Runsaskuituisen ja antioksidanttipitoisen aleuronin sisältävän ravintolisän vaikutuksen mittaaminen sydän- ja verisuonisairauksien biomarkkereihin ja suoliston mikrobiotaan aikuisilla, joilla on korkea painoindeksi

TUTKIMUKSEN TAVOITTEET Tutkimuksen yleisenä tavoitteena on arvioida, muuttaako vehnäaleuronipitoinen ravintolisä kardiovaskulaarista ja metabolista riskiprofiilia koehenkilöillä, joilla on kohonnut metabolinen riski.

Kokeen ensisijaisena tavoitteena on arvioida, muuttaako vehnäaleuronipitoinen ravintolisä:

1. plasman kokonaishomokysteiini (tHcy)
2. homokysteiinimetaboliaan liittyvät plasmametaboliitit (mukaan lukien betaiini, dimetyyliglysiini, metioniini, koliini, folaatti, riboflaviini, B6-vitamiini);
3. ihmisen biofluidin sekundaariset (mikrobiosta peräisin olevat) polyfenolimetaboliitit;
4. ulosteen sappihappo- ja sterolipitoisuudet.
5. ulosteen mikrobiotaprofiili, joka on luotu käyttämällä Illumina-sekvensointia

Toissijaisena tavoitteena on arvioida, muuttaako vehnäaleuronipitoinen ravintolisä:

1. plasman ja virtsan MS-pohjainen metaboliittiprofilointi;
2. kokonaiskolesteroli-, triglyseridi-, LDL- ja HDL-kolesterolitasot;
3. seerumin glukoosi- ja insuliinitasot;
4. antropometriset indeksit;
5. virtsan isoprostaanin tasot;
6. suolen läpäisevyyden markkerit plasmassa;

7. C-reaktiivisen proteiinin tasot tulehduksen merkkiaineena

   Tutkimussuunnitelman yleiskatsaus ja päätepisteet Tutkimus on tehty lumekontrolloiduksi, satunnaistetuksi, kaksoissokkoutetuksi rinnakkaistutkimukseksi kahdella koeelintarvikkeella, vehnällä, joka sisältää runsaasti aleuroniruokia tai kontrolliruokia (plasebo). Ensisijainen ja toissijainen päätetapahtuma on esitetty yllä olevassa osiossa TUTKIMUKSEN TAVOITTEET.

   Suunnittelun yleiskatsaus Osallistujat tunnistetaan ja rekrytoidaan U.O.S. di Dietetica e Nutrizione Clinica, St Chiara, APSS Trento ja Fondazione Edmund Mach. Osallistujille tiedotetaan tutkimuksen tavoitteista ja menettelyistä, ja heille tehdään esiseulonta mukaanlukien/poissulkemiskriteerien perusteella. Jos he ovat kelvollisia, he allekirjoittavat tietoisen suostumuksen ja osallistuvat tutkimukseen T-1-käynnillä, joka suoritetaan klinikalla klo 8.00-9.00, jossa suoritetaan kliininen ja biokemiallinen terveydentilan arviointi. Jos koehenkilöt ovat edelleen kelvollisia tutkimukseen kaikkien poissulkemiskriteerien mukaan, heidät otetaan mukaan tutkimukseen ja satunnaistetaan saamaan aktiivista lisäravintoa tai lumelääkettä käynnillä T0, 2 viikkoa myöhemmin (sisääntulojakso). Ruokavalioneuvontaa annetaan vierailuilla T-1 ja T0. Osallistujia neuvotaan noudattamaan välimerellisiä ruokailutottumuksia ja harjoittelemaan kohtalaista fyysistä aktiivisuutta.

   Kliininen käynti, kliiniset testit ja verenotto suoritetaan yön yli paaston jälkeen sisäänajovaiheen alussa (käynti T-1). Kliiniset kokeet, verinäytteet, uloste- ja virtsanotto suoritetaan käynnillä T0 (viikko 2) ja T1 (viikko 6). Tutkimukseen osallistujat jakavat neljän päivän ruokapäiväkirjan ja täyttävät ne neljänä peräkkäisenä päivänä ennen vierailua T0 ja T1.

   Jokaiselle osallistujalle suoritetaan:

   • Kliininen ja biokemiallinen arviointi mahdollisen sairauden tilan poissulkemiseksi (T-1, viikko 0): anamnestinen kyselylomake, EKG, hemokromi, kreatiniini, maksaentsyymit).
   • Verenotto (30 ml) biokemiallisia analyysejä varten (T-1 -viikko 0-, T0 - viikko 2- ja T1 - viikko 6-).
   • Ulosteiden ja 24 tunnin virtsan keräys biokemiallisia analyyseja varten (T0 - viikko 2- ja T1 - viikko 6-).
   • Antropometrinen arviointi: systolinen ja diastolinen verenpaine, pulssi, pituus ja paino BMI-laskennassa sekä vyötärön ja lantion ympärysmitat (T-1 -viikko 0-, T0 - viikko 2- ja T1 - viikko 6-).

   Kaikki käynnit tehdään klinikalla klo 8.00-9.00 välisenä aikana paastotilassa. Jokainen käynti kestää noin 1 tunnin. Osallistujia pyydetään olemaan muuttamatta nykyistä ruokavaliotaan, lukuun ottamatta lisäravinteiden lisäämistä vastaavien elintarvikkeiden tilalle. Heitä pyydetään myös välttämään lääkkeitä, lisäravinteita ja integraattoreita sekä ilmoittamaan välittömästi tarkkailijoille sairauden tilasta tai lääkemääräysten muutoksista (uusi tai nykyinen lääkehoito).

   Osallistujien rekrytointi Osallistujat tunnistetaan ja rekrytoidaan U.O.S. di Dietetica e Nutrizione Clinica, St Chiara, APSS Trento ja Fondazione Edmund Mach. Heihin kuuluu sekä instituutioiden työntekijöitä että kansalaisia. Osallistujille tiedotetaan tutkimuksen tavoitteista ja menettelyistä, ja heille tehdään esiseulonta mukaanlukien/poissulkemiskriteerien perusteella. Jos he ovat kelvollisia, he allekirjoittavat tietoisen suostumuksen ja osallistuvat tutkimukseen T-1-käynnillä, jonka aikana terveydentilasta tehdään kliininen ja biokemiallinen arviointi. Jos koehenkilöt ovat edelleen kelvollisia tutkimukseen kaikkien sisällyttämistä/poissulkemiskriteerien mukaan, heidät otetaan mukaan tutkimukseen ja satunnaistetaan saamaan aktiivista lisäravintoa tai lumelääkettä käynnillä T0, kaksi viikkoa myöhemmin (sisääntulojakso).

   Lisäravinteet Kahden viikon sisäänajovaiheen jälkeen osallistujat satunnaistetaan saamaan lisäravintoa joko vehnäpitoisella Aleurone-ruoalla tai lumelääkevalmisteella neljän viikon ajan kaksoissokkomenetelmällä.

   Ruokavalioneuvonta Ruokavalioneuvontaa annetaan vierailuilla T-1 ja T0. Osallistujia neuvotaan noudattamaan välimerellisiä ruokailutottumuksia ja harjoittelemaan kohtalaista fyysistä aktiivisuutta.

   Seuranta Interventio sisältää neljän viikon hoitojaksot. Kliininen käynti, kliiniset testit ja verenotto suoritetaan yön paaston jälkeen vierailulla T-1 - viikolla 0-. Kliiniset kokeet, verinäytteet sekä ulosteen ja virtsan keräys suoritetaan käynnillä T0 ja T1 (T0 päivä ennen lisäravintoa, T1 on viikolla 4 hoidon jälkeen joko aleuroni- tai lumelääkevalmisteella täydennetyt ruoat). Vierailulla T-1 vastataan vuoden palautusvälikyselyyn. Ennen käyntiä T0 ja T1 suoritetaan viikon palautusruokien tiheyskysely.

   Kliininen arviointi Elektrokardiogrammi. Seulonnassa tehdään 12-kytkentäinen EKG. U.O.S. tarkastaa ja tulkitsee elektrokardiografit. di Dietetica e Nutrizione Clinica, St Chiara, APSS Trento.

   Valtimoverenpaine (BP) mitataan ISH/WHO 2004:n verenpainetautia koskevien ohjeiden mukaisesti. Käytetään "OMRON HEM705CP Oscillometric -verenpainemittaria". Koehenkilöt pidetään levossa ja istuen 10 minuuttia ennen verenpaineen mittaamista oikeasta käsivarresta; Ensimmäinen toimenpide puretaan; toinen ja kolmas toimenpide seuraavat ensimmäistä 2 minuuttia kumpikin, rennosti ja alasti käsivarrella ja käsivarren kulma samalla sydämen tasolla. Analyysissä käytetään kahden viimeisen mittarin keskiarvoa.

   Paino ja pituus mitataan vakioasteikolla, johon on liitetty korkeusmittari korkeusmittauksia varten, ja ne kirjataan vastaavasti lähimpään 100 g:aan ja 1 cm:iin tarvittaessa. Toimenpiteet suoritetaan kohteissa, joissa ei ole kenkiä, takkeja tai raskasta pukeutumista. BMI lasketaan kg/m2.

   Vyötärönympärys (napanuora) mitataan National Institutes of Healthin, National Heart-, Lung- ja Blood Instituten mukaan. Kliiniset ohjeet ylipainon ja liikalihavuuden tunnistamisesta, arvioinnista ja hoidosta aikuisilla; todisteiden raportti. Käytännössä tutkittavan seisoessa pystyasennossa vatsa rento, käsivarret sivuilla ja jalat yhdessä, vyötärön ympärysmitta mitataan lähimmältä 0,1 cm:ltä tasolta puolivälissä kylkiluun alemman marginaalin ja suoliluun harjanteen välillä. teippaa ympäri vartaloa vaaka-asennossa. Lonkan ympärysmitta mitataan bitrokanteritasolla. Vyötärönympärysmitan suhde lantion ympärysmittaan (WHR) lasketaan.

   Kyselylomakkeet. Kaikki tiedot kerätään ja kirjataan validoituihin kyselylomakkeisiin, mukaan lukien henkilötiedot, sairaushistoria ja tiedot sydän- ja verisuonitautien riskitekijöistä, huumeiden käytöstä, fyysisestä aktiivisuudesta ja ruokailutottumuksista. Lisäksi kerätään kolmen päivän ruokapäiväkirja.

   Verinäytteenotto ja virtsan otto Veri (≤ 30 ml) otetaan kyynärpäälaskimosta, jossa on minimaalinen staasi klo 8.00-9.00 välillä 12 tunnin paaston jälkeen, henkilöiltä, ​​jotka pidättyivät tupakoinnista vähintään 6 tuntia. Jokaiselta osallistujalta otetaan 24 tunnin virtsakeräys. Virtsan tilavuus mitataan ja 5 5 ml:n alikvoottia säilytetään -80 °C:ssa.

   Ulostenäytteen otto Ulostenäytteet käsitellään 2 tunnin sisällä näytteen valmistamisesta. Lyhyesti sanottuna, 1 g:n alikvootit ulosteista sekoitetaan myöhemmin RNA:n kanssa ja säilytetään -80 °C:ssa myöhempää DNA:ta varten. Ulostenäytteet pakastetaan myös suoraan -80 °C:seen metaboliittianalyysiä varten.

   Laboratoriotutkimukset (U.O.S. di Dietetica e Nutrizione Clinica, St Chiara, APSS Trento) Verinäytteet sentrifugoidaan suoritettavien testien vaatimusten mukaisesti välittömästi verenoton jälkeen. Plasma tai seerumi erotetaan, osittain testataan välittömästi ja jäljelle jäänyt fraktio varastoidaan -80 °C:ssa.

   Kolesteroli, triglyseridit, HDL-kolesteroli ja glukoosi arvioidaan kromogeenisilla määrityksillä. LDL-kolesteroli lasketaan Friedewaldin kaavan mukaan.

   Insuliinitasot arvioidaan ELISA:lla. Verisolujen määrä arvioidaan tavallisilla testeillä. C-RP mitataan nefelometrisilla määrityksillä; F2-isoprostaanit mitataan virtsasta hapetusstressin mittana erityisellä EIA-sarjalla (Cayman Chemicals, Ann Arbor, Michigan, USA) kiinteäfaasikromatografialla (SepPack-kolonnit) puhdistuksen jälkeen.

   Laboratoriokokeet (Fondazione Edmund Mach [FEM]) Plasman LPS, LPS-spesifinen IgG, CD14, LPS:ää sitova proteiini ja virtsan 8-isorpostaani mitataan spektrofotometrisesti käyttämällä kaupallista ELISA-pakkausta.

   Virtsan ja plasman metaboliittien profilointi (FEM). Virtsa- ja verinäytteet (plasma ja seerumi) altistetaan sekä kohdistetulle metabolomiikalle (UPLC-MS/MS haihtumattomille yhdisteille ja GC-MS/MS haihtuville yhdisteille) että kohdennetulle metabolomiikalle (ULPC-Q-TOF-MS ja Nano). -FTMS-Q-TOF haihtumattomille yhdisteille ja GC-TOF haihtuville yhdisteille) (Vanza et al., 2001 2012). Plasman kohdennettuun metaboliitin profilointiin käytetään MS-pohjaista Biocrates AbsoluteIDQ® p180 Kit -sarjaa, joka tuottaa tarkat kvantitatiiviset tiedot 180 ihmisen metaboliitista, jotka liittyvät diabeteksen riskiin. Myös seerumin lipidiprofiilien, sappihappojen, SCFA:n ja mikrobien polyfenolimetaboliittien kvantifiointiin bionesteissä (mukaan lukien ulosteet) sovelletaan erityistä kohdennettua analyysiä UPLC/QqQ-MS/MS:n avulla (Vrhovsek et al., 2012).

   Ulosteen mikrobiotaanalyysi (FEM). Ulosteen mikrobiologiset muutokset arvioidaan käyttämällä 454-pyrosekvensointimetagenomiaa. Lyhyesti sanottuna ulostenäytteiden toimituksen jälkeen metagenominen DNA uutetaan käyttämällä MPbio.comin FECES:in FastDNA SPIN Kit -sarjaa. Yleisiä bakteerialukkeita käyttämällä V1-V3-alue, joka sisältää ulosteen metagenomisessa DNA:ssa läsnä olevan 16S-rRNA-geenin, monistetaan ja sille suoritetaan 454-pyrosekvensointi. Multiplex Identifier (MID) -sovittimia käytetään GS FLX Titanium Chemistry - Extended MID Setissä, jotta saadaan noin 600 bp:n pituisia sekvenssejä, jotka räjäytetään julkisesti saatavilla olevia 16S rRNA:n fylogeneettisiä tietokantoja vastaan ​​QIIME-putkilinjan avulla (http://qiime.org). / ) antaa hyvän lajitason tunnistamisen ihmisen suoliston mikrobiotosta. Kohteena on yhteensä 20 000 käyttökelpoista sekvenssiä ulostenäytettä kohti. Laadunvalvonnan ja mikrobiekologisen analyysin jälkeen käytetään monimuuttujatilastoja korreloimaan muutoksia ulosteen mikrobiotan koostumuksessa ja rakenteessa koehenkilöillä Aleurone-täydennettyjen ruokien nauttimisen jälkeen verrattuna kontrolliruokiin (De Filippo et al., 2010). Kvantitatiivista PCR:ää laji- ja ryhmäspesifisten alukkeiden kanssa käytetään vahvistamaan muutokset mikrobipopulaatioissa, jotka on tunnistettu pyrosekvensoinnin metagenomisista tiedoista. qPCR:n avulla lasketaan bifidobakteerien kokonaismäärä, enterobakteerien kokonaismäärä, bakteerien kokonaismäärä ja laktobasillit kaikista ulostenäytteistä. Tämä on vähimmäismäärä ja toimii itsenäisenä laadunvalvontana pyrosekvensoinnissa. Lisäksi ja riippuen siitä, mitä nähdään lajitason muutoksissa pyrosekvensoinnista, lajikohtaisia ​​alukkeita käytetään vahvistamaan kaikki tilastollisesti merkittävät erot, jotka havaitaan vertailussa Aleurone- ja kontrolliruokinta-aikojen välillä.

   Satunnaistaminen ja sokeuttaminen Sukupuolen mukaan ositetut osallistujat satunnaistetaan aleuronihoitoon tai lumelääkehoitoon tilastotieteilijän toimittaman sähköisesti luodun numeron perusteella. Kliiniset tutkijat ja laboratoriohenkilöstö sokeutuvat satunnaistamisen suhteen.

   Tutkimustuotteet (leipäjauhot, keksit, RTE-murot) toimittaa Cargill sokkomuodossa, mutta ne on merkitty joko E:llä tai W:llä hoidon erottamiseksi. Testituotteet pakataan vastaaviin kääreisiin ja päivittäisiin annoksiin. Plasebo-ruoat sisältävät samoja ainesosia kuin aktiiviset ruoat paitsi, että selluloosa korvaa Aleuronin, ja ne ovat kooltaan, muodoltaan ja väriltään hyvin samanlaisia ​​kuin jälkimmäinen.

   Hoito Tutkimuslisä lisätään päivittäiseen ruokavalioon osallistujan mieltymysten mukaan yhteensä 27 g Aleuronea/vrk tai vastaava annos lumelääkettä. Yksi leipäviipale (35 g) sisältää 4,8 g Aleuronia; yksi keksi (15 g) sisältää 4,5 g Aleuronia; 36 g RTE-viljaa sisältää 9 g Aleuronia. Plasebo-ruoat sisältävät samoja ainesosia kuin aktiiviset ruoat paitsi, että selluloosa korvaa Aleurone-kuitupitoisuuden ja ovat kooltaan, muodoltaan ja väriltään hyvin samanlaisia ​​kuin jälkimmäinen. Tutkimustuotteet (aktiiviset tai lumelääke) toimitetaan tuotepakkauksissa, joihin merkitään paikallisella kielellä tutkimuksen koodinumero, paikan koodinumero, valmistajan nimi, potilasnumero, tutkimuskäynnin numero, eränumero, säilytysohjeet , ja vanhentumispäivät. Tuotteet jaetaan osallistujille vierailulla T0.

   Tutkimuksen kesto ja aikataulu Kahden viikon sisäänajovaiheen jälkeen osallistujat satunnaistetaan Aleurone-ravintoryhmään tai lumelääketä saaneeseen ryhmään neljän viikon ruokavaliointerventioon.

   Tutkimuksen kokonaiskesto, mukaan lukien sisäänajo ja hoito, on 6 viikkoa. Ainerekrytointi aloitetaan APSS:n tutkimus- ja eettisen toimikunnan myönteisen arvion jälkeen ja ensimmäiset koehenkilöt aloittavat sisäänajojakson kahden viikon kuluessa tästä aloituspaikasta. Koehenkilöt rekrytoidaan 6 kuukauden aikana ja tutkimus valmistuu 8 kuukauden kuluessa ensimmäisestä tutkijarekrytointihetkestä.

   Keskeyttämiskriteerit Helsingin julistuksen, ICH:n hyvän kliinisen käytännön ohjeistuksen ja Yhdysvaltain elintarvike- ja lääkeviraston (FDA) säännösten mukaisesti tutkittavalla on oikeus vetäytyä tutkimuksesta milloin tahansa mistä tahansa syystä, tämän kuitenkaan rajoittamatta hänen / hänen tuleva sairaanhoitonsa lääkärin toimesta tai laitoksessa. Tutkijalla ja rahoittajalla on myös oikeus vetää koehenkilöitä pois tutkimuksesta (ks. alla). Lisäksi Sponsori voi päättää keskeyttää tutkimuksen milloin tahansa mistä tahansa syystä.

   Jos tutkittava (tai tutkittavan laillisesti valtuutettu edustaja) päättää vetäytyä, havainnot pyritään täydentämään ja raportoimaan mahdollisimman perusteellisesti. Täydellinen loppuarviointi tulisi tehdä koehenkilön vetäytymisen yhteydessä, peruutuksen syy tulee kirjata ja seurantaarviointi on yritettävä.

   Koehenkilöt voidaan poistaa tutkimuksesta seuraavista syistä:

   • Tutkijan tekemä merkittävä protokollarikkomus
   • merkittävää noudattamatta jättämistä kohteen puolelta
   • potilaan kieltäytyminen jatkamasta hoitoa tai tarkkailua
   • myrkyllisyys, jota ei voida hyväksyä
   • tutkijan päätös, että lopettaminen on tutkittavan lääketieteellisen edun mukaista
   • riippumaton lääketieteellinen sairaus tai komplikaatio
   • raskaus
   • todisteita alkoholin tai päihteiden väärinkäytöstä Koehenkilöitä, jotka keskeyttävät tutkimuksen tai vedetään pois tutkimuksesta, ei korvata.

   Menettely ennenaikaista lopettamista varten

   Jos tutkittava keskeyttää tutkimuksen ennen tutkimuksen päättymistä, selvitetään keskeyttämisen syy ja päivämäärä. Myös tutkimustuotteen viimeisen annoksen päivämäärä saadaan. Jos hoito lopetetaan ennenaikaisesti, on suoritettava seuraavat toimenpiteet:

   • Kliiniset testit (systolinen ja diastolinen verenpaine, pulssi, pituus ja paino BMI:n laskemista varten sekä vyötärön ja lantion ympärysmitat),
   • Verenotto, uloste- ja virtsanotto
   • Viikon ruokamuistokysely Jos tutkittava ei voi palata seurantakäynnille, sivuston tulee yrittää ottaa yhteyttä tutkittavaan puhelimitse mahdollisten haittatapahtumien seuraamiseksi.

   Jos koehenkilö peruuttaa suostumuksensa tutkimustuotteen saamiseen, häntä rohkaistaan ​​pysymään tutkimuksessa ilman hoitoa turvallisuustietojen keräämiseksi.

   Tutkimustuotteen vastuullisuusmenettelyt Tutkimustuotteet (aktiiviset tai lumelääke) toimitetaan tuotepakkauksissa, joihin merkitään paikallisella kielellä tutkimuksen koodinumero, paikan koodinumero, valmistajan nimi, tuotteen koodinumero, opintokäynnin numero , eränumero, säilytysohjeet ja viimeinen käyttöpäivämäärä. Tuotteet jaetaan osallistujille vierailulla T0. Leipä pakastetaan 2 sämpylän osissa ja keksit 2 keksin annoksissa, jotka osallistujat sulattavat kotona ennen syömistä.

   Satunnaistuskoodin ylläpito Osallistujien satunnaiskoodeja säilytetään suljetussa kirjekuoressa FEM:ssä. Tuotekooditiedot säilytetään suljetussa kirjekuoressa Cargillissa.

   Lähdetietojen hallinta Kaikki tutkimuksen aikana kerätyt tiedot hankitaan ensisijaisista lähteistä, jotka on tallennettu kirjallisiin ja sähköisiin asiakirjoihin, kuten tutkittavan lääketieteelliseen tiedostoon. Kliinisten tutkimusten tulokset, laboratoriolöydökset ja EKG-jäljitykset tallennetaan tutkittavan sähköiseen lääketieteelliseen tiedostoon. Tietoja ei syötetä suoraan tapausraporttilomakkeelle (CRF) ilman, että niitä siirretään jostain muusta aikaisemmasta lähteestä, kuten kirjallisista tai sähköisistä tietueista.

   Tutkittavien valinta- ja poistumiskriteerit Vähintään yksi seuraavista ehdoista: Ikä 18-65 vuotta; BMI > 27 kg/m^2. Poissulkemiskriteerit Koehenkilöt suljetaan pois tutkimukseen osallistumisesta, jos he täyttävät jonkin seuraavista poissulkemiskriteereistä: paastoverenglukoosi >300 mg/dl; triglyseridit > 500 mg/dl; hallitsematon hypertensio (BP > 160/100 mm Hg verenpainetta alentavan hoidon aikana); sydän- ja verisuonisairaus (sydäninfarkti, perkutaaninen transluminaalinen sepelvaltimon angioplastia tai sepelvaltimon ohitusleikkaus, epästabiili angina pectoris, stoke, ääreisvaltimotauti); hypo- tai hypertyreoosi; akuutit tulehdussairaudet; vakavat maha-suolikanavan sairaudet; sydämen, maksan, munuaisten tai keuhkojen vajaatoiminta tai muu henkeä uhkaava sairaus, jonka ennuste on alle 5 vuotta; systeemisten kortikosteroidien, antikoagulanttien, tulehduskipulääkkeiden tai lipidejä alentavien ja diabeteslääkkeiden krooninen käyttö; hoito edellisen 6 viikon aikana millä tahansa lääkkeellä, jonka tiedetään vaikuttavan lipoproteiinitasoihin tai ulosteen mikrobiotaan (erityisesti antibiootit); ruoka-intoleranssit; alkoholin nauttiminen > 5 juomaa päivässä tai huumausaineiden käyttö; antioksidanttisten vitamiini- tai kivennäislisäaineiden käyttö; erityinen ruokavalio; raskaus, tupakointi.

   Samanaikainen lääkehoito Mikä tahansa hoito, jonka kohde on saanut kuukauden sisällä ennen tutkimuksen aloittamista ja/tai jota annetaan tutkimuksen aikana, katsotaan samanaikaiseksi hoidoksi. Tällainen hoito on dokumentoitava asianomaiselle CRF-sivulle ja koehenkilöiden lääketieteellisiin asiakirjoihin. Kaikki samanaikaiseen hoitoon tutkimuksen aikana tehdyt muutokset on kirjattava selkeästi ja muutoksen syy tulee dokumentoida.

   Seuraavien lääkkeiden käyttö ei ole sallittua tutkimuksen aikana:

   kortikosteroidit, antikoagulantit, tulehduskipulääkkeet, lipidejä alentavat ja diabeteslääkkeet; kaikki lääkkeet, joiden tiedetään vaikuttavan lipoproteiinitasoihin tai ulosteen mikrobiotaan (erityisesti antibiootit), lisäravinteet, probiootit, prebiootit tai yrtit, paitsi haittatapahtumien hallintaan.

   Kohteen noudattaminen Lisäravinteen noudattamisen arvioimiseksi virtsan fenolit mitataan henkilöiltä, ​​joita on täydennetty aleuronipitoisella ruoalla ajankohtina T0 ja T1. Lisäksi kaikki käyttämättömät tai tyhjät paketit jokaisen viikon lopussa sekä omat tiedot käytetyistä annoksista palautetaan tutkijoille.

   Haittatapahtumien kirjaaminen ja raportoiminen Haittatapahtumat Haittatapahtumat, sekä pyydetyt että ei-toivotut, kirjataan koko tutkimuksen ajan ja 30 päivän ajan viimeisen tutkimustuotteilla suoritetun hoidon jälkeen.

   Haittatapahtuma (AE) on mikä tahansa fyysinen tai kliininen muutos tai sairaus, jonka koehenkilö kokee milloin tahansa tutkimuksen aikana, riippumatta siitä, katsotaanko se liittyvän tutkimustuotteen käyttöön vai ei. Tämä sisältää uuden sairauden puhkeamisen ja olemassa olevien sairauksien pahenemisen. Poikkeavia laboratorioarvoja tai testituloksia ei yleensä pitäisi pitää haittavaikutuksina, elleivät ne aiheuta kliinisiä merkkejä tai oireita tai vaadi terapeuttista toimenpiteitä. Haitallisia tapahtumia seurataan huolellisesti, kunnes ne on ratkaistu.

   Haittatapahtuman CRF:ssä on ilmoitettava sanatarkasti tapahtumasta, sen suhteesta tutkimustuotteeseen ja siitä, kirjattiinko tapahtuma myös vakavaksi haittatapahtumaksi (SAE) vai ei. Kaikki AE-tapahtumat, jotka ilmenevät ensimmäisen tutkimusmenettelyn jälkeen ja koko tutkimuksen aikana viimeisen tutkimusmenettelyn aikana, on raportoitava riippumatta siitä, katsotaanko niiden liittyvän tutkimustuotteeseen vai ei. Jokaisen merkinnän on sisällettävä alkamis- ja päättymispäivät ja -ajat, vakavuus, vakavuus, suhde tutkimustuotteeseen ja toiminta/tulos. Kaikki haittavaikutukset tulee kirjata käyttämällä terminologiaa, joka on määritelty Medical Dictionary for Regulatory Activities (MedDRA) -versiossa 10.

   Tilastolliset analyysit Suunniteltu rekisteröinti ja perustelu Näytteen koko 34 määritettiin havaitsemaan 0,4 μmol/L muutos kokonaishomokysteiinissä (tHcy) plasmassa standardin vaihtelulla 0,5 μmol/L (otettu Price et al., 2010) käyttämällä Snedecoria ja Cochranin yhtälö, jossa α on 0,05 ja 1-β 0,9 (Dell et ai., 2002). Ottaen huomioon Price et al.:n (2010) aiemman tutkimuksen aleuronilla terveillä yksilöillä ja tarve ottaa huomioon keskeyttäminen, ehdotamme, että tähän tutkimukseen rekrytoidaan 40 henkilöä hoitoryhmää kohden.

   Perusominaisuudet esitetään jokaiselle ryhmälle. Lopulta jäännöserot aktiivisen ruoan ja lumeryhmän välillä satunnaistamisen jälkeen otetaan huomioon monimuuttujamalleissa kaikissa myöhemmissä analyyseissä. Jatkuvat muuttujat ilmaistaan ​​keskiarvoina +/- keskihajonna tai mediaaneja kvartiilivälillä ja prosentteina kategorisille muuttujille. Intervention jälkeisiä tietoja verrataan ANOVA:lla käyttäen yleistä lineaarista mallia ja perusviivaa kovariaattina. Tiedot, joiden jakauma on vino, lokimuunnetaan ennen analyyseja. Yksinkertaista ja moninkertaista lineaarista regressiota käytetään muuttujien välisten suhteiden määrittämiseen ja riippumattomia t-testejä, jotka suoritetaan ryhmien välisten raportoitujen vaatimustenmukaisuuden erojen arvioimiseksi. Tulokset ilmaistaan ​​keskiarvona +/- SEM, ja eroja pidetään merkittävinä, kun P < 0,05.

   Ensisijaisten päätetapahtumien analysoinnissa otetaan käyttöön "aikomushoito" -periaate: tehon arvioinnissa otetaan huomioon alkuperäinen satunnaistaminen riippumatta potilaan hoitomyöntyvyydestä.

   Pääanalyysi perustuu keskiarvojen erojen vertailuun tutkimuksen lopussa aktiivisilla ravintoaineilla ja lumelääkettä saaneilla koehenkilöillä.

   Pääanalyysi perustuu tutkimuksen lopun keskiarvojen erojen vertailuun aktiivisilla ravintoaineilla täydennetyillä ja lumelääkeravinnoilla täydennetyillä.

   Hoitohaarojen väliset ajan erot arvioidaan toistuvien mittausten varianssianalyysillä (GLM-menettely, SAS Institute Inc. SAS/STAT-käyttöopas, versio 9.1.3 Windowsille. Cary, NC: SAS Institute Inc. 1989).

   Merkitystaso on alfa=0,05 kaksipyrstöinen.

   Väestötiedot ja lähtötilanteen ominaisuudet Väestötiedot ja lähtötilanteen ominaisuudet, mukaan lukien, mutta niihin rajoittumatta, ikä, sukupuoli, rotu, etnisyys, ruumiinpaino, pituus ja painoindeksi, verenpaine ja ruokailutottumukset taulukoidaan käyttämällä kuvaavia tilastoja Perustason arvioinnit Kaikki epänormaalit löydökset perussähkökardiogrammissa arvioinnista, lääkeseulonnasta tai virusseulonnasta esitetään kuvaileva yhteenveto.

   Laboratorioarvot Laboratoriotiedot kustakin näytteenotosta ja muutoksista lähtötilanteeseen lasketaan yhteen kunkin käynnin keskiarvon, mediaanin, keskihajonnan, minimin ja maksimin mukaan.

   SUORA PÄÄSY LÄHDETIETOIHIN/ASIAKIRJOIHIN Sääntelyviranomaiset saattavat haluta suorittaa kliinisen tutkimustoiminnan tarkastuksia GCP-periaatteiden noudattamisen arvioimiseksi. Sääntelyviranomainen voi myös haluta suorittaa tarkastuksen (tutkimuksen aikana tai jopa sen valmistumisen jälkeen). Jos valvontaviranomainen ja/tai IRB pyytää tarkastusta, tutkijan on ilmoitettava asiasta viipymättä sponsorille tai sen nimeämälle. Tutkijan on suostuttava antamaan valvontaviranomaisille pääsy tutkimukseen liittyviin asiakirjoihin. Tutkija antaa sponsorille mahdollisuuden auttaa vastaamaan kaikkiin lainauksiin sekä saada kopiot kaikista tarkastajalle/tarkastajalle toimitetuista asiakirjoista.

   ETIIKKA Institutionaalinen arviointilautakunta/eettinen komitea Ennen tämän tutkimuksen toteuttamista Comitato etico per le Sperimentazioni Cliniche c/o APSS di Trento tarkistaa pöytäkirjan ja tietoisen suostumuksen. Allekirjoitettu ja päivätty lausunto siitä, että Comitato etico per le Sperimentazioni Cliniche c/o APSS di Trento on hyväksynyt tutkimussuunnitelman ja tietoisen suostumuksen, on oltava paikalla ennen tutkimuksen aloittamista. Sivustolla on myös oltava luettelo Comitato etico per le Sperimentazioni Cliniche c/o APSS di Trenton jäsenistä. Kaikki pöytäkirjaan tehdyt muut kuin hallinnolliset muutokset on hyväksyttävä Comitato etico per le Sperimentazioni Cliniche c/o APSS di Trenton toimesta.

   Tietoinen suostumus Ilmoitettu suostumuslomake allekirjoitetaan.

   Tietojen paljastaminen ja luottamuksellisuus Allekirjoittamalla pöytäkirjan tutkija sitoutuu pitämään kaikki Cargillin toimittamat tiedot tiukasti luottamuksellisina ja pyytämään vastaavaa luottamuksellisuutta henkilöstöltään ja IRB:ltä.

   Cargillin toimittamat tutkimusasiakirjat (pöytäkirjat, tutkijan esitteet ja muu materiaali) säilytetään asianmukaisesti luottamuksellisuuden varmistamiseksi. Cargillin tutkijalle toimittamia tietoja ei saa paljastaa muille ilman Cargillin suoraa kirjallista lupaa paitsi siinä määrin kuin on tarpeen tietoisen suostumuksen saamiseksi koehenkilöiltä, ​​jotka haluavat osallistua tutkimukseen.

   TIETOJEN KÄSITTELY JA TALLENNUS Lähdetiedot/dokumentaatio määritellään ensimmäiseksi tallennuspaikaksi. Kaikki lähdeasiakirjat on säilytettävä ja ne on voitava hakea sivustolta. Tutkijan on säilytettävä lähdeasiakirjat jokaisesta tutkimuksen kohteena olevasta aiheesta.

   CRF:istä kokeen aikana kerätyt tiedot dokumentoidaan anonyymisti, ja koehenkilöt tunnistetaan vain koehenkilönumeroiden ja nimikirjaimien perusteella. Jos poikkeuksena on turvallisuus- tai lainsäädännöllisistä syistä tarpeen tunnistaa kohde, Cargill ja tutkija ovat velvollisia pitämään nämä tiedot luottamuksellisina.

   Kaikki CRF:iin syötetyt tiedot on tallennettava selkeästi mustalla musteella. Jos korjaus on tarpeen, se tulee tehdä yliviivaamalla väärä merkintä yhdellä rivillä ja kirjoittamalla oikeat tiedot sen viereen. Tutkijan tai nimetyn pätevän henkilön on nimettävä ja päivättävä korjaus. Kaikille pyydettyille tiedoille, joita ei ole saatu pöytäkirjassa määritellyllä tavalla, tulee olla selitys CRF:ään merkittynä puutteelle. Kopio kunkin kohteen CRF:stä ja siihen liittyvät kyselyt on säilytettävä tutkimuspaikalla.

   Kaikkien CRF-tietojen on oltava jäljitettävissä lähdeasiakirjoihin, jotka yleensä säilytetään tutkittavan tiedostossa. Lähdeasiakirjoissa tulee olla kaikki demografiset ja lääketieteelliset tiedot, mukaan lukien laboratoriotiedot, EKG:t jne., sekä kopio allekirjoitetusta tietoon perustuvasta suostumuslomakkeesta, jossa on mainittava tutkimuksen numero ja tutkimuksen nimi.

   Tutkijan on säilytettävä alla luetellut olennaiset asiakirjat Cargillin tutkimuksen alussa määrittämän ajan. Cargill ilmoittaa tutkijalle/laitokselle, kun tutkimukseen liittyviä tietueita ei enää tarvita. Tutkija sitoutuu noudattamaan asiakirjojen säilytysmenettelyjä allekirjoittamalla pöytäkirjan. Tärkeitä asiakirjoja ovat muun muassa pöytäkirjat, mainosmateriaalit, AE-raportit, aiheen lähdetiedot, IRB-kirjeenvaihto, suostumuslomakkeet, ansioluettelot, seurantakäyntilokit, laboratoriotiedot, viitealueet, sertifioinnit, laadunvalvontadokumentaatiot ja kaikki muut asiaankuuluvat asiakirjat.

   Kaikki muutokset tai lisäykset tähän protokollaan edellyttävät kirjallista protokollamuutosta, joka Cargillin on hyväksyttävä ennen käyttöönottoa. Jos tutkimuksen suunnitteluun tehdään olennaisia ​​muutoksia, siitä on ilmoitettava IRB:lle ja tarvittaessa hyväksyttävä muutos ennen uusien tutkimusaiheiden sisällyttämistä.

   Kaikki tiedonhallintamenettelyt on kuvattu erillisissä, erikseen tunnistetuissa tiedostoissa, joihin yhdessä viitataan nimellä Data Management Plan (DMP).