A magas rosttartalmú, magas antioxidáns tartalmú aleuront tartalmazó étrend-kiegészítés hatásának mérése a szív- és érrendszeri betegségek biomarkereire és a bélmikrobiótára magas testtömeg-indexű felnőtteknél

A VIZSGÁLAT CÉLKITŰZÉSEI A tanulmány általános célja annak értékelése, hogy a búza aleuronban gazdag étrend-kiegészítők módosítják-e a szív- és érrendszeri és metabolikus kockázati profilokat a fokozott metabolikus kockázatú alanyok esetében.

A kísérlet elsődleges célja annak értékelése, hogy a búza aleuronban gazdag étrend-kiegészítő módosítja-e:

1. teljes plazma homocisztein (tHcy)
2. a homocisztein metabolizmusához kapcsolódó plazma metabolitok (betain, dimetil-glicin, metionin, kolin, folsav, riboflavin, B6-vitamin);
3. humán biofluid másodlagos (mikrobióta eredetű) polifenol metabolitok;
4. széklet epesav és széklet szterin koncentrációja.
5. Az Illumina szekvenálás segítségével előállított széklet mikrobióta profil

A másodlagos célok annak értékelése, hogy a búza aleuronban gazdag étrend-kiegészítő módosítja-e:

1. plazma és vizelet MS alapú metabolit profilalkotás;
2. összkoleszterin-, triglicerid-, LDL- és HDL-koleszterinszint;
3. szérum glükóz és inzulin szint;
4. antropometriai indexek;
5. vizelet izoprosztán szintje;
6. a bélpermeabilitás markerei a plazmában;

7. A C-reaktív fehérje szintje a gyulladás markere

   A vizsgálatterv áttekintése és végpontjai A vizsgálatot placebo-kontrollos, randomizált, kettős vak párhuzamos vizsgálatként állítottuk fel 2 tesztélelmiszerrel, búza-aleuronban gazdag élelmiszerekkel vagy kontroll élelmiszerekkel (placebo). Az elsődleges és másodlagos végpontokat a fenti, VIZSGÁLATI CÉLKITŰZÉSEK című szakasz tartalmazza.

   Tervezési áttekintés A résztvevők azonosítása és toborzása az U.O.S. di Dietetica e Nutrizione Clinica, St Chiara, APSS Trento és Fondazione Edmund Mach. A résztvevők tájékoztatást kapnak a vizsgálat céljairól és eljárásairól, és előzetesen átvizsgálják őket a felvételi/kizárási kritériumok alapján. Ha jogosult, aláírják a tájékozott beleegyező nyilatkozatot, és a klinikán reggel 8.00 és 9.00 óra között elvégzett T-1 vizittel belépnek a vizsgálatba, ahol az egészségi állapot klinikai és biokémiai értékelését végzik el. Ha az alanyok az összes kizárási kritérium szerint továbbra is jogosultak a vizsgálatra, akkor a vizsgálatba bevonják őket, és randomizálják őket, hogy aktív kiegészítést vagy placebót kapjanak a 2 héttel későbbi T0 látogatáson (bejáratási időszak). A T-1 és T0 viziteken diétás tanácsadásra kerül sor. A résztvevőknek azt tanácsolják, hogy kövessék a mediterrán étkezési szokásokat és gyakoroljanak mérsékelt fizikai aktivitást.

   A klinikai látogatásra, a klinikai vizsgálatokra és a vérvételre egy éjszakán át tartó koplalás után kerül sor a bejáratási fázis (T-1 látogatás) kezdetén. Klinikai vizsgálatokat, vérvételt, széklet- és vizeletvételt végeznek a T0 (2. hét) és T1 (6. hét) vizit alkalmával. A vizsgálat résztvevői négy napos étkezési naplót osztanak ki és töltenek ki négy egymást követő napon a T0 és T1 látogatás előtt.

   Minden résztvevőnek meg kell felelnie:

   • Klinikai és biokémiai értékelés az esetleges betegségi állapot kizárására (T-1, 0. hét): anamnesztikus kérdőív, EKG, hemokrom, kreatinin, májenzimek).
   • Vérvétel (30 ml) biokémiai elemzésekhez (T-1 - 0. hét, T0 - 2. hét és T1 - 6. hét -).
   • Széklet és 24 órás vizeletgyűjtés biokémiai elemzésekhez (T0 - 2. hét - és T1 - 6. hét -).
   • Antropometriai értékelés: szisztolés és diasztolés vérnyomás, pulzusszám, magasság és testsúly a BMI kiszámításához, valamint a derék- és csípőkörfogat (T-1 -0. hét, T0 - 2. hét és T1 - 6. hét-).

   Valamennyi vizit 8.00 és 9.00 óra között, éhgyomorra kerül sor a klinikán. Minden látogatás körülbelül 1 óráig tart. A résztvevőket megkérjük, hogy ne módosítsák jelenlegi étrendjüket, kivéve a megfelelő élelmiszerek helyettesítésére szolgáló kiegészítők bevezetését. Arra is felkérik őket, hogy kerüljék a gyógyszereket, a kiegészítőket és az integrálókat, és haladéktalanul közöljék a megfigyelőkkel a betegség állapotát vagy a gyógyszerfelírás változásait (új vagy jelenlegi gyógyszeres terápia).

   Résztvevők toborzása A résztvevők azonosítása és toborzása az U.O.S. di Dietetica e Nutrizione Clinica, St Chiara, APSS Trento és Fondazione Edmund Mach. Mind az intézmények dolgozói, mind a lakosság tagjai lesznek közöttük. A résztvevők tájékoztatást kapnak a vizsgálat céljairól és eljárásairól, és előzetesen átvizsgálják őket a felvételi/kizárási kritériumok alapján. Ha jogosult, aláírják a tájékozott beleegyező nyilatkozatot, és a T-1 látogatással belépnek a vizsgálatba, melynek során az egészségi állapot klinikai és biokémiai értékelését végzik el. Ha az alanyok az összes felvételi/kizárási feltétel alapján továbbra is jogosultak a vizsgálatra, akkor bekerülnek a vizsgálatba, és randomizálják őket, hogy aktív kiegészítést vagy placebót kapjanak a T0 látogatáson, két héttel később (bejáratási időszak).

   Kiegészítés A kéthetes bejáratási fázis után a résztvevőket véletlenszerűen besorolják, hogy vagy búzában, Aleuronban gazdag élelmiszerekkel vagy placebóval kiegészítve kapjanak négy hétig, kettős vak módszerrel.

   Diétás tanácsadás Diétás tanácsadás a T-1 és T0 viziteken történik. A résztvevőknek azt tanácsolják, hogy kövessék a mediterrán étkezési szokásokat és gyakoroljanak mérsékelt fizikai aktivitást.

   Nyomon követés A beavatkozás négyhetes kezelési periódusból áll. A klinikai látogatásra, a klinikai vizsgálatokra és a vérvételre egy éjszakai koplalás után kerül sor a T-1 látogatás során – 0. hét. Klinikai vizsgálatra, vérvételre, széklet- és vizeletvételre a T0 és T1 vizit alkalmával kerül sor (T0 a kiegészítés előtti napon, T1 a kezelés utáni 4. hét, vagy aleuronnal kiegészített élelmiszerek vagy placebóval kiegészített ételek). A T-1 látogatás alkalmával egy éves visszahívási gyakorisági kérdőív kerül beadásra. A T0 és T1 látogatás előtt egyhetes visszahívási étkezési gyakoriság kérdőívet kell kitölteni.

   Klinikai értékelés Elektrokardiogram. A szűréskor 12 elvezetéses EKG-t készítenek. Az elektrokardiográfokat az U.O.S. felülvizsgálja és értelmezi. Dietetica e Nutrizione Clinica, St Chiara, APSS Trento.

   Az artériás vérnyomást (BP) az ISH/WHO 2004 magas vérnyomásra vonatkozó irányelvei szerint mérik. Az „OMRON HEM705CP oszcillometrikus vérnyomásmérő” készüléket fogják használni. Az alanyokat pihentetjük és 10 percig üljük, mielőtt a jobb karján megmérnénk a vérnyomást; Az első intézkedést lezárják; a második és a harmadik ütem egyenként 2 perccel követi az elsőt, ellazított és csupasz karral, a kar szöge a szívvel azonos magasságban van. Az utolsó két mérőszám átlagát használjuk az elemzéshez.

   A súlyt és a magasságot szabványos skálán mérik, a magasságméréshez mellékelt magasságmérővel, és szükség esetén a legközelebbi 100 g-mal, illetve 1 cm-rel kell feljegyezni. Az intézkedéseket cipő, kabát vagy erős öltözködés nélküli alanyokon hajtják végre. A BMI-t kg/m2-ben számítják ki.

   A derék (köldök) kerületét a National Institutes of Health, National Heart, Lung and Blood Institute szerint mérik. Klinikai irányelvek a felnőttkori túlsúly és elhízás azonosítására, értékelésére és kezelésére; a bizonyítékokról szóló jelentést. A gyakorlatban, ha az alany egyenesen áll, a hasa ellazult, a kar oldalt és a lábak együtt vannak, a derékkörfogatot a legközelebbi 0,1 cm-re mérik, az alsó bordaszegély és a csípőtaraj közötti magasságban. ragasztószalaggal a test körül vízszintes helyzetben. A csípő kerületét bitrochanterikus szinten kell mérni. A rendszer kiszámítja a derék és a csípő kerületének arányát (WHR).

   Kérdőívek. Minden információt összegyűjtenek és hitelesített kérdőívekben rögzítenek, beleértve a személyazonosító adatokat, a kórtörténetet, valamint a szív- és érrendszeri betegségek kockázati tényezőire vonatkozó információkat, a kábítószer-használatot, a fizikai aktivitást és az étkezési szokásokat. Emellett három napos étkezési naplót is gyűjtenek.

   Vérvétel és vizeletvétel Vért (≤ 30 ml) egy antecubitalis vénából kell gyűjteni, minimális stasis mellett reggel 8 és 9 óra között 12 óra éheztetés után azoktól az alanyoktól, akik legalább 6 órán keresztül tartózkodtak a dohányzástól. Minden résztvevőtől 24 órás vizeletgyűjtés történik. A vizelet mennyiségét megmérjük, és 5 5 ml-es alikvot részt -80°C-on tárolunk.

   Székletminta gyűjtése A székletmintákat a minta előállításától számított 2 órán belül feldolgozzuk. Röviden, a széklet 1 g-os alikvotjait később RNS-sel keverjük össze, és -80 °C-on tároljuk a későbbi DNS-hez. A székletmintákat közvetlenül -80 °C-on is lefagyasztják metabolitelemzés céljából.

   Laboratóriumi vizsgálatok (U.O.S. di Dietetica e Nutrizione Clinica, St Chiara, APSS Trento) A vérmintákat az elvégzendő vizsgálatok követelményeinek megfelelően, közvetlenül a vérvétel után centrifugáljuk. A plazmát vagy szérumot elválasztják, részben azonnal tesztelik, és a maradék frakciót -80 °C-on tárolják.

   A koleszterint, a triglicerideket, a HDL-koleszterint és a glükózt kromogén tesztekkel értékelik. Az LDL-koleszterint a Friedewald-képlet alapján számítják ki.

   Az inzulinszintet ELISA-val kell értékelni. A vérsejtek számát standard tesztekkel értékelik. A C-RP-t nefelometriás tesztekkel mérjük; Az F2-izoprosztánokat a vizeletben mérik az oxidáns stressz mértékeként, specifikus EIA kittel (Cayman Chemicals, Ann Arbor, Michigan, USA), szilárd fázisú kromatográfiás tisztítás után (SepPack oszlopok).

   Laboratóriumi tesztek (Fondazione Edmund Mach [FEM]) A plazma LPS-t, az LPS-specifikus IgG-t, a CD14-et, az LPS-kötő fehérjét és a vizelet 8-izorpostánt spektrofotometriásan mérik egy kereskedelmi forgalomban lévő ELISA kit segítségével.

   Vizelet- és plazma metabolit profilalkotás (FEM). A vizelet- és vérmintákat (plazma és szérum) célzott metabolomikának (UPLC-MS/MS a nem illékony vegyületeknél és GC-MS/MS az illékony vegyületeknél) és nem célzott metabolomikának (ULPC-Q-TOF-MS és Nano) vetik alá. -FTMS-Q-TOF a nem illékony és GC-TOF az illékony vegyületekhez) (Vanza et al., 2001, 2012). A plazma célzott metabolitprofiljának meghatározásához az MS-alapú Biocrates AbsoluteIDQ® p180 készletet fogják használni, amely pontos kvantitatív adatokat generál a cukorbetegség kockázatával kapcsolatos 180 emberi metabolitról. Szintén speciális célzott elemzést fognak alkalmazni a szérum lipidprofilok, epesavak, SCFA és mikrobiális polifenol metabolitok mennyiségi meghatározására biofluidokban (beleértve a székletet is) UPLC/QqQ-MS/MS segítségével (Vrhovsek et al., 2012).

   Széklet mikrobiota elemzés (FEM). A széklet mikrobiológiai változásait 454 piroszekvencia metagenomika segítségével értékelik. Röviden, a székletminták kiszállítását követően a metagenomikus DNS-t az MPbio.com FECES-hez készült FastDNA SPIN Kit for FECES segítségével extraháljuk. Univerzális bakteriális primerek alkalmazásával a széklet metagenomikus DNS-ében jelenlévő 16S rRNS gént is magában foglaló V1-V3 régiót amplifikáljuk, és 454-piroszekvenálásnak vetjük alá. Multiplex azonosító (MID) adaptereket használnak a GS FLX Titanium Chemistry - Extended MID Sethez, hogy körülbelül 600 bp hosszúságú szekvenciákat kapjanak, amelyeket a nyilvánosan elérhető 16S rRNS filogenetikai adatbázisokkal szemben a QIIME csővezeték (http://qiime.org) segítségével BLASTED. / ) jó fajszintű azonosítást ad az emberi bélmikrobióta számára. Összesen 20 000 használható szekvencia székletmintánként a cél. A minőség-ellenőrzést és a mikrobiális ökológiai elemzést követően többváltozós statisztikát alkalmaznak a széklet mikrobiota összetételében és szerkezetében bekövetkező változások korrelálására az alanyoknál az Aleurone-nal kiegészített élelmiszerek elfogyasztása után a kontroll élelmiszerekhez képest (De Filippo et al., 2010). A faj- és csoportspecifikus primerekkel kvantitatív PCR-t alkalmaznak a piroszekvencia metagenomikai adatokból azonosított mikrobapopulációkban bekövetkezett változások megerősítésére. A qPCR segítségével minden székletmintában számba veszik az összes bifidobaktériumot, összes enterobaktériumot, összes baktériumot és laktobacillust. Ez a minimum, és független minőség-ellenőrzésként működik a piroszekvenálásnál. Ezen túlmenően és attól függően, hogy a piroszekvenálás során milyen fajszintű változásokat tapasztalunk, fajspecifikus primereket alkalmazunk az Aleurone és a kontroll etetési időpontok összehasonlítása során észlelt összes statisztikailag szignifikáns különbség megerősítésére.

   Véletlenszerűsítés és vakítás A nemek szerint rétegzett résztvevőket a statisztikus által megadott elektronikus generált szám alapján randomizálják az aleuron-kezelésre vagy a placebo-kezelésre. A klinikai kutatók és a laboratóriumi személyzet vakok lesznek a randomizációval kapcsolatban.

   A vizsgálati termékeket (kenyérliszt, keksz, RTE gabonafélék) a Cargill vakon, de a kezelések megkülönböztetése érdekében E vagy W jelzéssel szállítja. A teszttermékeket hasonló csomagolásba és napi adagokra csomagoljuk. A placebo élelmiszerek ugyanazokat az összetevőket tartalmazzák, mint az aktív élelmiszerek, kivéve, hogy cellulóz helyettesíti az Aleurone-t, és méretükben, formájukban és színükben nagyon hasonlítanak az utóbbihoz.

   Kezelés A vizsgálati kiegészítést be kell vezetni a napi étrendbe a résztvevő preferenciáinak megfelelően, összesen 27 g Aleurone/nap vagy azzal egyenértékű placebo dózissal. Egy kenyérszelet (35 g) 4,8 g aleuront tartalmaz; egy keksz (15 g) 4,5 g aleuront tartalmaz; 36 g RTE gabonafélék 9 g aleuront tartalmaznak. A placebo élelmiszerek ugyanazokat az összetevőket tartalmazzák, mint az aktív élelmiszerek, kivéve az Aleurone rosttartalmát helyettesítő cellulózt, és méretükben, formájukban és színükben nagyon hasonlóak az utóbbihoz. A vizsgálati termékeket (aktív vagy placebo) olyan termékcsomagokban szállítjuk, amelyek a helyi nyelven fel vannak tüntetve a vizsgálat kódszámával, a helyszín kódszámával, a gyártó nevével, a betegszámmal, a vizsgálati vizitszámmal, a tételszámmal, a tárolási utasításokkal. , és a lejárati dátumok. A termékeket a T0 látogatáskor adjuk ki a résztvevőknek.

   A vizsgálat időtartama és ütemezése A kéthetes bejáratási szakasz után a résztvevőket véletlenszerűen besorolják az Aleurone táplálékkal vagy placebóval kiegészített csoportba 4 hetes diétás beavatkozásra.

   A vizsgálat teljes időtartama, beleértve a bejáratást és a kezelést is, 6 hét lesz. Az alanyok toborzása az APSS kutatási és etikai bizottságának kedvező elbírálása esetén indul, és az első alanyok a bejáratási időszakot ettől a kezdőponttól számított két héten belül megkezdik. Az alanyokat 6 hónapos időszak alatt veszik fel, és a vizsgálatot az első alany felvételétől számított 8 hónapon belül fejezik be.

   Megszakítási kritériumok A Helsinki Nyilatkozat, az ICH Good Clinical Practice Guidelines és az Egyesült Államok Élelmiszer- és Gyógyszerügyi Hatóságának (FDA) előírásai szerint a vizsgálati alanynak joga van bármikor, bármilyen okból kilépni a vizsgálatból, a vizsgálati körének sérelme nélkül. jövőbeni egészségügyi ellátását az orvosnál vagy az intézményben. A vizsgálónak és a szponzornak is jogában áll a vizsgálati alanyokat kivonni a vizsgálatból (lásd alább). Ezenkívül a Szponzor dönthet úgy, hogy a vizsgálatot bármikor, bármilyen okból megszakítja.

   Ha a vizsgálati alany (vagy az alany törvényesen felhatalmazott képviselője) úgy dönt, hogy visszavonja, minden erőfeszítést meg kell tenni annak érdekében, hogy a megfigyeléseket a lehető legpontosabban kiegészítsék és jelentsék. A teljes végső értékelést az alany visszavonásakor kell elvégezni, fel kell jegyezni a visszavonás okát, és meg kell kísérelni az utóértékelést.

   Az alanyok a következő okok miatt eltávolíthatók a vizsgálatból:

   • jelentős protokollsértés a nyomozó részéről
   • jelentős meg nem felelés az alany részéről
   • az alany megtagadása a kezelés vagy a megfigyelések folytatásától
   • elfogadhatatlan toxicitás
   • a vizsgáló döntése, amely szerint a felmondás az alany legjobb egészségügyi érdeke
   • nem kapcsolódó egészségügyi betegség vagy szövődmény
   • terhesség
   • alkohol- vagy kábítószer-visszaélés bizonyítéka Azok az alanyok, akik abbahagyják vagy kivonják a vizsgálatot, nem kerülnek helyettesítésre.

   A korai abbahagyás eljárása

   Ha egy alany a vizsgálat befejezése előtt abbahagyja a tanulmányozást, meg kell szerezni a abbahagyás okát és időpontját. A vizsgálati készítmény utolsó adagjának dátumát is megkapjuk. A kezelés korai abbahagyása esetén a következő eljárásokat kell végrehajtani:

   • Klinikai vizsgálatok (szisztolés és diasztolés vérnyomás, pulzusszám, testmagasság és súly a BMI kiszámításához, valamint derék- és csípőkörfogat),
   • Vérvétel, széklet- és vizeletvétel
   • Egy 1 hetes élelmiszer-visszahívási kérdőív Abban az esetben, ha az alany nem tud visszatérni az utóellenőrző látogatásra, az oldalnak meg kell próbálnia telefonon felvenni a kapcsolatot az alanyal az esetleges nemkívánatos események nyomon követése érdekében.

   Ha egy alany visszavonja a vizsgálati készítményhez való hozzájárulását, akkor arra ösztönzik, hogy maradjon a vizsgálatban anélkül, hogy a biztonságossági adatok gyűjtésére irányuló kezelésben részesülne.

   A vizsgálati termék elszámoltathatósági eljárásai A vizsgálati termékeket (aktív vagy placebo) termékcsomagokban biztosítjuk, amelyek a helyi nyelven a vizsgálat kódszámával, a helyszín kódszámával, a gyártó nevével, a termék kódszámával, a tanulmányi látogatás számával lesznek felcímkézve. , a tételszámot, a tárolási utasításokat és a lejárati dátumokat. A termékeket a T0 látogatáskor adjuk ki a résztvevőknek. A kenyeret 2 db zsemle adagban, a kekszeket pedig 2 db kekszes adagokban fagyasztjuk le, amelyeket a résztvevők fogyasztás előtt otthon kiolvasztanak.

   Randomizációs kód karbantartása A résztvevők véletlenszerűsítési kódjait lezárt borítékban tárolják a FEM-ben. A termékkóddal kapcsolatos információkat a Cargill zárt borítékban tárolja.

   Forrásadatok ellenőrzése A vizsgálat során gyűjtött összes adatot olyan elsődleges forrásokból kell beszerezni, amelyeket írásos és elektronikus dokumentumokban rögzítettek, például az alany orvosi aktájában. A klinikai vizsgálatok eredményeit, a laboratóriumi leleteket és az EKG-nyomkövetéseket az alany elektronikus orvosi aktájába rögzítik. Semmilyen adat nem kerül be közvetlenül az esetjelentési űrlapra (CRF), anélkül, hogy azokat más korábbi forrásból, például írásos vagy elektronikus nyilvántartásból továbbítanák.

   Az alanyok kiválasztásának és visszavonásának kritériumai A következő feltételek legalább egyike: 18-65 év; BMI >27 kg/m^2. Kizárási kritériumok Az alanyokat ki kell zárni a vizsgálatból, ha megfelelnek a következő kizárási kritériumok bármelyikének: éhgyomri vércukorszint >300 mg/dl; trigliceridek >500 mg/dl; nem kontrollált magas vérnyomás (vérnyomás > 160/100 Hgmm vérnyomáscsökkentő kezelés alatt); szív- és érrendszeri betegségek (miokardiális infarktus, perkután transzluminális koszorúér angioplasztika vagy koszorúér bypass graft, instabil angina pectoris, stoke, perifériás artériás betegség); hypo- vagy hyperthyreosis; akut gyulladásos betegségek; súlyos gyomor-bélrendszeri betegségek; szív-, máj-, vese- vagy tüdőelégtelenség vagy egyéb életveszélyes betegség 5 év alatti prognózissal; szisztémás kortikoszteroidok, véralvadásgátlók, gyulladáscsökkentő vagy lipidcsökkentő és cukorbetegség elleni gyógyszerek krónikus alkalmazása; az előző 6 héten belüli kezelés bármely olyan gyógyszerrel, amelyről ismert, hogy befolyásolja a lipoprotein szintjét vagy a széklet mikrobiotáját (konkrétan antibiotikumokkal); ételintolerancia; alkoholfogyasztás > 5 ital naponta vagy kábítószer-használat; antioxidáns vitamin- vagy ásványianyag-kiegészítők használata; speciális diéta; terhesség, dohányzás.

   Egyidejű gyógyszeres terápia Minden olyan terápia, amelyet a vizsgálati alany a vizsgálat megkezdése előtt egy hónapon belül kapott és/vagy a vizsgálat alatt alkalmaznak, egyidejű terápiának kell tekinteni. Az ilyen kezelést dokumentálni kell a megfelelő CRF oldalon és az alanyok egészségügyi dokumentációjában. A vizsgálat során az egyidejű kezelésben bekövetkezett bármilyen változást egyértelműen fel kell jegyezni, és a változtatás okát dokumentálni kell.

   A következő gyógyszerek használata nem megengedett a vizsgálat során:

   kortikoszteroidok, véralvadásgátlók, gyulladáscsökkentő, lipidcsökkentő és antidiabetikumok; minden olyan gyógyszer, amelyről ismert, hogy befolyásolja a lipoprotein szintjét vagy a széklet mikrobiotáját (különösen az antibiotikumok), étrend-kiegészítők, probiotikumok, prebiotikumok vagy gyógynövények, kivéve a nemkívánatos események kezelését.

   Az alany megfelelősége A kiegészítésnek való megfelelés értékeléséhez a vizelet fenolszintjét Aleuronban gazdag táplálékkal kiegészített alanyoknál mérik a T0 és T1 időpontban. Ezen túlmenően minden hét végén minden fel nem használt vagy üres csomagot a felhasznált adagokról szóló saját nyilvántartással együtt visszaküldenek a nyomozóknak.

   Nemkívánatos események rögzítése és jelentése Nemkívánatos események A kért és kéretlen nemkívánatos eseményeket a vizsgálat során és a vizsgálati termékekkel végzett utolsó kezelést követő 30 napig rögzítjük.

   A nemkívánatos esemény (AE) bármely fizikai vagy klinikai változás vagy betegség, amelyet a vizsgálati alany a vizsgálat során bármikor tapasztalt, függetlenül attól, hogy a vizsgálati termék használatával összefügg-e vagy sem. Ez magában foglalja az új betegségek megjelenését és a már meglévő állapotok súlyosbodását. A kóros laboratóriumi értékek vagy vizsgálati eredmények általában nem tekinthetők nemkívánatos eseményeknek, kivéve, ha klinikai jeleket vagy tüneteket váltanak ki, vagy terápiás beavatkozást igényelnek. A nemkívánatos eseményeket gondosan követik a megoldásig.

   Az esemény szó szerinti leírását, a vizsgálati termékkel való kapcsolatát, és azt, hogy az eseményt súlyos nemkívánatos eseményként (SAE) is feljegyezték-e vagy sem, jelenteni kell a nemkívánatos esemény CRF-en az alany diagramján rögzített minden egyes AE esetében. Minden olyan mellékhatást, amely az első vizsgálati eljárás után és a vizsgálat teljes időtartama alatt, a végső vizsgálati eljárás során jelentkezik, jelenteni kell, függetlenül attól, hogy azok a vizsgálati termékkel kapcsolatosak-e vagy sem. Minden bejegyzésnek tartalmaznia kell a kezdési és befejezési dátumokat és időpontokat, a súlyosságot, a súlyosságot, a vizsgálati termékhez való viszonyt és a cselekvést/eredményt. Minden nemkívánatos eseményt a Szabályozási Tevékenységek Orvosi Szótárának (MedDRA) 10-es verziójában meghatározott terminológiával kell rögzíteni.

   Statisztikai elemzések Tervezett felvétel és indoklás A 34-es mintaméretet úgy határozták meg, hogy a Snedecor segítségével 0,4 μmol/L összhomocisztein (tHcy) változást detektáljon a plazmában 0,5 μmol/L standard eltéréssel (Price et al., 2010). és Cochran egyenlet α 0,05 és 1-β 0,9 (Dell et al., 2002). Figyelembe véve Price és mtsai (2010) egészséges egyéneken végzett korábbi, aleuronnal végzett vizsgálatát, valamint a lemorzsolódás szükségességét, azt javasoljuk, hogy a jelen vizsgálatban kezelt csoportonként 40 személyt vonjunk be.

   Az alapvető jellemzőket minden csoportra bemutatjuk. Az aktív táplálék és a placebo-csoport között a véletlenszerű besorolást követően esetlegesen fennmaradó különbségeket a többváltozós modellekben minden további elemzés során figyelembe veszik. A folytonos változókat átlag +/- szórásként vagy mediánként kell kifejezni interkvartilis tartományokkal és százalékban kategorikus változók esetén. A beavatkozás utáni adatokat ANOVA-val hasonlítjuk össze, az általános lineáris modellt használva, az alapvonalat kovariánsként használva. A ferde eloszlású adatok naplózásra kerülnek az elemzések előtt. Egyszerű és többszörös lineáris regressziót alkalmazunk a változók közötti kapcsolatok meghatározására, valamint független t-próbákat alkalmazunk a csoportok közötti jelentett megfelelőség különbségeinek értékelésére. Az eredményeket átlag +/- SEM-ként fejezzük ki, és a különbségek szignifikánsnak tekintendők, ha P < 0,05.

   Az elsődleges végpontok elemzésénél a „kezelési szándék” elvét alkalmazzák: a hatásosság értékelése figyelembe veszi a kezdeti randomizálást, függetlenül az alany kezelésének való megfeleléstől.

   A fő elemzés a vizsgálat végén az aktív táplálékkal kiegészített alanyok és a placebót kapott alanyok átlagos szintjei közötti különbség összehasonlításán alapul.

   A fő elemzés a vizsgálat végén az aktív táplálékkal kiegészített alanyok és a placebo táplálékkal kiegészített táplálékok átlagos szintjei közötti különbség összehasonlításán alapul.

   A kezelési karok közötti időbeli különbségeket az ismételt mérések variancia elemzése (GLM eljárás, SAS Institute Inc. SAS/STAT felhasználói kézikönyv, 9.1.3 verzió) értékeli. a WINDOWS számára. Cary, NC: SAS Institute Inc. 1989).

   A szignifikancia szintje alfa=0,05 lesz kétfarkú.

   Demográfiai adatok és kiindulási jellemzők A demográfiai és kiindulási jellemzőket, többek között, de nem kizárólagosan az életkort, nemet, fajt, etnikai hovatartozást, testsúlyt, magasságot és testtömeg-indexet, vérnyomást és táplálkozási szokásokat leíró statisztikák segítségével táblázatba foglaljuk. Az értékelés, a gyógyszerszűrés vagy a vírusszűrés leíró jellegű lesz.

   Laboratóriumi értékek Az egyes mintavételekből származó laboratóriumi adatokat és a kiindulási értékekhez viszonyított változásokat minden egyes látogatásra az átlaggal, mediánnal, szórással, minimummal és maximummal összegzik.

   KÖZVETLEN HOZZÁFÉRÉS A FORRÁSADATOKHOZ/DOKUMENTUMOKHOZ A szabályozó hatóságok esetleg auditálni kívánják a klinikai kutatási tevékenységeket, hogy értékeljék a GCP elveinek való megfelelést. Előfordulhat, hogy a szabályozó hatóság vizsgálatot is végezhet (a vizsgálat során vagy akár annak befejezése után is). Ha egy szabályozó hatóság és/vagy IRB vizsgálatot kér, a vizsgálónak haladéktalanul tájékoztatnia kell a Szponzort vagy annak megbízottját. A vizsgálónak bele kell egyeznie, hogy hozzáférést biztosít a szabályozó hatóságok számára a tanulmányokkal kapcsolatos dokumentációhoz. A nyomozó lehetővé teszi a Szponzor számára, hogy segítsen válaszolni bármilyen idézetre, valamint másolatot kapjon az ellenőrnek/auditornak átadott dokumentumokról.

   ETIKAI Intézményi Felülvizsgáló Testület/Etikai Bizottság A tanulmány végrehajtása előtt a protokollt és a tájékoztatáson alapuló beleegyezést a Comitato etico per le Sperimentazioni Cliniche c/o APSS di Trento felülvizsgálja. Az aláírt és keltezett nyilatkozatot arról, hogy a protokollt és a tájékoztatáson alapuló beleegyezést a Comitato etico per le Sperimentazioni Cliniche c/o APSS di Trento jóváhagyta, a vizsgálat megkezdése előtt a helyszínen nyilvántartani kell. A Comitato etico per le Sperimentazioni Cliniche c/o APSS di Trento tagjainak névsorának szintén szerepelnie kell a helyszínen. A protokoll bármely módosítását, kivéve az adminisztratív módosításokat, jóvá kell hagynia a Comitato etico per le Sperimentazioni Cliniche c/o APSS di Trento-val.

   Tájékozott hozzájárulás A tájékoztatáson alapuló hozzájárulási űrlapokat aláírják.

   Közzététel és titoktartás A jegyzőkönyv aláírásával a Vizsgáló beleegyezik, hogy a Cargill által szolgáltatott összes információt szigorúan bizalmasan kezeli, és hasonló bizalmas kezelést kér munkatársaitól és az IRB-től.

   A Cargill által biztosított tanulmányi dokumentumokat (protokollok, nyomozói brosúrák és egyéb anyagok) a titoktartás érdekében megfelelően tárolják. A Cargill által a Nyomozónak nyújtott információkat a Cargill közvetlen írásbeli engedélye nélkül nem közölhetik másokkal, kivéve a vizsgálatban részt venni kívánó alanyok tájékozott beleegyezésének megszerzéséhez szükséges mértékben.

   ADATKEZELÉS ÉS NYILVÁNTARTÁS A forrásadatokat/dokumentációkat az adatok rögzítésének első helyeként határozzák meg. Minden forrásdokumentumot meg kell őrizni, és a helyszínen visszakereshetőnek kell lennie. A vizsgálónak meg kell őriznie a forrásdokumentumokat a vizsgálat minden egyes tárgyához.

   A vizsgálat során a CRF-eken gyűjtött adatokat anonim módon dokumentáljuk, és az alanyokat csak az alanyok számával és kezdőbetűivel azonosítjuk. Ha kivételesen biztonsági vagy szabályozási okokból szükséges az alany azonosítása, a Cargill és a nyomozó köteles ezeket az információkat bizalmasan kezelni.

   A CRF-eken szereplő összes adatot olvashatóan, fekete tintával kell rögzíteni. Ha javításra van szükség, akkor azt úgy kell megtenni, hogy a hibás bejegyzést egy sorral át kell húzni, és mellé kell írni a helyes adatokat. A helyesbítést a nyomozónak vagy egy erre kijelölt szakképzett személynek kézjegyével és dátummal kell ellátnia. Minden olyan kért információt, amelyet nem a jegyzőkönyvben meghatározottak szerint szereztek be, magyarázattal kell ellátni a CRF-en feltüntetett mulasztásra. Minden egyes alany CRF-jének másolatát a kapcsolódó lekérdezésekkel együtt a vizsgálat helyszínén kell tartani.

   A CRF-ekkel kapcsolatos minden információnak visszavezethetőnek kell lennie a forrásdokumentumokhoz, amelyeket általában az alany fájljában tárolnak. A forrásdokumentumoknak tartalmazniuk kell minden demográfiai és orvosi információt, beleértve a laboratóriumi adatokat, EKG-kat stb., valamint az aláírt beleegyező nyilatkozat másolatát, amelyen fel kell tüntetni a vizsgálat számát és a vizsgálat címét.

   Az alábbiakban felsorolt ​​alapvető dokumentumokat a vizsgálónak a Cargill által a vizsgálat elején meghatározott ideig meg kell őriznie. A Cargill értesíti a vizsgálót/intézményt, ha a vizsgálattal kapcsolatos feljegyzésekre már nincs szükség. A nyomozó a jegyzőkönyv aláírásával hozzájárul az iratmegőrzési eljárások betartásához. Az alapvető dokumentumok közé tartoznak többek között a protokollok, reklámanyagok, AE-jelentések, tárgyi forrásrekordok, IRB-levelezés, beleegyezési űrlapok, önéletrajzok, megfigyelési látogatási naplók, laboratóriumi feljegyzések, referenciatartományok, tanúsítványok, minőség-ellenőrzési dokumentáció és minden egyéb vonatkozó dokumentumokat.

   A protokoll bármely módosítása vagy kiegészítése írásos protokollmódosítást igényel, amelyet a Cargillnek jóvá kell hagynia a végrehajtás előtt. Ha a vizsgálat felépítésében lényeges változtatásokat hajtanak végre, az IRB-t értesíteni kell, és ha szükséges, jóvá kell hagynia a változtatást az új alanyok felvétele előtt.

   Az összes adatkezelési eljárást külön, külön azonosított fájlokban részletezik, amelyekre együttesen adatkezelési tervként (DMP) hivatkozunk.