Spyttbetennelsesmarkører ved spenningshodepine og migrene (SalHead)

Seksti forsøkspersoner av begge kjønn, i alderen 18 til 60 år, med primær hodepine TTH og migrene, i henhold til International Classification of Headache Disorders, 3. utgave (beta-versjon), ble registrert fra den polikliniske hodepineklinikken ved Universitetssykehuset i Athen mellom kl. januar til mars 2016. 30 friske kontrollpersoner i alderen matchet ble rekruttert hovedsakelig fra sykehuspersonell og pasientenes pårørende.

Til å begynne med fullførte deltakerne Hamilton Anxiety (HAM-A), Scale Beck Depression Inventory (BDI). Alle pasientene måtte føre hodepinedagbok i løpet av den fire uker lange innkjøringsperioden. Alle som lider av hodepine ble bedt om å samle inn spytthodepinefrie baselineprøver på tidspunktet for studiescreeningen når de hadde vært fri for hodepine i minst 48 timer (tidspunkt A). Alle hodepine som lider, ble samlet inn ekstra prøver under moderat/alvorlig hodepine (tidspunkt B), og ved selvdefinert oppløsningsfase 24 timer etter hodepineanfallet (tidspunkt C). Friske kontrollpersoner ble bedt om å samle prøver på tidspunktet for studiescreening (tidspunkt D). Hver uke, inntil fire uker og en måned etter endt studie, ble deltakerne kontaktet, for å sikre samsvar og riktig bruk av teknikken. Ett år senere vil også longitudinelle data bli innhentet.

Spyttprøvetaking Detaljerte instruksjoner for riktig innsamling av spyttprøver ble gitt til alle deltakerne. Slike instruksjoner inkluderer å unngå å spise et større måltid og tannpuss 60 minutter før prøvetaking. Også inntak av matvarer med høyt sukker- og koffeininnhold, samt mat med høy surhet, må utelukkes før spyttprøvetaking. Skyll munn med vann for å fjerne eventuelle matrester og spyttprøvetaking minst 10 minutter etter munnskylling ble anbefalt. Ustimulert hel spytt som samlet seg på munnbunnen ble samlet inn fra pasienter og friske frivillige i høykvalitets polypropylen hetteglass ved hjelp av passiv sikleteknikk. Til slutt ble alle prøvene lagret i en plastbeholder ved 2-4 °C frem til analyse. Spytt ble samlet inn fra deltakerne klokken 8.00 om morgenen for å utelukke enhver forstyrrende faktor forårsaket av døgnrytme.

Prøveanalyse Morgenprøver ble oppbevart i kjøleskapet ved 4°C og ble på slutten av dagen brakt til laboratoriet hvor de ble sentrifugert 3000 rpm ved 4°C og supernatanten ble delt inn i kryogene polypropylen-ampuller. Ampuller ble frosset i -80°C inntil de ble analysert. Spytttransferrinnivåer ble målt med konkurrerende immunoassay-sett og Interleukin-6, Interleukin-1β og CRP-nivåer ble målt med sandwich ELISA-sett. Transferrinnivåer ble brukt som et screeningverktøy for tilstedeværelse av blod i spyttprøver og prøver med transferrinverdier større enn 1 mg/dl ble vurdert som kandidater for ekskludering i andre spyttanalyser. Kortisolanalysen har en sensitivitet på < 0,007 μg/ml og en variasjonskoeffisient mellom analyser på < 11 %, mens disse egenskapene er 0,07 pg/ml og 8 for Interleukin-6, 0,37 pg/ml og 7 for Interleukin-1β, 10 pg/ml og 11,2 for CRP samt 0,08 mg/dl og 7,2 for henholdsvis transferrin.