Analýza klinickou hmotnostní spektrometrií krevních skvrn (BUVAMASS)

Analýzy krve skvrnité a vysušené na matrici (DBS) se používají od 60. let 20. století v klinické chemii novorozeneckého screeningu. Od té doby bylo pomocí DBS úspěšně měřeno mnoho klinických analytů, včetně nukleových kyselin, malých molekul a lipidů.

Odběr DBS je ve skutečnosti méně invazivní než klasická žilní punkce, pacient si jej může provést doma a odeslat běžnou poštou bez zvláštního rizika kontaminace. Rutinní použití DBS pro detekci přenosných nemocí, stejně jako pro sledování chronických onemocnění, jako je diabetes, představuje pro společnost bezpečnější a méně nákladný vývoj klinické biologie.

Rutinní použití DBS je však zatím omezené. Hlavní omezení použití DBS představují malé objemy krve spojené s odběrem vzorků DBS (5-10 μl) a omezená možnost detekce peptidů a proteinů.

V tomto programu se budeme tomuto problému věnovat přizpůsobením se kvantifikaci proteinů/peptidů DBS hmotnostní spektrometrií (MS). To závisí na detekci charakteristických proteotypových peptidů (peptidů, jejichž sekvence je specifická pro jedinečný protein). Specifičnost takových testů využívajících hmotnostní spektrometr s trojitým kvadrupólem je založena na schopnosti detekovat peptidy třemi molekulárními charakteristikami: retenčním časem, hmotností prekurzorových iontů (m/z) a hmotností fragmentových iontů (m/z). Kombinace hmotnosti prekurzorového iontu a hmotnosti fragmentu iontu z, vysoce specifická, se nazývá přechod. Tento přístup je pojmenován, když je detekováno několik peptidů v jediném běhu "monitorování více reakcí" nebo MRM. Pomocí tohoto přístupu je možná přímá analýza trypsinem stráveného ve vzorcích krve bez další frakcionace vzorku.

V sérii předběžných experimentů jsme mohli detekovat na jediném DBS puch o průměru 6 mm 35 plazmatických proteinů. Klinicky relevantních je několik proteinů, jako je apolipoprotein A, B, C, ceruloplasmin, haptoglobin, plazminogen, transtyretin (prealbumin) nebo sérový albumin. Rozšíříme rozsah krevních bílkovin detekovaných RS. Důraz bude kladen na vybrané biomarkery pro vytvoření klinicky relevantních panelů, které lze použít pro monitorování pacientů, monitorování výživy a pro sledování křehkosti u starších lidí.

Budou vyvinuty inovativní pracovní postupy pro rychlejší, účinnější a levnější detekci. Budeme také hodnotit nový typ DBS karty (Noviplex™), který odebírá plazmu místo plné krve a očekává se, že dosáhne lepší klinické shody výsledků mezi DBS a klasickým odběrem vzorků. Detekce příslušných klinických analytů bude validována na dostupných vzorcích pacientů v souladu s klinickou normou ISO15189 a požadavkem na označení CE IVD. To umožní komerční vývoj (sestavy, protokoly...) realizovaný s průmyslovým partnerem Spot-to-lab. Tento start-up již uvedl na trh analýzy DBS vyplývající z předchozího kolaborativního výzkumu. Schopnost měřit peptidy/proteiny z DBS paralelně s dalšími klinickými analyty vyvinutými také společností Spot-To-Lab (vitamín D, HbA1c…) představuje průlom, který poskytne hlavní perspektivu použití DBS v klinické chemii pro detekci onemocnění a sledování.