Misurazione dell'impatto dell'integrazione alimentare con un aleurone ad alto contenuto di fibre e antiossidanti sui biomarcatori delle malattie cardiovascolari e del microbiota intestinale negli adulti con indice di massa corporea elevato

OBIETTIVI DELLO STUDIO L'obiettivo generale dello studio è valutare se l'integrazione alimentare ricca di aleurone di frumento modifica i profili di rischio cardiovascolare e metabolico in soggetti ad aumentato rischio metabolico.

Gli obiettivi primari della sperimentazione sono valutare se l'integrazione alimentare ricca di aleurone di frumento modifica:

1. omocisteina plasmatica totale (tHcy)
2. metaboliti plasmatici correlati al metabolismo dell'omocisteina (tra cui betaina, dimetilglicina, metionina, colina, acido folico, riboflavina, vitamina B6);
3. metaboliti polifenolici secondari (derivati ​​dal microbiota) del biofluido umano;
4. concentrazioni fecali di acido biliare e steroli fecali.
5. profilo del microbiota fecale generato utilizzando il sequenziamento Illumina

Obiettivi secondari sono valutare se l'integrazione alimentare ricca di aleurone di frumento modifica:

1. profilazione dei metaboliti basata sulla SM plasmatica e urinaria;
2. livelli di colesterolo totale, trigliceridi, colesterolo LDL e HDL;
3. livelli sierici di glucosio e insulina;
4. indici antropometrici;
5. livelli urinari di isoprostano;
6. marcatori di permeabilità intestinale nel plasma;

7. Livelli di proteina C-reattiva come marker di infiammazione

   Panoramica del disegno dello studio ed endpoint Lo studio è impostato come uno studio parallelo controllato con placebo, randomizzato, in doppio cieco con 2 alimenti di prova, alimenti ricchi di grano Aleurone o alimenti di controllo (placebo). Gli endpoint primari e secondari sono indicati nella sezione precedente, OBIETTIVI DI STUDIO.

   Panoramica del progetto I partecipanti saranno identificati e reclutati presso l'U.O.S. di Dietetica e Nutrizione Clinica, Santa Chiara, APSS Trento e Fondazione Edmund Mach. I partecipanti saranno informati sugli obiettivi e sulle procedure dello studio e saranno pre-selezionati sulla base dei criteri di inclusione/esclusione. Se idonei, firmeranno il consenso informato ed entreranno in studio con visita T-1, eseguita presso la clinica tra le 8.00 e le 9.00, dove verrà effettuata una valutazione clinica e biochimica dello stato di salute. Se i soggetti sono ancora idonei per lo studio in base a tutti i criteri di esclusione, verranno inclusi nello studio e randomizzati per ricevere l'integrazione attiva o il placebo alla visita T0, 2 settimane dopo (periodo di run-in). Una consulenza dietetica verrà somministrata alle visite T-1 e T0. Ai partecipanti verrà consigliato di seguire le abitudini alimentari mediterranee e di praticare una moderata attività fisica.

   La visita clinica, i test clinici e il prelievo di sangue verranno eseguiti dopo un digiuno notturno all'inizio della fase di rodaggio (visita T-1). Verranno eseguiti test clinici, prelievo di sangue, raccolta delle feci e delle urine, alla visita T0 (settimana 2) e T1 (settimana 6). Un diario alimentare di quattro giorni verrà distribuito e compilato per quattro giorni consecutivi dai partecipanti allo studio prima della visita T0 e T1.

   Ogni partecipante sarà sottoposto a:

   • Valutazione clinica e biochimica per escludere un possibile stato di malattia (T-1, settimana 0): questionario anamnestico, ECG, emocromo, creatinina, enzimi epatici).
   • Prelievo di sangue (30 ml) per analisi biochimiche (T-1 -settimana 0-, T0 -settimana 2- e T1-settimana 6-).
   • Raccolta delle feci e delle urine delle 24 ore per analisi biochimiche (T0 - settimana 2- e T1 - settimana 6-).
   • Valutazione antropometrica: pressione arteriosa sistolica e diastolica, frequenza cardiaca, altezza e peso per il calcolo del BMI e circonferenze vita e fianchi (T-1 -settimana 0-, T0 -settimana 2- e T1-settimana 6-).

   Tutte le visite verranno effettuate presso l'ambulatorio tra le ore 8.00 e le ore 9.00, a digiuno. Ogni visita durerà circa 1 ora. Ai partecipanti verrà chiesto di non modificare la loro dieta attuale, ad eccezione dell'introduzione di integratori in sostituzione degli alimenti corrispondenti. Verrà inoltre chiesto loro di evitare farmaci, integratori e integratori e di comunicare immediatamente agli ispettori eventuali stati di malattia o variazioni nella prescrizione di farmaci (nuova o attuale terapia farmacologica).

   Reclutamento dei partecipanti I partecipanti saranno individuati e reclutati presso l'U.O.S. di Dietetica e Nutrizione Clinica, Santa Chiara, APSS Trento e Fondazione Edmund Mach. Includeranno lavoratori di entrambe le istituzioni e membri del pubblico. I partecipanti saranno informati sugli obiettivi e sulle procedure dello studio e saranno pre-selezionati sulla base dei criteri di inclusione/esclusione. Se idonei, firmeranno il consenso informato ed entreranno in studio con la visita T-1, durante la quale verrà effettuata una valutazione clinica e biochimica dello stato di salute. Se i soggetti rimangono idonei per lo studio in base a tutti i criteri di inclusione/esclusione, verranno inclusi nello studio e randomizzati per ricevere l'integrazione attiva o il placebo alla visita T0, due settimane dopo (periodo di run-in).

   Integrazione Dopo una fase di run-in di due settimane, i partecipanti saranno randomizzati a ricevere un'integrazione con alimenti ricchi di grano Aleurone o alimenti placebo per quattro settimane in doppio cieco.

   Consulenza dietetica La consulenza dietetica sarà somministrata alle visite T-1 e T0. Ai partecipanti verrà consigliato di seguire le abitudini alimentari mediterranee e di praticare una moderata attività fisica.

   Follow-up L'intervento includerà periodi di trattamento di quattro settimane. La visita clinica, i test clinici e il prelievo di sangue verranno eseguiti dopo un digiuno notturno alla visita T-1 - settimana 0-. I test clinici, il prelievo di sangue e la raccolta delle feci e delle urine verranno eseguiti alla visita T0 e T1 (T0 il giorno prima dell'integrazione, T1 sarà la settimana 4 dopo il trattamento con alimenti integrati con aleurone o alimenti integrati con placebo). Alla visita T-1 verrà somministrato un questionario sulla frequenza dei richiami alimentari per un anno. Verrà eseguito un questionario sulla frequenza alimentare di richiamo di una settimana prima della visita T0 e T1.

   Valutazione clinica Elettrocardiogramma. Durante lo screening verrà eseguito un ECG a 12 derivazioni. Gli elettrocardiografi saranno rivisti e interpretati da U.O.S. di Dietetica e Nutrizione Clinica, Santa Chiara, APSS Trento.

   La pressione arteriosa (BP) sarà misurata secondo le linee guida per l'ipertensione di ISH/WHO 2004. Verrà utilizzato il "monitor oscillometrico della pressione arteriosa OMRON HEM705CP". I soggetti saranno tenuti a riposo e seduti per 10 minuti prima di misurare la pressione sanguigna sul braccio destro; Il primo provvedimento sarà assolto; la seconda e la terza battuta seguiranno la prima di 2 minuti ciascuna, a braccio rilassato e nudo e con l'angolo del braccio allo stesso livello del cuore. Per l'analisi verrà utilizzata la media delle ultime due misure.

   Il peso e l'altezza saranno misurati su una bilancia standard, con un altimetro collegato per le misurazioni dell'altezza e saranno registrati come uguali ai 100 g e 1 cm più vicini, se necessario, rispettivamente. Le misure saranno eseguite su soggetti senza scarpe, cappotti o indumenti pesanti. Il BMI sarà calcolato in kg/m2.

   La circonferenza della vita (ombelicale) sarà misurata secondo il National Institutes of Health, National Heart, Lung e Blood Institute. Linee guida cliniche sull'identificazione, valutazione e trattamento del sovrappeso e dell'obesità negli adulti; il rapporto di prova. In pratica, con il soggetto in posizione eretta con l'addome rilassato, il braccio lungo i fianchi e i piedi uniti, verrà misurata la circonferenza della vita, con approssimazione di 0,1 cm, a un livello intermedio tra il margine costale inferiore e la cresta iliaca con il nastro tutto intorno al corpo in posizione orizzontale. La circonferenza dell'anca sarà misurata a livello bitrocanterico. Verrà calcolato il rapporto tra circonferenza vita e fianchi (WHR).

   Questionari. Tutte le informazioni saranno raccolte e registrate in questionari convalidati, inclusa l'identificazione personale, la storia medica e le informazioni sui fattori di rischio per CVD, uso di droghe, attività fisica e abitudini alimentari. Verrà inoltre raccolto un diario alimentare di tre giorni.

   Prelievo di sangue e raccolta delle urine Il sangue (≤ 30 ml) verrà raccolto da una vena antecubitale, con stasi minima tra le 8.00 e le 9.00 dopo 12 ore di digiuno, da soggetti che si sono astenuti dal fumare per almeno 6 ore. Le raccolte delle urine delle 24 ore saranno ottenute da ciascun partecipante. Verrà misurato il volume delle urine e 5 aliquote da 5 ml saranno conservate a -80°C.

   Raccolta dei campioni fecali I campioni fecali saranno processati entro 2 ore dalla produzione del campione. In breve, aliquote di 1 g di feci saranno miscelate con RNA-later e conservate a -80°C per il successivo DNA. I campioni fecali saranno anche congelati direttamente a -80°C per l'analisi dei metaboliti.

   Esami di laboratorio (U.O.S. di Dietetica e Nutrizione Clinica, Santa Chiara, APSS Trento) I campioni di sangue verranno centrifugati in base alle esigenze degli esami da eseguire, subito dopo il prelievo. Il plasma o il siero saranno separati, in parte immediatamente testati e la rimanente frazione conservata a -80°C.

   Colesterolo, trigliceridi, colesterolo HDL e glucosio saranno valutati mediante saggi cromogenici. Il colesterolo LDL sarà calcolato secondo la formula di Friedewald.

   I livelli di insulina saranno valutati mediante ELISA. La conta delle cellule del sangue sarà valutata mediante test standard. La C-RP sarà misurata mediante saggi nefelometrici; Gli F2-isoprostani saranno misurati nelle urine come misura dello stress ossidativo, mediante specifico kit EIA (Cayman Chemicals, Ann Arbor, Michigan, USA), previa purificazione mediante cromatografia in fase solida (colonne SepPack).

   Test di laboratorio (Fondazione Edmund Mach [FEM]) LPS plasmatico, IgG specifiche per LPS, CD14, proteina legante LPS e 8-Isorpostano urinario saranno misurati spettrofotometricamente utilizzando un kit ELISA commerciale.

   Profilazione dei metaboliti urinari e plasmatici (FEM). I campioni di urina e sangue (plasma e siero) saranno sottoposti sia a metabolomica mirata (UPLC-MS/MS per composti non volatili e GC-MS/MS per composti volatili) sia a metabolomica non mirata (ULPC-Q-TOF-MS e Nano -FTMS-Q-TOF per composti non volatili e GC-TOF per composti volatili) (Vanza et al., 2001 2012). Per la profilazione mirata dei metaboliti del plasma, verrà utilizzato il kit Biocrates AbsoluteIDQ® p180 basato su MS, generando dati quantitativi accurati su 180 metaboliti umani correlati al rischio di malattia del diabete. Verranno inoltre applicate specifiche analisi mirate per la quantificazione dei profili lipidici sierici, degli acidi biliari, degli SCFA e dei metaboliti microbici dei polifenoli nei biofluidi (incluse le feci) mediante UPLC/QqQ-MS/MS (Vrhovsek et al., 2012).

   Analisi del microbiota fecale (FEM). I cambiamenti della microbiologia fecale saranno valutati utilizzando 454 pyrosequencing metagenomics. In breve, dopo la consegna dei campioni fecali, il DNA metagenomico verrà estratto utilizzando il kit FastDNA SPIN per FECES di MPbio.com. Utilizzando primer batterici universali, la regione V1-V3 comprensiva del gene 16S rRNA presente all'interno del DNA metagenomico fecale sarà amplificata e sottoposta a 454-pyrosequencing. Gli adattatori Multiplex Identifier (MID) verranno utilizzati per il GS FLX Titanium Chemistry - Extended MID Set per ottenere sequenze di circa 600 bp di lunghezza che verranno BLASTATE rispetto ai database filogenetici 16S rRNA disponibili al pubblico utilizzando la pipeline QIIME (http://qiime.org / ) che fornisce buone identificazioni a livello di specie del microbiota intestinale umano. Si mira a un totale di 20.000 sequenze utilizzabili per campione fecale. Dopo il controllo di qualità e l'analisi ecologica microbica, saranno utilizzate statistiche multivariate per correlare i cambiamenti all'interno della composizione e della struttura del microbiota fecale nei soggetti dopo il consumo di alimenti integrati con Aleurone rispetto agli alimenti di controllo (De Filippo et al., 2010). La PCR quantitativa con primer specifici per specie e gruppo sarà impiegata per confermare i cambiamenti nelle popolazioni microbiche identificate dai dati metagenomici di pyrosequencing. Utilizzando la qPCR, verranno contati i bifidobatteri totali, gli enterobatteri totali, i batteri totali ei lattobacilli in tutti i campioni fecali. Questo sarà un minimo e fungerà da controllo di qualità indipendente per il pirosequenziamento. Inoltre, ea seconda di ciò che si vede in termini di cambiamenti a livello di specie dal pyrosequencing, saranno impiegati primer specie-specifici per confermare tutte le differenze statisticamente significative osservate al confronto tra Aleurone e punti temporali di alimentazione di controllo.

   Randomizzazione e accecamento I partecipanti, stratificati per sesso, saranno randomizzati al trattamento con aleurone o al trattamento con placebo in base al numero generato elettronicamente fornito dallo statistico. Gli investigatori clinici e il personale di laboratorio saranno accecati dalla randomizzazione.

   I prodotti dello studio (farina di pane, biscotti, cereali RTE) saranno consegnati da Cargill in cieco ma contrassegnati con E o W per differenziare i trattamenti. I prodotti di prova saranno confezionati in confezioni simili e in porzioni giornaliere. Gli alimenti placebo contengono gli stessi ingredienti degli alimenti attivi tranne che con la cellulosa che sostituisce l'aleurone e sono molto simili a quest'ultimo per dimensioni, forma e colore.

   Trattamento L'integrazione dello studio verrà introdotta nella dieta quotidiana secondo la preferenza del partecipante per un totale di 27 g di Aleurone/giorno o dose equivalente di placebo. Una fetta di pane (35 g) contiene 4,8 g di Aleurone; un biscotto (15 g) contiene 4,5 g di Aleurone; 36 g di cereali RTE contengono 9 g di Aleurone. Gli alimenti placebo contengono gli stessi ingredienti degli alimenti attivi tranne che con la cellulosa che sostituisce il contenuto di fibre di Aleurone e sono molto simili a questi ultimi per dimensioni, forma e colore. I prodotti dello studio (attivi o placebo) verranno forniti in confezioni del prodotto che saranno etichettate nella lingua locale con il numero del codice dello studio, il numero del codice del sito, il nome del produttore, il numero del paziente, il numero della visita dello studio, il numero del lotto, le istruzioni per la conservazione e le date di scadenza. I prodotti saranno dispensati ai partecipanti alla visita T0.

   Durata e programmazione dello studio Dopo una fase di rodaggio di due settimane, i partecipanti verranno randomizzati al gruppo alimentare integrato con Aleurone o al gruppo integrato con placebo per 4 settimane di intervento dietetico.

   La durata complessiva dello studio, inclusi run-in e trattamento, sarà di 6 settimane. Il reclutamento dei soggetti inizierà dopo una valutazione favorevole da parte del comitato etico e di ricerca dell'APSS e i primi soggetti inizieranno il periodo di rodaggio entro due settimane da questo punto di inizio. I soggetti saranno reclutati per un periodo di 6 mesi e lo studio sarà completato entro 8 mesi dal momento del reclutamento del primo soggetto.

   Criteri di interruzione Criteri In conformità con la Dichiarazione di Helsinki, le Linee guida per la buona pratica clinica dell'ICH e i regolamenti della Food and Drug Administration (FDA) degli Stati Uniti, un soggetto ha il diritto di ritirarsi dallo studio in qualsiasi momento per qualsiasi motivo senza pregiudizio per la sua /le sue future cure mediche da parte del medico o presso l'istituto. Lo sperimentatore e lo sponsor hanno anche il diritto di ritirare i soggetti dallo studio (vedi sotto). Inoltre, lo Sponsor può scegliere di terminare lo studio in qualsiasi momento per qualsiasi motivo.

   Qualora un soggetto (o un suo rappresentante legalmente autorizzato) decida di ritirarsi, verrà fatto tutto il possibile per completare e riportare le osservazioni nel modo più completo possibile. Una valutazione finale completa dovrebbe essere effettuata al momento del ritiro del soggetto, il motivo del ritiro dovrebbe essere registrato e dovrebbe essere fatto un tentativo di eseguire una valutazione di follow-up.

   I soggetti possono essere rimossi dallo studio per motivi tra cui i seguenti:

   • significativa violazione del protocollo da parte dell'investigatore
   • significativa inadempienza da parte del soggetto
   • rifiuto del soggetto di continuare il trattamento o le osservazioni
   • tossicità inaccettabile
   • decisione dello sperimentatore secondo cui la cessazione è nel miglior interesse medico del soggetto
   • malattia o complicazione medica non correlata
   • gravidanza
   • prove di abuso di alcol o sostanze I soggetti che interrompono o vengono ritirati dallo studio non saranno sostituiti.

   Procedura per l'interruzione anticipata

   Se un soggetto dovesse interrompere prima del completamento dello studio, si otterranno il motivo e la data dell'interruzione. Verrà inoltre ottenuta la data dell'ultima dose del prodotto in studio. In caso di interruzione anticipata, devono essere eseguite le seguenti procedure:

   • Test clinici (pressione arteriosa sistolica e diastolica, frequenza cardiaca, altezza e peso per il calcolo del BMI e circonferenze vita e fianchi),
   • Prelievo di sangue, raccolta delle feci e delle urine
   • Un questionario di richiamo alimentare di 1 settimana Nel caso in cui il soggetto non possa tornare per la visita di follow-up, il sito dovrebbe tentare di contattare il soggetto telefonicamente per seguire eventuali eventi avversi.

   Se un soggetto ritira il consenso a ricevere il prodotto dello studio, sarà incoraggiato a rimanere nello studio senza ricevere il trattamento per la raccolta dei dati sulla sicurezza.

   Procedure di responsabilità per il prodotto dello studio I prodotti dello studio (attivi o placebo) saranno forniti in confezioni del prodotto che saranno etichettate nella lingua locale con il numero del codice dello studio, il numero del codice del sito, il nome del produttore, il numero del codice del prodotto, il numero della visita dello studio , numero di lotto, istruzioni per la conservazione e date di scadenza. I prodotti saranno dispensati ai partecipanti alla visita T0. Il pane sarà congelato in porzioni di 2 focacce e i biscotti saranno congelati in porzioni di 2 biscotti che saranno scongelati a casa dai partecipanti prima del consumo.

   Manutenzione del codice di randomizzazione I codici di randomizzazione per i partecipanti saranno conservati in una busta sigillata presso FEM. Le informazioni sul codice del prodotto saranno conservate in una busta sigillata presso Cargill.

   Controllo della fonte dei dati Tutti i dati raccolti durante il corso dello studio saranno ottenuti da fonti primarie che sono state registrate in documenti scritti ed elettronici come la cartella clinica del soggetto. I risultati degli esami clinici, dei risultati di laboratorio e dei tracciati ECG saranno registrati nella cartella clinica elettronica del soggetto. Nessun dato verrà inserito direttamente nel modulo di segnalazione del caso (CRF) senza essere trasferito da qualche altra fonte precedente come record scritti o elettronici.

   Selezione e ritiro dei soggetti Criteri di inclusione Almeno una delle seguenti condizioni: Età 18-65 anni; IMC >27 kg/m^2. Criteri di esclusione I soggetti devono essere esclusi dalla partecipazione allo studio se soddisfano uno dei seguenti criteri di esclusione: glicemia a digiuno >300 mg/dl; trigliceridi >500 mg/dl; ipertensione non controllata (BP >160/100 mm Hg in terapia antipertensiva); malattie cardiovascolari (infarto del miocardio, angioplastica coronarica transluminale percutanea o innesto di bypass coronarico, angina pectoris instabile, ictus, malattia arteriosa periferica); ipo o ipertiroidismo; malattie infiammatorie acute; gravi malattie gastrointestinali; insufficienza cardiaca, epatica, renale o polmonare o altra malattia potenzialmente letale con prognosi <5 anni; uso cronico di corticosteroidi sistemici, anticoagulanti, antinfiammatori o ipolipemizzanti e antidiabetici; trattamento nelle 6 settimane precedenti con qualsiasi farmaco noto per influenzare i livelli di lipoproteine ​​o il microbiota fecale (in particolare, antibiotici); intolleranze alimentari; assunzione di alcol >5 drink al giorno o uso di sostanze stupefacenti; uso di integratori vitaminici o minerali antiossidanti; dieta speciale; gravidanza, fumo.

   Terapia farmacologica concomitante Qualsiasi terapia ricevuta dal soggetto entro un mese prima dell'inizio dello studio e/o somministrata durante lo studio sarà considerata terapia concomitante. Tale trattamento deve essere documentato nell'apposita pagina del CRF e nella cartella clinica dei soggetti. Eventuali modifiche alla terapia concomitante durante lo studio devono essere chiaramente registrate e il motivo della modifica deve essere documentato.

   L'uso dei seguenti farmaci non sarà consentito durante lo studio:

   Corticosteroidi, anticoagulanti, antinfiammatori, ipolipemizzanti e antidiabetici; qualsiasi farmaco noto per influenzare i livelli di lipoproteine ​​o il microbiota fecale (in particolare antibiotici), integratori, probiotici, prebiotici o erbe, ad eccezione della gestione degli eventi avversi.

   Compliance del soggetto Per valutare la compliance alla supplementazione, i fenoli urinari saranno misurati in soggetti supplementati con alimenti ricchi di Aleurone al tempo T0 e T1. Inoltre, tutti i pacchetti inutilizzati o vuoti alla fine di ogni settimana accompagnati da un'autoregistrazione delle porzioni utilizzate saranno restituiti agli investigatori.

   Registrazione e segnalazione di eventi avversi Eventi avversi Gli eventi avversi, sia sollecitati che non sollecitati, verranno registrati durante lo studio e per 30 giorni dopo l'ultimo trattamento con i prodotti dello studio.

   Un evento avverso (AE) è qualsiasi cambiamento fisico o clinico o malattia sperimentata dal soggetto in qualsiasi momento durante il corso dello studio, indipendentemente dal fatto che sia considerato correlato all'uso del prodotto in studio. Ciò include l'insorgenza di nuove malattie e l'esacerbazione di condizioni preesistenti. Valori di laboratorio o risultati di test anormali non dovrebbero generalmente essere considerati eventi avversi, a meno che non inducano segni o sintomi clinici o richiedano un intervento terapeutico. Gli eventi avversi saranno seguiti attentamente fino alla loro risoluzione.

   Una descrizione letterale dell'evento, la sua relazione con il prodotto in studio e se l'evento è stato o meno registrato anche come evento avverso grave (SAE) deve essere riportata nella CRF degli eventi avversi per ogni AE registrato nella cartella clinica del soggetto. Eventuali eventi avversi verificatisi dopo la prima procedura dello studio e durante l'intero corso dello studio, attraverso la procedura finale dello studio, devono essere segnalati, indipendentemente dal fatto che siano ritenuti o meno correlati al prodotto dello studio. Ogni voce deve includere le date e gli orari di inizio e fine, la serietà, la gravità, la relazione con il prodotto dello studio e l'azione/risultato. Tutti gli eventi avversi devono essere registrati utilizzando la terminologia definita dal Dizionario medico per le attività di regolamentazione (MedDRA), versione 10.

   Analisi statistiche Iscrizione pianificata e giustificazione La dimensione del campione 34 è stata determinata per rilevare una variazione di 0,4 μmol/L di omocisteina totale (tHcy) nel plasma con una variazione standard di 0,5 μmol/L (presa da Price et al., 2010) utilizzando lo Snedecor e l'equazione di Cochran con α di 0,05 e 1-β di 0,9 (Dell et al., 2002). Prendendo in considerazione il precedente studio con aleurone in individui sani di Price et al., (2010), e la necessità di tenere conto degli abbandoni, proponiamo di reclutare 40 individui per gruppo di trattamento nel presente studio.

   Le caratteristiche basali saranno presentate per ciascun gruppo. Eventuali differenze residue tra cibo attivo e gruppo placebo dopo la randomizzazione saranno prese in considerazione per l'aggiustamento in modelli multivariabili in tutte le ulteriori analisi. Le variabili continue saranno espresse come medie +/- deviazione standard o mediane con intervalli interquartili e come percentuale per le variabili categoriali. I dati post-intervento saranno confrontati mediante ANOVA utilizzando il General Linear Model con baseline come covariata. I dati con una distribuzione distorta verranno trasformati in log prima delle analisi. Verranno utilizzate regressioni lineari semplici e multiple per determinare le relazioni tra variabili e test t indipendenti eseguiti per valutare le differenze nella conformità riportata tra i gruppi. I risultati saranno espressi come media +/- SEM e le differenze saranno considerate significative a P <0.05.

   Per l'analisi degli endpoint primari sarà adottato il principio dell''intention to treat': la valutazione dell'efficacia tiene conto della randomizzazione iniziale indipendentemente dalla compliance al trattamento del soggetto.

   L'analisi principale si baserà sul confronto della differenza dei livelli medi alla fine dello studio in soggetti integrati con alimenti attivi e soggetti a cui sono stati somministrati alimenti placebo.

   L'analisi principale si baserà sul confronto della differenza dei livelli medi alla fine dello studio nei soggetti integrati con alimenti attivi e negli alimenti placebo integrati.

   Le differenze nel tempo tra i bracci di trattamento saranno valutate mediante l'analisi della varianza per misure ripetute (procedura GLM, SAS Institute Inc. SAS/STAT User Guide, Version 9.1.3 per FINESTRE. Cary, Carolina del Nord: SAS Institute Inc. 1989).

   Il livello di significatività sarà alpha=0.05 a due code.

   Dati demografici e caratteristiche basali I dati demografici e le caratteristiche basali inclusi, a titolo esemplificativo ma non esaustivo, età, sesso, razza, etnia, peso corporeo, altezza e indice di massa corporea, pressione arteriosa e abitudini alimentari saranno tabulati utilizzando statistiche descrittive Valutazioni basali Eventuali risultati anomali all'elettrocardiogramma basale valutazione, screening farmacologico o screening antivirus saranno riassunti in modo descrittivo.

   Valori di laboratorio I dati di laboratorio di ciascun campionamento e le variazioni rispetto al basale verranno riepilogati per ciascuna visita in base a media, mediana, deviazione standard, minimo e massimo.

   ACCESSO DIRETTO AI DATI/DOCUMENTI DI FONTE Le autorità di regolamentazione potrebbero voler condurre audit delle attività di ricerca clinica per valutare la conformità con i principi della GCP. Un'autorità di regolamentazione può anche voler condurre un'ispezione (durante lo studio o anche dopo il suo completamento). Se un'ispezione è richiesta da un'autorità di regolamentazione e/o dall'IRB, lo Sperimentatore deve informare immediatamente lo Sponsor o il suo designato. Lo sperimentatore deve accettare di fornire alle autorità di regolamentazione l'accesso alla documentazione relativa allo studio. Lo Sperimentatore consentirà allo Sponsor di assistere nel rispondere a qualsiasi citazione e di ricevere copie di qualsiasi documento fornito a un ispettore/revisore.

   ETICA Institutional Review Board/Comitato Etico Prima di implementare questo studio, il protocollo e il consenso informato saranno rivisti dal Comitato etico per le Sperimentazioni Cliniche c/o APSS di Trento. Una dichiarazione firmata e datata attestante che il protocollo e il consenso informato sono stati approvati dal Comitato etico per le Sperimentazioni Cliniche c/o APSS di Trento deve essere depositata presso la sede prima dell'inizio dello studio. Presso la sede dovrà essere depositato anche l'elenco dei componenti del Comitato etico per le Sperimentazioni Cliniche c/o APSS di Trento. Eventuali modifiche al protocollo, diverse da quelle amministrative, dovranno essere approvate dal Comitato etico per le Sperimentazioni Cliniche c/o APSS di Trento.

   Consenso informato I moduli di consenso informato saranno firmati.

   Divulgazione e riservatezza Firmando il protocollo, l'Investigatore accetta di mantenere tutte le informazioni fornite da Cargill strettamente riservate e di richiedere analoga riservatezza al proprio personale e all'IRB.

   I documenti dello studio forniti da Cargill (protocolli, brochure per i ricercatori e altro materiale) saranno archiviati in modo appropriato per garantire la riservatezza. Le informazioni fornite da Cargill allo Sperimentatore non possono essere divulgate ad altri senza l'autorizzazione scritta diretta di Cargill, salvo nella misura necessaria per ottenere il consenso informato dei soggetti che desiderano partecipare allo studio.

   GESTIONE DEI DATI E CONSERVAZIONE DEI REGISTRI I dati/la documentazione di origine sono definiti come il primo luogo in cui i dati vengono registrati. Tutti i documenti di origine devono essere mantenuti ed essere recuperabili presso il sito. Lo sperimentatore deve conservare i documenti di origine per ciascun soggetto dello studio.

   I dati raccolti sui CRF durante il processo saranno documentati in modo anonimo e i soggetti saranno identificati solo da numeri di soggetto e iniziali. Se, in via eccezionale, è necessario per motivi di sicurezza o normativi identificare il soggetto, Cargill e l'Investigatore sono tenuti a mantenere riservate queste informazioni.

   Tutti i dati inseriti nelle CRF devono essere registrati in modo leggibile con inchiostro nero. Se è necessaria una correzione, dovrebbe essere effettuata cancellando la voce errata con una sola riga e inserendo le informazioni corrette adiacenti ad essa. La correzione deve essere siglata e datata dall'investigatore o da una persona qualificata designata. Qualsiasi informazione richiesta che non è stata ottenuta come specificato nel protocollo dovrebbe avere una spiegazione per l'omissione annotata sul CRF. Una copia della CRF di ciascun soggetto, insieme alle domande correlate, deve essere conservata presso il sito dello studio.

   Tutte le informazioni sulle CRF devono essere riconducibili ai documenti di origine, che sono generalmente conservati nel fascicolo del soggetto. I documenti di origine dovrebbero contenere tutte le informazioni demografiche e mediche inclusi dati di laboratorio, ECG, ecc., e anche una copia del modulo di consenso informato firmato, che dovrebbe indicare il numero dello studio e il titolo della sperimentazione.

   I documenti essenziali, elencati di seguito, devono essere conservati dallo Sperimentatore per un periodo identificato da Cargill all'inizio dello studio. Cargill informerà lo Sperimentatore/istituzione quando i record relativi allo studio non saranno più richiesti. L'investigatore si impegna ad aderire alle procedure di conservazione dei documenti firmando il protocollo. I documenti essenziali includono, a titolo esemplificativo ma non esaustivo, protocolli, materiale pubblicitario, report AE, record di origine del soggetto, corrispondenza IRB, moduli di consenso, curriculum vitae, registri delle visite di monitoraggio, record di laboratorio, intervalli di riferimento, certificazioni, documentazione di controllo qualità e qualsiasi altro documenti pertinenti.

   Qualsiasi modifica o aggiunta a questo protocollo richiede un emendamento scritto al protocollo che deve essere approvato da Cargill prima dell'implementazione. Se vengono apportate modifiche sostanziali al disegno dello studio, l'IRB deve essere informato e, se necessario, approvare la modifica prima dell'inclusione di nuovi soggetti.

   Tutte le procedure di gestione dei dati saranno dettagliate in file separati, specificatamente identificati, che collettivamente saranno indicati come il Piano di gestione dei dati (DMP).