Marcadores inflamatorios salivales en la cefalea tensional y la migraña (SalHead)

Sesenta sujetos de ambos sexos, con edades comprendidas entre los 18 y los 60 años, con cefaleas primarias TTH y migraña, según la Clasificación Internacional de Trastornos por Cefalea, 3ª edición (versión beta), se inscribieron en la clínica de cefalea ambulatoria del Hospital Universitario de Atenas entre Enero a marzo de 2016. Se reclutaron 30 sujetos de control sanos de la misma edad, principalmente entre el personal del hospital y los familiares de los pacientes.

Inicialmente, los participantes completaron el Inventario de Ansiedad de Hamilton (HAM-A), Scale Beck Depression Inventory (BDI). Todos los pacientes tuvieron que llevar un diario de dolor de cabeza durante el período de preinclusión de cuatro semanas. A todos los pacientes con dolor de cabeza se les indicó que recolectaran muestras basales salivales sin dolor de cabeza en el momento de la selección del estudio cuando no hubieran tenido dolor de cabeza durante al menos 48 horas (punto de tiempo A). Todos los pacientes con dolor de cabeza recolectaron muestras adicionales durante el dolor de cabeza moderado/severo (punto de tiempo B) y en la fase de resolución autodefinida 24 horas después de su ataque de dolor de cabeza (punto de tiempo C). Los sujetos de control sanos recibieron instrucciones de recolectar muestras en el momento de la selección del estudio (punto de tiempo D). Cada semana, hasta cuatro semanas y un mes después de la finalización del estudio, los participantes fueron contactados, con el fin de asegurar el cumplimiento y el uso adecuado de la técnica. Un año más tarde también se obtendrían datos longitudinales.

Recolección de muestras de saliva Se dieron instrucciones detalladas para la correcta recolección de muestras de saliva a todos los participantes. Dichas instrucciones incluyen evitar comer una comida importante y cepillarse los dientes 60 minutos antes de la recolección de la muestra. También se debe excluir el consumo de alimentos con alto contenido de azúcar y cafeína, así como los alimentos de alta acidez antes de la recolección de muestras de saliva. Se recomienda enjuagar la boca con agua para eliminar cualquier residuo de comida y tomar muestras de saliva al menos 10 minutos después del enjuague bucal. La saliva entera no estimulada que se acumulaba en el piso de la boca se recolectó de pacientes y voluntarios sanos en viales de polipropileno de alta calidad mediante la técnica de baba pasiva. Finalmente, todas las muestras se almacenaron en un recipiente de plástico a 2-4 °C hasta su análisis. Se recolectó saliva de los participantes, a las 8:00 a.m. de la mañana para descartar cualquier factor de confusión causado por el ritmo circadiano.

Análisis de muestras Las muestras de la mañana se mantuvieron en el refrigerador a 4°C y al final del día se llevaron al laboratorio donde se centrifugaron a 3000 rpm a 4°C y el sobrenadante se alicuotó en viales criogénicos de polipropileno. Los viales se congelaron a -80°C hasta su análisis. Los niveles de transferrina en saliva se midieron mediante kits de inmunoensayo competitivos y los niveles de interleucina-6, interleucina-1β y CRP se midieron mediante kits de ELISA tipo sándwich. Los niveles de transferrina se utilizaron como herramienta de detección de la presencia de sangre en las muestras de saliva y las muestras con valores de transferrina superiores a 1 mg/dl se consideraron candidatas para la exclusión en otros ensayos salivales. El ensayo de cortisol tiene una sensibilidad de < 0,007 μg/ml y un coeficiente de variación entre ensayos de < 11% mientras que estas características son de 0,07 pg/ml y 8 para la interleucina-6, 0,37 pg/ml y 7 para la interleucina-1β, 10 pg/ml y 11,2 para PCR así como 0,08 mg/dl y 7,2 para transferrina respectivamente.