Slinné zánětlivé markery u tenzní bolesti hlavy a migrény (SalHead)

Šedesát subjektů obou pohlaví, ve věku od 18 do 60 let, s primárními bolestmi hlavy TTH a migrénou, podle Mezinárodní klasifikace bolestí hlavy, 3. vydání (beta verze), bylo zařazeno z ambulantní kliniky bolesti hlavy Fakultní nemocnice v Aténách mezi leden až březen 2016. 30 zdravých kontrolních subjektů ve stejném věku bylo vybráno převážně z nemocničního personálu a příbuzných pacientů.

Zpočátku účastníci dokončili Hamilton Anxiety (HAM-A), Scale Beck Depression Inventory (BDI). Všichni pacienti si museli během čtyřtýdenního záběhového období vést deník bolesti hlavy. Všichni trpící bolestí hlavy byli instruováni, aby odebrali základní vzorky bez bolesti slin v době screeningu studie, když byli bez bolesti hlavy po dobu alespoň 48 hodin (časový bod A). Všichni trpící bolestí hlavy odebrali další vzorky během středně silné/závažné bolesti hlavy (časový bod B) a v samostatně definované fázi řešení 24 hodin jejich záchvatu bolesti hlavy (časový bod C). Zdravé kontrolní subjekty byly instruovány, aby odebíraly vzorky v době screeningu studie (časový bod D). Každý týden, až do čtyř týdnů a jednoho měsíce po ukončení studie, byli účastníci kontaktováni, aby bylo zajištěno dodržování a vhodné použití techniky. O rok později budou také získány longitudinální údaje.

Odběr vzorků slin Všichni účastníci dostali podrobné pokyny pro správný odběr vzorků slin. Tyto pokyny zahrnují vyvarování se konzumace velkého jídla a čištění zubů 60 minut před odběrem vzorku. Před odběrem vzorků slin musí být také vyloučena konzumace potravin s vysokým obsahem cukru a kofeinu a také potravin s vysokou kyselostí. Vypláchněte ústa vodou, aby se odstranily zbytky jídla a odběr vzorků slin alespoň 10 minut po doporučeném vyplachování úst. Nestimulované celé sliny, které se shromáždily na dně úst, byly odebrány pacientům a zdravým dobrovolníkům do vysoce kvalitních polypropylenových lahviček technikou pasivního slintání. Nakonec byly všechny vzorky uloženy v plastové nádobě při 2-4 °C až do analýzy. Sliny byly účastníkům odebrány v 8:00 ráno, aby se vyloučil jakýkoli matoucí faktor způsobený cirkadiánním rytmem.

Analýza vzorků Ranní vzorky byly uchovávány v chladničce při 4 °C a na konci dne byly přeneseny do laboratoře, kde byly odstředěny při 3000 otáčkách za minutu při 4 °C a supernatant byl alikvotován do polypropylenových kryogenních lahviček. Lahvičky byly zmraženy v -80 °C až do analýzy. Hladiny transferinu ve slinách byly měřeny kompetitivními imunoanalytickými soupravami a hladiny interleukinu-6, interleukinu-lp a CRP byly měřeny sendvičovými soupravami ELISA. Hladiny transferinu byly použity jako screeningový nástroj na přítomnost krve ve vzorcích slin a vzorky s hodnotami transferinu vyššími než 1 mg/dl byly považovány za kandidáty pro vyloučení v jiných testech slin. Test kortizolu má citlivost < 0,007 μg/ml a variační koeficient mezi testy < 11 %, přičemž tyto charakteristiky jsou 0,07 pg/ml a 8 pro interleukin-6, 0,37 pg/ml a 7 pro interleukin-1β, 10 pg/ml a 11,2 pro CRP, stejně jako 0,08 mg/dl a 7,2 pro transferin.