • enfermedad o complicación médica no relacionada
   • el embarazo
   • evidencia de abuso de alcohol o sustancias Los sujetos que interrumpan o se retiren del estudio no serán reemplazados.

   Procedimiento de Descontinuación Anticipada

   Si un sujeto interrumpe antes de completar el estudio, se obtendrá el motivo y la fecha de la interrupción. También se obtendrá la fecha de la última dosis del producto del estudio. En caso de interrupción anticipada, se deben realizar los siguientes procedimientos:

   • Exámenes clínicos (presión arterial sistólica y diastólica, pulso, talla y peso para cálculo de IMC, circunferencias de cintura y cadera),
   • Extracción de sangre, recolección de heces y orina.
   • Cuestionario de recuerdo de alimentos de 1 semana En caso de que el sujeto no pueda regresar para la visita de seguimiento, el sitio debe intentar comunicarse con el sujeto por teléfono para seguir cualquier evento adverso.

   Si un sujeto retira el consentimiento para recibir el producto del estudio, se le alentará a permanecer en el estudio sin recibir tratamiento para la recopilación de datos de seguridad.

   Procedimientos de responsabilidad para el producto del estudio Los productos del estudio (activo o placebo) se proporcionarán en paquetes de productos que estarán etiquetados en el idioma local con el número de código del estudio, el número de código del sitio, el nombre del fabricante, el número de código del producto, el número de visita del estudio , número de lote, instrucciones de almacenamiento y fechas de caducidad. Los productos se dispensarán a los participantes en la visita T0. El pan se congelará en porciones de 2 bollos y las galletas se congelarán en porciones de 2 galletas que serán descongeladas en casa por los participantes antes de su consumo.

   Mantenimiento del código de aleatorización Los códigos de aleatorización de los participantes se mantendrán en un sobre cerrado en la FEM. La información del código del producto se mantendrá en un sobre sellado en Cargill.

   Control de datos de origen Todos los datos recopilados durante el curso del estudio se obtendrán de fuentes primarias que se hayan registrado en documentos escritos y electrónicos, como el expediente médico del sujeto. Los resultados de los exámenes clínicos, los hallazgos de laboratorio y los trazados de ECG se registrarán en el expediente médico electrónico del sujeto. No se ingresarán datos directamente en el formulario de informe de caso (CRF) sin haber sido transferidos de alguna otra fuente anterior, como registros escritos o electrónicos.

   Selección y Retiro de Sujetos Criterios de Inclusión Al menos una de las siguientes condiciones: Edad 18-65 años; IMC >27 kg/m^2. Criterios de exclusión Los sujetos deben ser excluidos de la participación en el estudio si cumplen alguno de los siguientes criterios de exclusión: glucosa en sangre en ayunas >300 mg/dl; triglicéridos > 500 mg/dl; hipertensión no controlada (PA >160/100 mm Hg bajo terapia antihipertensiva); enfermedad cardiovascular (infarto de miocardio, angioplastia coronaria transluminal percutánea o injerto de derivación de arteria coronaria, angina de pecho inestable, apoplejía, enfermedad arterial periférica); hipo o hipertiroidismo; enfermedades inflamatorias agudas; enfermedades gastrointestinales graves; insuficiencia cardíaca, hepática, renal o pulmonar u otra enfermedad potencialmente mortal con pronóstico <5 años; uso crónico de corticoides sistémicos, anticoagulantes, antiinflamatorios o hipolipemiantes y antidiabéticos; tratamiento dentro de las 6 semanas anteriores con cualquier medicamento que se sepa que afecta los niveles de lipoproteínas o la microbiota fecal (específicamente, antibióticos); intolerancias alimentarias; ingesta de alcohol > 5 tragos por día o uso de sustancias estupefacientes; uso de suplementos de vitaminas o minerales antioxidantes; dieta especial; embarazo, tabaquismo.

   Tratamiento farmacológico concomitante Cualquier tratamiento recibido por el sujeto en el mes anterior al inicio del estudio y/o administrado durante el estudio se considerará tratamiento concomitante. Dicho tratamiento debe documentarse en la página del CRF correspondiente y en los registros médicos de los sujetos. Cualquier cambio en la terapia concomitante durante el estudio debe registrarse claramente y debe documentarse el motivo del cambio.

   No se permitirá el uso de los siguientes medicamentos durante el estudio:

   corticoides, anticoagulantes, antiinflamatorios, hipolipemiantes y antidiabéticos; cualquier medicamento que se sepa que afecta los niveles de lipoproteínas o la microbiota fecal (específicamente antibióticos), suplementos, probióticos, prebióticos o hierbas, excepto para el manejo de eventos adversos.

   Cumplimiento de los sujetos Para evaluar el cumplimiento de la suplementación, se medirán los fenoles urinarios en sujetos suplementados con alimentos ricos en aleurona en el tiempo T0 y T1. Además, todos los paquetes sin usar o vacíos al final de cada semana acompañados de un auto registro de las porciones usadas serán devueltos a los investigadores.

   Registro e informe de eventos adversos Eventos adversos Los eventos adversos, tanto solicitados como no solicitados, se registrarán durante todo el estudio y durante los 30 días posteriores al último tratamiento con los productos del estudio.

   Un evento adverso (AA) es cualquier cambio o enfermedad física o clínica experimentada por el sujeto en cualquier momento durante el transcurso del estudio, ya sea que se considere relacionado o no con el uso del producto del estudio. Esto incluye la aparición de nuevas enfermedades y la exacerbación de condiciones preexistentes. Por lo general, los valores de laboratorio o los resultados de las pruebas anormales no deben considerarse EA, a menos que induzcan signos o síntomas clínicos o requieran una intervención terapéutica. Los eventos adversos se seguirán cuidadosamente hasta que se resuelvan.

   Se debe informar una descripción textual del evento, su relación con el producto del estudio y si el evento también se registró como un evento adverso grave (SAE) en el CRF de eventos adversos para cada EA registrado en el expediente del sujeto. Cualquier EA que ocurra después del primer procedimiento de estudio y durante todo el curso del estudio, hasta el procedimiento final del estudio, debe informarse, ya sea que se considere que está relacionado o no con el producto del estudio. Cada entrada debe incluir las fechas y horas de inicio y finalización, la gravedad, la gravedad, la relación con el producto del estudio y la acción/resultado. Todos los EA deben registrarse utilizando la terminología definida por el Diccionario médico para actividades reguladoras (MedDRA), versión 10.

   Análisis estadísticos Inscripción planificada y justificación Se determinó el tamaño de la muestra 34 para detectar un cambio de 0,4 μmol/L de homocisteína total (tHcy) en plasma con una variación estándar de 0,5 μmol/L (tomado de Price et al., 2010) usando Snedecor y ecuación de Cochran con α de 0,05 y 1-β de 0,9 (Dell et al., 2002). Teniendo en cuenta el estudio anterior con aleurona en individuos sanos de Price et al., (2010) y la necesidad de tener en cuenta los abandonos, proponemos reclutar 40 individuos por grupo de tratamiento en el presente estudio.

   Se presentarán las características basales de cada grupo. Eventualmente, las diferencias residuales entre el alimento activo y el grupo placebo después de la aleatorización se considerarán para el ajuste en modelos multivariables en todos los análisis posteriores. Las variables continuas se expresarán como medias +/- desviación estándar o medianas con rangos intercuartílicos y como porcentaje para las variables categóricas. Los datos posteriores a la intervención se compararán mediante ANOVA utilizando el modelo lineal general con la línea de base como covariable. Los datos con una distribución sesgada se transformarán logarítmicamente antes de los análisis. Se usará la regresión lineal simple y múltiple para determinar las relaciones entre las variables y se realizarán pruebas t independientes para evaluar las diferencias en el cumplimiento informado entre los grupos. Los resultados se expresarán como media +/- SEM y las diferencias se considerarán significativas en P < 0,05.

   Se adoptará el principio de 'intención de tratar' para el análisis de los criterios de valoración primarios: la evaluación de la eficacia tiene en cuenta la aleatorización inicial independientemente del cumplimiento del tratamiento del sujeto.

   El análisis principal se basará en la comparación de la diferencia en los niveles medios al final del estudio en sujetos suplementados con alimentos activos y sujetos que recibieron alimentos placebo.

   El análisis principal se basará en la comparación de la diferencia en los niveles medios al final del estudio en sujetos suplementados con alimentos activos y en alimentos suplementados con placebo.

   Las diferencias a lo largo del tiempo entre los brazos de tratamiento se evaluarán mediante el análisis de la Varianza para medidas repetidas (Procedimiento GLM, SAS Institute Inc. SAS/STAT User Guide, Versión 9.1.3 para ventanas. Cary, NC: SAS Institute Inc. 1989).

   El nivel de significación será alfa=0.05 dos colas

   Características demográficas y de referencia Las características demográficas y de referencia, incluidas, entre otras, la edad, el género, la raza, el origen étnico, el peso corporal, la altura y el índice de masa corporal, la presión arterial y los hábitos dietéticos se tabularán utilizando estadísticas descriptivas Evaluaciones de referencia Cualquier hallazgo anormal en el electrocardiograma de referencia la evaluación, la detección de drogas o la detección de virus se resumirán de forma descriptiva.

   Valores de laboratorio Los datos de laboratorio de cada muestreo y los cambios con respecto a la línea de base se resumirán para cada visita por la media, la mediana, la desviación estándar, el mínimo y el máximo.

   ACCESO DIRECTO A LA FUENTE DE DATOS/DOCUMENTOS Es posible que las autoridades reguladoras deseen realizar auditorías de las actividades de investigación clínica para evaluar el cumplimiento de los principios de las BPC. Una autoridad reguladora también puede desear realizar una inspección (durante el estudio o incluso después de su finalización). Si una autoridad reguladora y/o IRB solicita una inspección, el Investigador debe informar al Patrocinador o su designado de inmediato. El investigador debe aceptar proporcionar a las autoridades reguladoras acceso a la documentación relacionada con el estudio. El Investigador permitirá que el Patrocinador ayude a responder a cualquier citación, así como a recibir copias de cualquier documento proporcionado a un inspector/auditor.

   ÉTICA Junta de revisión institucional/Comité de ética Antes de implementar este estudio, el protocolo y el consentimiento informado serán revisados ​​por el Comitato ético per le Sperimentazioni Cliniche c/o APSS di Trento. Una declaración firmada y fechada de que el protocolo y el consentimiento informado han sido aprobados por el Comitato etico per le Sperimentazioni Cliniche c/o APSS di Trento debe estar archivada en el sitio antes del inicio del estudio. Una lista de los miembros del Comitato etico per le Sperimentazioni Cliniche c/o APSS di Trento también debe estar archivada en el sitio. Cualquier modificación del protocolo, que no sea administrativa, debe ser aprobada por el Comitato etico per le Sperimentazioni Cliniche c/o APSS di Trento.

   Consentimiento informado Se firmarán formularios de consentimiento informado.

   Divulgación y confidencialidad Al firmar el protocolo, el Investigador acepta mantener toda la información proporcionada por Cargill en estricta confidencialidad y solicitar una confidencialidad similar a su personal y al IRB.

   Los documentos del estudio proporcionados por Cargill (protocolos, folletos del investigador y otro material) se almacenarán adecuadamente para garantizar la confidencialidad. La información proporcionada por Cargill al Investigador no puede divulgarse a otros sin la autorización directa por escrito de Cargill, excepto en la medida necesaria para obtener el consentimiento informado de los sujetos que deseen participar en el ensayo.

   MANEJO DE DATOS Y MANTENIMIENTO DE REGISTROS Los datos/documentación fuente se definen como el primer lugar donde se registran los datos. Todos y cada uno de los documentos de origen deben mantenerse y ser recuperables en el sitio. El investigador debe mantener documentos fuente para cada sujeto en el estudio.

   Los datos recopilados en los CRF durante el ensayo se documentarán de manera anónima, y ​​los sujetos solo se identificarán por números e iniciales de sujetos. Si, como excepción, es necesario por razones de seguridad o reglamentarias identificar al sujeto, Cargill y el Investigador están obligados a mantener la confidencialidad de esta información.

   Todos los datos ingresados ​​en los CRF deben registrarse de manera legible en tinta negra. Si es necesaria una corrección, debe hacerse tachando la entrada incorrecta con una sola línea e ingresando la información correcta junto a ella. La corrección debe llevar las iniciales y la fecha del Investigador o de una persona calificada designada. Cualquier información solicitada que no se obtenga como se especifica en el protocolo debe tener una explicación de la omisión anotada en el CRF. Se debe mantener una copia del CRF de cada sujeto, junto con las consultas relacionadas, en el sitio de estudio.

   Toda la información sobre los CRF debe poder rastrearse hasta los documentos de origen, que generalmente se mantienen en el archivo del sujeto. Los documentos fuente deben contener toda la información demográfica y médica, incluidos los datos de laboratorio, ECG, etc., y también una copia del formulario de consentimiento informado firmado, que debe indicar el número de estudio y el título del ensayo.

   El investigador debe conservar los documentos esenciales, que se enumeran a continuación, durante un período identificado por Cargill al comienzo del estudio. Cargill notificará al investigador/institución cuando los registros relacionados con el estudio ya no sean necesarios. El Investigador acepta adherirse a los procedimientos de retención de documentos al firmar el protocolo. Los documentos esenciales incluyen, entre otros, protocolos, materiales publicitarios, informes de AE, registros de fuentes de materias, correspondencia del IRB, formularios de consentimiento, currículum vitae, registros de visitas de monitoreo, registros de laboratorio, rangos de referencia, certificaciones, documentación de control de calidad y cualquier otro documentos pertinentes.

   Cualquier cambio o adición a este protocolo requiere una enmienda al protocolo por escrito que debe ser aprobada por Cargill antes de la implementación. Si se realizan cambios sustanciales en el diseño del estudio, se debe notificar al IRB y, cuando sea necesario, aprobar el cambio antes de la inclusión de nuevos sujetos.

   Todos los procedimientos de gestión de datos se detallarán en archivos separados, específicamente identificados, que en conjunto se denominarán Plan de gestión de datos (DMP).