Marcatori infiammatori salivari nella cefalea ed emicrania di tipo tensivo (SalHead)

Sessanta soggetti di entrambi i sessi, di età compresa tra i 18 e i 60 anni, con cefalee primarie TTH ed emicrania, secondo la classificazione internazionale dei disturbi della cefalea, 3a edizione (versione beta), sono stati arruolati dalla clinica ambulatoriale per la cefalea dell'ospedale universitario di Atene tra gennaio-marzo 2016. Sono stati reclutati 30 soggetti di controllo sani di pari età, principalmente da personale ospedaliero e parenti dei pazienti.

Inizialmente, i partecipanti hanno completato l'Hamilton Anxiety (HAM-A), Scale Beck Depression Inventory (BDI). Tutti i pazienti hanno dovuto tenere un diario del mal di testa durante il periodo di rodaggio di quattro settimane. Tutti coloro che soffrivano di mal di testa sono stati istruiti a raccogliere campioni salivari senza mal di testa al momento dello screening dello studio quando erano stati liberi da mal di testa per almeno 48 ore (punto temporale A). Tutti i mal di testa hanno raccolto campioni aggiuntivi durante il mal di testa moderato/severo (punto temporale B) e nella fase di risoluzione autodefinita 24 ore dal loro attacco di cefalea (punto temporale C). I soggetti sani di controllo sono stati istruiti a raccogliere campioni al momento dello screening dello studio (punto temporale D). Ogni settimana, fino a quattro settimane e un mese dopo la fine dello studio, i partecipanti sono stati contattati, al fine di garantire la conformità e l'uso appropriato della tecnica. Un anno dopo sarebbero stati ottenuti anche i dati longitudinali.

Raccolta di campioni di saliva Istruzioni dettagliate per la corretta raccolta di campioni di saliva sono state fornite a tutti i partecipanti. Tali istruzioni includono evitare di mangiare un pasto importante e lavarsi i denti 60 minuti prima della raccolta del campione. Anche il consumo di cibi ad alto contenuto di zucchero e caffeina così come cibi ad alta acidità devono essere esclusi prima della raccolta del campione di saliva. Si consigliava di sciacquare la bocca con acqua per rimuovere eventuali residui di cibo e raccogliere campioni di saliva almeno 10 minuti dopo il risciacquo della bocca. La saliva intera non stimolata che si accumulava sul pavimento della bocca è stata raccolta da pazienti e volontari sani in fiale di polipropilene di alta qualità mediante la tecnica della bava passiva. Infine, tutti i campioni sono stati conservati in un contenitore di plastica a 2-4°C fino al momento dell'analisi. La saliva è stata raccolta dai partecipanti alle 8:00 del mattino per escludere qualsiasi fattore confondente causato dal ritmo circadiano.

Analisi dei campioni I campioni mattutini sono stati conservati in frigorifero a 4°C e alla fine della giornata sono stati portati in laboratorio dove sono stati centrifugati a 3000 rpm a 4°C e il supernatante è stato aliquotato in fiale criogeniche in polipropilene. Le fiale sono state congelate a -80°C fino all'analisi. I livelli di transferrina salivare sono stati misurati mediante kit immunologici competitivi e i livelli di interleuchina-6, interleuchina-1β e CRP sono stati misurati mediante kit ELISA sandwich. I livelli di transferrina sono stati utilizzati come strumento di screening per la presenza di sangue nei campioni di saliva e i campioni con valori di transferrina superiori a 1 mg/dl sono stati considerati candidati per l'esclusione in altri test salivari. Il dosaggio del cortisolo ha una sensibilità <0,007 μg/ml e un coefficiente di variazione inter-dosaggio <11%, mentre queste caratteristiche sono 0,07 pg/ml e 8 per l'interleuchina-6, 0,37 pg/ml e 7 per l'interleuchina-1β, 10 pg/ml e 11,2 per CRP, nonché 0,08 mg/dl e 7,2 rispettivamente per la transferrina.