Pomiar wpływu suplementacji diety aleuronem o wysokiej zawartości błonnika i przeciwutleniaczy na biomarkery chorób sercowo-naczyniowych i mikroflory jelitowej u dorosłych z wysokim wskaźnikiem masy ciała

CELE BADAŃ Ogólnym celem badania jest ocena, czy suplementacja diety bogata w aleuron z pszenicy modyfikuje profil ryzyka sercowo-naczyniowego i metabolicznego u osób z podwyższonym ryzykiem metabolicznym.

Głównymi celami badania jest ocena, czy suplementacja żywności bogata w pszenicę aleuron modyfikuje:

1. całkowita homocysteina w osoczu (tHcy)
2. metabolity osocza związane z metabolizmem homocysteiny (w tym betaina, dimetyloglicyna, metionina, cholina, kwas foliowy, ryboflawina, witamina B6);
3. wtórne (pochodzące z mikrobioty) metabolity polifenoli pochodzące z ludzkich biopłynów;
4. stężenie kwasów żółciowych i steroli w kale.
5. profil mikroflory kałowej wygenerowany przy użyciu sekwencjonowania Illumina

Celem drugorzędnym jest ocena, czy suplementacja żywności bogata w pszenicę aleuron modyfikuje:

1. profilowanie metabolitów w oparciu o stwardnienie rozsiane osocza i moczu;
2. poziom cholesterolu całkowitego, triglicerydów, cholesterolu LDL i HDL;
3. poziomy glukozy i insuliny w surowicy;
4. wskaźniki antropometryczne;
5. poziomy izoprostanu w moczu;
6. markery przepuszczalności jelitowej w osoczu;

7. Poziom białka C-reaktywnego jako marker stanu zapalnego

   Przegląd projektu badania i punkty końcowe Badanie zostało zorganizowane jako randomizowana, podwójnie ślepa próba równoległa z grupą kontrolną otrzymującą placebo, z użyciem 2 pokarmów testowych, pokarmów bogatych w aleuron pszenicy lub pokarmów kontrolnych (placebo). Pierwszorzędowe i drugorzędowe punkty końcowe podano w powyższej części CELE BADANIA.

   Przegląd projektu Uczestnicy zostaną zidentyfikowani i zrekrutowani w U.O.S. di Dietetica e Nutrizione Clinica, St Chiara, APSS Trento i Fondazione Edmund Mach. Uczestnicy zostaną poinformowani o celach i procedurach badania oraz zostaną poddani wstępnej selekcji na podstawie kryteriów włączenia/wyłączenia. Jeśli kwalifikują się, podpiszą świadomą zgodę i przystąpią do badania z wizytą T-1, wykonywaną w poradni w godzinach od 8.00 do 9.00, gdzie zostanie przeprowadzona kliniczna i biochemiczna ocena stanu zdrowia. Jeśli uczestnicy nadal kwalifikują się do badania zgodnie ze wszystkimi kryteriami wykluczenia, zostaną włączeni do badania i losowo przydzieleni do grupy otrzymującej aktywną suplementację lub placebo podczas wizyty T0, 2 tygodnie później (okres wstępny). Porady dietetyczne będą udzielane na wizytach T-1 i T0. Uczestnicy zostaną poproszeni o przestrzeganie śródziemnomorskich nawyków żywieniowych i umiarkowaną aktywność fizyczną.

   Wizyta kliniczna, badania kliniczne i pobranie krwi zostaną przeprowadzone po całonocnym poszczeniu na początku fazy docierania (wizyta T-1). Badania kliniczne, pobranie krwi, kału i moczu zostaną wykonane na wizycie T0 (tydzień 2) i T1 (tydzień 6). Czterodniowy dzienniczek żywieniowy zostanie rozdany i wypełniony przez cztery kolejne dni przez uczestników badania przed wizytą T0 i T1.

   Każdy uczestnik będzie poddany:

   • Ocena kliniczna i biochemiczna w celu wykluczenia możliwego stanu chorobowego (T-1, tydzień 0): kwestionariusz wywiadu, EKG, hemokrom, kreatynina, enzymy wątrobowe).
   • Pobranie krwi (30 ml) do analiz biochemicznych (T-1 - tydzień 0-, T0 - tydzień 2- i T1 - tydzień 6-).
   • Pobranie stolca i 24-godzinnego moczu do analiz biochemicznych (T0 - tydzień 2- i T1 - tydzień 6-).
   • Ocena antropometryczna: ciśnienie skurczowe i rozkurczowe, tętno, wzrost i waga do obliczenia BMI oraz obwodów talii i bioder (T-1 - tydzień 0-, T0 - tydzień 2- i T1 - tydzień 6-).

   Wszystkie wizyty będą realizowane w klinice w godzinach 8.00-9.00, na czczo. Każda wizyta będzie trwała około 1 godz. Uczestnicy zostaną poproszeni o niemodyfikowanie swojej dotychczasowej diety, z wyjątkiem wprowadzania suplementów w zamian za odpowiednią żywność. Zostaną również poproszeni o unikanie leków, suplementów i integratorów oraz o natychmiastowe informowanie monitorujących o każdym stanie chorobowym lub zmianach w przepisanych lekach (nowa lub bieżąca terapia lekowa).

   Rekrutacja uczestników Uczestnicy będą identyfikowani i rekrutowani w U.O.S. di Dietetica e Nutrizione Clinica, St Chiara, APSS Trento i Fondazione Edmund Mach. Wśród nich znajdą się zarówno pracownicy instytucji, jak i członkowie społeczeństwa. Uczestnicy zostaną poinformowani o celach i procedurach badania oraz zostaną poddani wstępnej selekcji na podstawie kryteriów włączenia/wyłączenia. Jeśli kwalifikują się, podpiszą świadomą zgodę i przystąpią do badania z wizytą T-1, podczas której zostanie przeprowadzona kliniczna i biochemiczna ocena stanu zdrowia. Jeśli uczestnicy nadal kwalifikują się do badania zgodnie ze wszystkimi kryteriami włączenia/wyłączenia, zostaną włączeni do badania i losowo przydzieleni do grupy otrzymującej aktywną suplementację lub placebo podczas wizyty T0, dwa tygodnie później (okres wstępny).

   Suplementacja Po dwutygodniowej fazie wstępnej uczestnicy zostaną losowo przydzieleni do grupy otrzymującej suplementację pokarmem bogatym w aleuron pszenicy lub pokarmem placebo przez cztery tygodnie metodą podwójnie ślepej próby.

   Poradnictwo dietetyczne Poradnictwo dietetyczne będzie udzielane na wizytach T-1 i T0. Uczestnicy zostaną poproszeni o przestrzeganie śródziemnomorskich nawyków żywieniowych i umiarkowaną aktywność fizyczną.

   Kontynuacja Interwencja będzie obejmowała czterotygodniowe okresy leczenia. Wizyta kliniczna, badania kliniczne i pobranie krwi zostaną przeprowadzone po całonocnym poście na wizycie T-1 - tydzień 0-. Badania kliniczne, pobranie krwi oraz pobranie stolca i moczu zostaną przeprowadzone na wizycie T0 i T1 (T0 dzień przed suplementacją, T1 będzie 4 tydzień po leczeniu albo pokarmy z dodatkiem aleuronu, albo pokarmy z dodatkiem placebo). Podczas wizyty T-1 zostanie przeprowadzony kwestionariusz dotyczący częstotliwości wycofywania żywności w ciągu jednego roku. Przed wizytą T0 i T1 zostanie przeprowadzony tygodniowy kwestionariusz częstotliwości wycofywania żywności.

   Ocena kliniczna Elektrokardiogram. Podczas badania przesiewowego zostanie wykonane 12-odprowadzeniowe EKG. Elektrokardiografy będą przeglądane i interpretowane przez U.O.S. di Dietetica e Nutrizione Clinica, St Chiara, APSS Trento.

   Tętnicze ciśnienie krwi (BP) będzie mierzone zgodnie z wytycznymi dotyczącymi nadciśnienia tętniczego ISH/WHO 2004. Wykorzystany zostanie „Oscylometryczny monitor ciśnienia krwi OMRON HEM705CP”. Badani będą odpoczywać i siedzieć przez 10 minut przed pomiarem ciśnienia krwi na prawym ramieniu; Pierwszy środek zostanie zwolniony; drugi i trzeci pomiar nastąpią po pierwszym, po 2 minuty każdy, na rozluźnionej i nagiej ręce, z kątem ramienia na tym samym poziomie serca. Do analizy zostanie wykorzystana średnia z dwóch ostatnich miar.

   Waga i wzrost będą mierzone na standardowej wadze z dołączonym wysokościomierzem do pomiaru wzrostu i będą zapisywane jako równe odpowiednio 100 g i 1 cm, jeśli to konieczne. Działania będą przeprowadzane na osobach bez butów, płaszczy lub ciężkiego opatrunku. BMI zostanie obliczone w kg/m2.

   Obwód talii (pępka) zostanie zmierzony zgodnie z zaleceniami National Institutes of Health, National Heart, Lung and Blood Institute. Wytyczne kliniczne dotyczące rozpoznawania, oceny i leczenia nadwagi i otyłości u dorosłych; raport dowodowy. W praktyce, gdy osoba stoi wyprostowana z rozluźnionym brzuchem, ramionami wzdłuż boków i stopami razem, obwód talii będzie mierzony z dokładnością do 0,1 cm, na poziomie w połowie odległości między dolnym brzegiem żebra a grzebieniem biodrowym z taśmą dookoła ciała w pozycji poziomej. Obwód bioder będzie mierzony na poziomie bitkrętarzowym. Obliczony zostanie stosunek obwodu talii do obwodu bioder (WHR).

   Kwestionariusze. Wszystkie informacje zostaną zebrane i zapisane w zatwierdzonych kwestionariuszach, w tym identyfikacja osobista, historia medyczna oraz informacje na temat czynników ryzyka CVD, zażywania narkotyków, aktywności fizycznej i nawyków żywieniowych. Ponadto zostanie zebrany trzydniowy dziennik żywności.

   Pobieranie krwi i moczu Krew (≤ 30 ml) zostanie pobrana z żyły łokciowej, przy minimalnym zastoju między godziną 8.00 a 9.00 po 12-godzinnym poście, od osób, które powstrzymały się od palenia przez co najmniej 6 godzin. Od każdego uczestnika będzie pobierana całodobowa zbiórka moczu. Zmierzy się objętość moczu i 5 podwielokrotności po 5 ml będzie przechowywanych w temperaturze -80°C.

   Pobieranie próbek kału Próbki kału będą przetwarzane w ciągu 2 godzin od ich pobrania. W skrócie, 1 g podwielokrotności kału zostaną później zmieszane z RNA i przechowywane w temperaturze -80°C dla późniejszego DNA. Próbki kału zostaną również zamrożone bezpośrednio w temperaturze -80°C do analizy metabolitów.

   Badania laboratoryjne (U.O.S. di Dietetica e Nutrizione Clinica, St Chiara, APSS Trento) Próbki krwi zostaną odwirowane zgodnie z wymaganiami badań, które mają być wykonane, bezpośrednio po pobraniu krwi. Osocze lub surowica zostaną oddzielone, część zostanie natychmiast przetestowana, a pozostała frakcja będzie przechowywana w temperaturze -80°C.

   Cholesterol, triglicerydy, cholesterol HDL i glukoza zostaną ocenione za pomocą testów chromogennych. Cholesterol LDL zostanie obliczony według wzoru Friedewalda.

   Poziomy insuliny zostaną ocenione metodą ELISA. Liczba komórek krwi zostanie oceniona za pomocą standardowych testów. C-RP będzie mierzone za pomocą testów nefelometrycznych; F2-izoprostany będą mierzone w moczu jako miara stresu oksydacyjnego, za pomocą specjalnego zestawu EIA (Cayman Chemicals, Ann Arbor, Michigan, USA), po oczyszczeniu metodą chromatografii na fazie stałej (kolumny SepPack).

   Testy laboratoryjne (Fondazione Edmund Mach [FEM]) LPS w osoczu, IgG specyficzne dla LPS, CD14, białko wiążące LPS i 8-izorpostan w moczu zostaną zmierzone spektrofotometrycznie przy użyciu komercyjnego zestawu ELISA.

   Profilowanie metabolitów w moczu i osoczu (FEM). Próbki moczu i krwi (osocza i surowicy) zostaną poddane zarówno ukierunkowanej metabolomice (UPLC-MS/MS dla związków nielotnych i GC-MS/MS dla związków lotnych), jak i nieukierunkowanej metabolomice (ULPC-Q-TOF-MS i Nano -FTMS-Q-TOF dla związków nielotnych i GC-TOF dla związków lotnych) (Vanza i in., 2001 2012). Do docelowego profilowania metabolitów w osoczu zostanie użyty zestaw Biocrates AbsoluteIDQ® p180 oparty na MS, generujący dokładne dane ilościowe dotyczące 180 ludzkich metabolitów związanych z ryzykiem choroby cukrzycowej. Specyficzna ukierunkowana analiza zostanie również zastosowana do oznaczania ilościowego profili lipidów w surowicy, kwasów żółciowych, SCFA i mikrobiologicznych metabolitów polifenoli w płynach biologicznych (w tym w kale) przy użyciu UPLC/QqQ-MS/MS (Vrhovsek i in., 2012).

   Analiza mikroflory kałowej (MES). Zmiany mikrobiologiczne w kale zostaną ocenione przy użyciu metagenomiki pirosekwencjonowania 454. W skrócie, po dostarczeniu próbek kału metagenomiczny DNA zostanie wyekstrahowany przy użyciu zestawu FastDNA SPIN Kit for FECES z MPbio.com. Stosując uniwersalne startery bakteryjne, region V1-V3 zawierający gen 16S rRNA obecny w metagenomowym DNA kału zostanie zamplifikowany i poddany pirosekwencjonowaniu 454. Adaptery Multiplex Identifier (MID) będą używane w GS FLX Titanium Chemistry - Extended MID Set w celu uzyskania sekwencji o długości około 600 pz, które zostaną BLASOWANE w publicznie dostępnych filogenetycznych bazach danych 16S rRNA przy użyciu potoku QIIME (http://qiime.org / ) dając dobrą identyfikację gatunkową mikroflory jelitowej człowieka. Celem jest łącznie 20 000 użytecznych sekwencji na próbkę kału. Po kontroli jakości i mikrobiologicznej analizie ekologicznej, wielowymiarowe statystyki zostaną wykorzystane do skorelowania zmian w składzie i strukturze mikroflory kałowej u osób po spożyciu żywności z dodatkiem Aleuron w porównaniu z żywnością kontrolną (De Filippo i in., 2010). W celu potwierdzenia zmian w populacjach drobnoustrojów zidentyfikowanych na podstawie danych metagenomicznych pirosekwencjonowania zostanie zastosowany ilościowy PCR ze starterami specyficznymi dla gatunku i grupy. Za pomocą qPCR zliczona zostanie całkowita liczba bifidobakterii, całkowita liczba enterobakterii, całkowita liczba bakterii i pałeczek kwasu mlekowego we wszystkich próbkach kału. Będzie to minimum i będzie działać jako niezależna kontrola jakości pirosekwencjonowania. Dodatkowo iw zależności od tego, co jest widoczne pod względem zmian poziomu gatunku z pirosekwencjonowania, zastosowane zostaną startery specyficzne dla gatunku w celu potwierdzenia wszystkich statystycznie istotnych różnic zaobserwowanych w porównaniu między punktami czasowymi karmienia Aleuronem i kontrolnymi.

   Randomizacja i zaślepienie Uczestnicy, podzieleni według płci, zostaną losowo przydzieleni do leczenia aleuronem lub placebo na podstawie wygenerowanej elektronicznie liczby dostarczonej przez statystyka. Badacze kliniczni i personel laboratoryjny będą zaślepieni co do randomizacji.

   Badane produkty (mąka chlebowa, herbatniki, płatki RTE) będą dostarczane przez firmę Cargill w sposób zaślepiony, ale oznaczone literą E lub W w celu rozróżnienia zabiegów. Testowane produkty będą pakowane w podobne opakowania iw porcjach dziennych. Pokarmy placebo zawierają te same składniki, co pokarmy aktywne, z wyjątkiem celulozy zastępującej Aleuron i są bardzo podobne do tego ostatniego pod względem wielkości, kształtu i koloru.

   Leczenie Suplementacja badana zostanie wprowadzona do codziennej diety zgodnie z preferencjami uczestnika do łącznej dawki 27 g Aleuron/dzień lub równoważnej dawki placebo. Jedna kromka chleba (35 g) zawiera 4,8 g aleuronu; jedno ciastko (15 g) zawiera 4,5 g aleuronu; 36 g płatków RTE zawiera 9 g aleuronu. Pokarmy placebo zawierają te same składniki, co pokarmy aktywne, z wyjątkiem celulozy zastępującej błonnik Aleuron i są bardzo podobne do tego ostatniego pod względem wielkości, kształtu i koloru. Badane produkty (aktywne lub placebo) będą dostarczane w opakowaniach produktów, które będą oznaczone w lokalnym języku numerem kodu badania, numerem kodu miejsca, nazwą producenta, numerem pacjenta, numerem wizyty w ramach badania, numerem serii, instrukcją przechowywania i daty wygaśnięcia. Produkty będą wydawane uczestnikom podczas wizyty T0.

   Czas trwania i harmonogram badania Po dwutygodniowej fazie wstępnej uczestnicy zostaną losowo przydzieleni do grupy otrzymującej żywność z dodatkiem Aleuron lub grupy otrzymującej placebo na 4-tygodniową interwencję dietetyczną.

   Całkowity czas trwania badania, wliczając w to okres wstępny i leczenie, wyniesie 6 tygodni. Rekrutacja badanych rozpocznie się po pozytywnej ocenie komisji ds. badań i etyki APSS, a pierwsi badani rozpoczną okres docierania w ciągu dwóch tygodni od tego momentu rozpoczęcia. Osoby badane będą rekrutowane przez okres 6 miesięcy, a badanie zostanie zakończone po upływie 8 miesięcy od momentu pierwszej rekrutacji osób badanych.

   Kryteria przerwania Kryteria Zgodnie z Deklaracją Helsińską, Wytycznymi Dobrej Praktyki Klinicznej ICH oraz Przepisami Amerykańskiej Agencji ds. /jej przyszłą opiekę medyczną przez lekarza lub w placówce. Badacz i Sponsor mają również prawo do wycofania uczestników z badania (patrz poniżej). Ponadto Sponsor może zdecydować o zakończeniu badania w dowolnym momencie z dowolnego powodu.

   Jeżeli podmiot (lub jego prawnie upoważniony przedstawiciel) zdecyduje się wycofać, zostaną podjęte wszelkie starania, aby obserwacje zostały uzupełnione i zgłoszone w możliwie najdokładniejszy sposób. Pełna ocena końcowa powinna być dokonana w momencie rezygnacji podmiotu, odnotowania przyczyny rezygnacji i podjęcia próby przeprowadzenia oceny kontrolnej.

   Uczestnicy mogą zostać usunięci z badania z następujących powodów:

   • istotne naruszenie protokołu ze strony Badacza
   • istotna niezgodność ze strony podmiotu
   • odmowa podmiotu dalszego leczenia lub obserwacji
   • niedopuszczalna toksyczność
   • decyzji badacza, że ​​przerwanie ciąży leży w najlepszym interesie medycznym uczestnika
   • niepowiązana choroba medyczna lub powikłanie
   • ciąża
   • dowody na nadużywanie alkoholu lub substancji psychoaktywnych Uczestnicy, którzy przerwali badanie lub zostali wycofani z badania, nie zostaną zastąpieni.

   Procedura wcześniejszego przerwania

   Jeśli pacjent przerwie badanie przed zakończeniem badania, zostanie uzyskany powód i data przerwania. Uzyskana zostanie również data ostatniej dawki badanego produktu. W przypadku wcześniejszego odstawienia należy wykonać następujące czynności:

   • Badania kliniczne (ciśnienie skurczowe i rozkurczowe, tętno, wzrost i waga do obliczenia BMI, obwód talii i bioder),
   • Pobieranie krwi, kału i moczu
   • Kwestionariusz wycofania żywności z 1 tygodnia W przypadku, gdy pacjent nie może wrócić na wizytę kontrolną, ośrodek powinien podjąć próbę skontaktowania się z nim telefonicznie w celu śledzenia wszelkich zdarzeń niepożądanych.

   Jeśli uczestnik wycofa zgodę na otrzymanie badanego produktu, będzie zachęcany do pozostania w badaniu bez leczenia w celu zebrania danych dotyczących bezpieczeństwa.

   Procedury odpowiedzialności za badany produkt Badane produkty (aktywne lub placebo) będą dostarczane w opakowaniach produktów, które będą oznaczone w lokalnym języku numerem kodu badania, numerem kodu miejsca, nazwą producenta, numerem kodu produktu, numerem wizyty studyjnej , numer serii, instrukcje dotyczące przechowywania i daty ważności. Produkty będą wydawane uczestnikom podczas wizyty T0. Chleb zostanie zamrożony w porcjach po 2 bułki, a herbatniki zostaną zamrożone w porcjach po 2 herbatniki, które zostaną rozmrożone w domu przez uczestników przed spożyciem.

   Konserwacja kodu randomizacji Kody randomizacji dla uczestników będą przechowywane w zapieczętowanej kopercie w FEM. Informacje o kodzie produktu będą przechowywane w zapieczętowanej kopercie w firmie Cargill.

   Kontrola danych źródłowych Wszystkie dane zebrane w trakcie badania zostaną uzyskane z pierwotnych źródeł, które zostały zapisane w dokumentach pisemnych i elektronicznych, takich jak dokumentacja medyczna uczestnika. Wyniki badań klinicznych, wyniki badań laboratoryjnych i zapisy EKG zostaną zapisane w elektronicznej dokumentacji medycznej pacjenta. Żadne dane nie zostaną wprowadzone bezpośrednio do formularza opisu przypadku (CRF) bez przeniesienia ich z innego wcześniejszego źródła, takiego jak zapisy pisemne lub elektroniczne.

   Wybór i wycofanie uczestników Kryteria włączenia Co najmniej jeden z następujących warunków: Wiek 18-65 lat; BMI >27kg/m^2. Kryteria wykluczenia Uczestników należy wykluczyć z udziału w badaniu, jeśli spełniają którekolwiek z poniższych kryteriów wykluczenia: stężenie glukozy we krwi na czczo >300 mg/dl; trójglicerydy >500 mg/dl; niekontrolowane nadciśnienie tętnicze (BP >160/100 mm Hg przy leczeniu hipotensyjnym); choroba sercowo-naczyniowa (zawał mięśnia sercowego, przezskórna śródnaczyniowa angioplastyka wieńcowa lub pomostowanie aortalno-wieńcowe, niestabilna dusznica bolesna, udar mózgu, choroba tętnic obwodowych); niedoczynność lub nadczynność tarczycy; ostre choroby zapalne; ciężkie choroby żołądkowo-jelitowe; niewydolność serca, wątroby, nerek lub płuc lub inna choroba zagrażająca życiu o rokowaniu <5 lat; przewlekłe stosowanie ogólnoustrojowych kortykosteroidów, leków przeciwzakrzepowych, przeciwzapalnych lub obniżających poziom lipidów i leków przeciwcukrzycowych; leczenie w ciągu ostatnich 6 tygodni jakimkolwiek lekiem, o którym wiadomo, że wpływa na poziom lipoprotein lub mikroflorę kałową (w szczególności antybiotyki); nietolerancje pokarmowe; spożycie alkoholu >5 drinków dziennie lub używanie środków odurzających; stosowanie przeciwutleniających witamin lub suplementów mineralnych; specjalna dieta; ciąża, palenie.

   Terapia lekami towarzyszącymi Jakakolwiek terapia otrzymana przez osobnika w ciągu jednego miesiąca przed rozpoczęciem badania i/lub podana podczas badania będzie uważana za terapię towarzyszącą. Takie leczenie musi być udokumentowane na odpowiedniej stronie CRF oraz w dokumentacji medycznej pacjentów. Wszelkie zmiany w terapii towarzyszącej podczas badania muszą być wyraźnie odnotowane, a przyczyna zmiany powinna zostać udokumentowana.

   Podczas badania zabronione będzie stosowanie następujących leków:

   Kortykosteroidy, leki przeciwzakrzepowe, przeciwzapalne, obniżające poziom lipidów i leki przeciwcukrzycowe; wszelkie leki, o których wiadomo, że wpływają na poziom lipoprotein lub mikroflorę kałową (w szczególności antybiotyki), suplementy, probiotyki, prebiotyki lub zioła, z wyjątkiem leczenia działań niepożądanych.

   Zgodność osobnika Aby ocenić zgodność z suplementacją, fenole w moczu będą mierzone u osobników suplementowanych pokarmem bogatym w aleuron w czasie T0 i T1. Co więcej, wszystkie niewykorzystane lub puste opakowania na koniec każdego tygodnia wraz z własnym zapisem zużytych porcji zostaną zwrócone badaczom.

   Rejestrowanie i zgłaszanie zdarzeń niepożądanych Zdarzenia niepożądane Zdarzenia niepożądane, zarówno zamówione, jak i niezamówione, będą rejestrowane w trakcie badania i przez 30 dni po ostatnim zastosowaniu badanych produktów.

   Zdarzenie niepożądane (AE) to jakakolwiek fizyczna lub kliniczna zmiana lub choroba, której doświadcza uczestnik w dowolnym momencie podczas trwania badania, niezależnie od tego, czy uważa się ją za związaną ze stosowaniem badanego produktu. Obejmuje to pojawienie się nowej choroby i zaostrzenie wcześniej istniejących warunków. Nieprawidłowe wartości laboratoryjne lub wyniki badań nie powinny być generalnie uważane za AE, chyba że wywołują objawy kliniczne lub wymagają interwencji terapeutycznej. Zdarzenia niepożądane będą uważnie obserwowane aż do ich rozwiązania.

   Dosłowny opis zdarzenia, jego związek z badanym produktem oraz to, czy zdarzenie zostało również zarejestrowane jako poważne zdarzenie niepożądane (SAE), należy podać w CRF zdarzenia niepożądanego dla każdego AE odnotowanego w karcie pacjenta. Wszelkie zdarzenia niepożądane występujące po pierwszej procedurze badawczej i podczas całego przebiegu badania, aż do końcowej procedury badawczej, należy zgłaszać, niezależnie od tego, czy uznaje się je za związane z badanym produktem, czy nie. Każdy wpis musi zawierać daty i godziny rozpoczęcia i zakończenia, powagę, dotkliwość, związek z badanym produktem oraz działanie/wynik. Wszystkie AE powinny być rejestrowane przy użyciu terminologii zdefiniowanej w Medical Dictionary for Regulatory Activities (MedDRA), wersja 10.

   Analizy statystyczne Planowana rejestracja i uzasadnienie Wielkość próby 34 określono w celu wykrycia zmiany całkowitej homocysteiny (tHcy) o 0,4 μmol/l w osoczu ze standardową zmiennością 0,5 μmol/l (zaczerpniętą z Price et al., 2010) przy użyciu Snedecor oraz równanie Cochrana z α równym 0,05 i 1-β równym 0,9 (Dell i in., 2002). Biorąc pod uwagę poprzednie badanie z aleuronem u zdrowych osób Price i in., (2010) oraz potrzebę uwzględnienia rezygnacji, proponujemy rekrutację 40 osób na grupę leczoną w niniejszym badaniu.

   Podstawowa charakterystyka zostanie przedstawiona dla każdej grupy. Ostatecznie resztkowe różnice między grupą aktywnego jedzenia a grupą placebo po randomizacji zostaną uwzględnione w celu dostosowania w modelach wielowymiarowych we wszystkich dalszych analizach. Zmienne ciągłe zostaną wyrażone jako średnie +/- odchylenie standardowe lub mediany z przedziałami międzykwartylowymi oraz jako procent dla zmiennych kategorycznych. Dane po interwencji zostaną porównane za pomocą ANOVA przy użyciu ogólnego modelu liniowego z wartością bazową jako współzmienną. Dane o skośnym rozkładzie zostaną przed analizą poddane transformacji logarytmicznej. Prosta i wielokrotna regresja liniowa zostanie wykorzystana do określenia zależności między zmiennymi, a niezależne testy t przeprowadzone w celu oceny różnic w zgłaszanej zgodności między grupami. Wyniki zostaną wyrażone jako średnia +/- SEM, a różnice zostaną uznane za istotne przy P < 0,05.

   Przy analizie pierwszorzędowych punktów końcowych przyjęta zostanie zasada „intencji leczenia”: ocena skuteczności uwzględnia wstępną randomizację niezależnie od przestrzegania przez pacjenta leczenia.

   Główna analiza będzie oparta na porównaniu różnicy średnich poziomów na koniec badania u osób suplementowanych pokarmami aktywnymi i u osób otrzymujących pokarmy placebo.

   Główna analiza będzie oparta na porównaniu różnicy średnich poziomów na koniec badania u osób suplementowanych pokarmami aktywnymi oraz u osób suplementowanych pokarmami placebo.

   Różnice w czasie między grupami leczenia zostaną ocenione na podstawie analizy wariancji dla powtarzanych pomiarów (Procedura GLM, SAS Institute Inc. Podręcznik użytkownika SAS/STAT, wersja 9.1.3 dla Windowsa. Cary, Karolina Północna: SAS Institute Inc. 1989).

   Poziom istotności wyniesie alfa=0,05 dwustronny.

   Dane demograficzne i charakterystyka wyjściowa Dane demograficzne i charakterystyka wyjściowa, w tym między innymi wiek, płeć, rasa, pochodzenie etniczne, masa ciała, wzrost i wskaźnik masy ciała, ciśnienie krwi i nawyki żywieniowe zostaną zestawione w tabeli przy użyciu statystyk opisowych Oceny wyjściowe Wszelkie nieprawidłowe wyniki w wyjściowym elektrokardiogramie ocena, badanie przesiewowe leków lub przesiewowe wirusy zostaną podsumowane opisowo.

   Wartości laboratoryjne Dane laboratoryjne z każdego pobierania próbek i zmiany w stosunku do wartości wyjściowych zostaną podsumowane dla każdej wizyty za pomocą średniej, mediany, odchylenia standardowego, wartości minimalnej i maksymalnej.

   BEZPOŚREDNI DOSTĘP DO DANYCH/DOKUMENTÓW ŹRÓDŁOWYCH Organy regulacyjne mogą chcieć przeprowadzać audyty badań klinicznych w celu oceny zgodności z zasadami GCP. Organ regulacyjny może również chcieć przeprowadzić kontrolę (w trakcie badania lub nawet po jego zakończeniu). Jeżeli inspekcja jest wymagana przez organ regulacyjny i/lub IRB, Badacz musi niezwłocznie poinformować o tym Sponsora lub osobę przez niego wyznaczoną. Badacz musi wyrazić zgodę na zapewnienie organom regulacyjnym dostępu do dokumentacji związanej z badaniem. Badacz umożliwi Sponsorowi pomoc w odpowiedzi na wszelkie cytaty, a także otrzyma kopie wszelkich dokumentów dostarczonych inspektorowi/audytorowi.

   ETYKA Instytucjonalna komisja rewizyjna/komitet ds. etyki Przed wdrożeniem tego badania protokół i świadoma zgoda zostaną zweryfikowane przez Comitato etico per le Sperimentazioni Cliniche c/o APSS di Trento. Podpisane i opatrzone datą oświadczenie, że protokół i świadoma zgoda zostały zatwierdzone przez Comitato etico per le Sperimentazioni Cliniche c/o APSS di Trento, musi znajdować się w aktach ośrodka przed rozpoczęciem badania. Wykaz członków Comitato etico per le Sperimentazioni Cliniche c/o APSS di Trento musi również znajdować się w aktach na miejscu. Wszelkie zmiany w protokole, inne niż administracyjne, muszą zostać zatwierdzone przez Comitato etico per le Sperimentazioni Cliniche c/o APSS di Trento.

   Świadoma zgoda Formularze świadomej zgody zostaną podpisane.

   Ujawnianie i poufność Podpisując protokół, badacz zgadza się zachować wszystkie informacje dostarczone przez firmę Cargill w ścisłej tajemnicy i zażądać podobnej poufności od swojego personelu i IRB.

   Dokumenty badawcze dostarczone przez firmę Cargill (protokoły, broszury badacza i inne materiały) będą odpowiednio przechowywane w celu zapewnienia poufności. Informacje dostarczone Badaczowi przez firmę Cargill nie mogą zostać ujawnione innym osobom bez bezpośredniej pisemnej zgody firmy Cargill, z wyjątkiem zakresu niezbędnego do uzyskania świadomej zgody uczestników, którzy chcą wziąć udział w badaniu.

   OBSŁUGA DANYCH I PRZECHOWYWANIE DANYCH Źródłowe dane/dokumentację definiuje się jako pierwsze miejsce, w którym dane są rejestrowane. Wszelkie dokumenty źródłowe muszą być przechowywane i możliwe do odzyskania na miejscu. Badacz musi przechowywać dokumenty źródłowe dla każdego tematu w badaniu.

   Dane zebrane na CRF podczas badania będą dokumentowane w sposób anonimowy, a uczestnicy będą identyfikowani wyłącznie za pomocą numerów i inicjałów pacjentów. Jeśli, jako wyjątek, identyfikacja podmiotu jest konieczna ze względów bezpieczeństwa lub ze względów regulacyjnych, firma Cargill i Badacz są zobowiązani do zachowania poufności tych informacji.

   Wszystkie dane wprowadzone do CRF muszą być zapisane w czytelny sposób czarnym atramentem. Jeżeli konieczna jest korekta, należy dokonać jej poprzez przekreślenie błędnego wpisu jednym wierszem i wpisanie obok poprawnej informacji. Korekta musi być parafowana i opatrzona datą przez Badacza lub wyznaczoną wykwalifikowaną osobę. Wszelkie żądane informacje, które nie zostały uzyskane zgodnie z protokołem, powinny zawierać wyjaśnienie pominięcia odnotowanego w CRF. Kopia CRF każdego pacjenta wraz z powiązanymi zapytaniami musi być przechowywana w ośrodku badawczym.

   Wszystkie informacje na temat CRF muszą być identyfikowalne z dokumentami źródłowymi, które są zazwyczaj przechowywane w aktach podmiotu. Dokumenty źródłowe powinny zawierać wszystkie dane demograficzne i medyczne, w tym dane laboratoryjne, EKG itp., a także kopię podpisanego formularza świadomej zgody, który powinien zawierać numer badania i tytuł badania.

   Istotne dokumenty wymienione poniżej muszą być przechowywane przez badacza przez okres określony przez firmę Cargill na początku badania. Firma Cargill powiadomi badacza/instytucję, gdy dokumentacja związana z badaniem nie będzie już potrzebna. Badacz wyraża zgodę na przestrzeganie procedur przechowywania dokumentów poprzez podpisanie protokołu. Niezbędne dokumenty obejmują między innymi protokoły, materiały reklamowe, raporty AE, przedmiotowe źródła źródłowe, korespondencję IRB, formularze zgody, życiorysy, dzienniki wizyt monitorujących, zapisy laboratoryjne, zakresy referencyjne, certyfikaty, dokumentację kontroli jakości i wszelkie inne stosowne dokumenty.

   Każda zmiana lub uzupełnienie tego protokołu wymaga pisemnej poprawki do protokołu, która musi zostać zatwierdzona przez firmę Cargill przed wdrożeniem. W przypadku wprowadzenia istotnych zmian w projekcie badania należy powiadomić IRB, aw razie potrzeby zatwierdzić zmianę przed włączeniem nowych uczestników.

   Wszystkie procedury zarządzania danymi zostaną wyszczególnione w osobnych, wyraźnie określonych plikach, które łącznie będą określane jako plan zarządzania danymi (DMP).