Osmotická křehkost v červených krvinkách dětských pacientů s cholestatickým onemocněním jater

Primární cíl:

Primárním cílem je určit, zda je ektocytometrie červených krvinek abnormální v populaci pediatrických pacientů starších jednoho roku s cholestázou.

Sekundární cíle:

Sekundárním cílem je zjistit, do jaké míry souvisí abnormality hladin bilirubinu, hladin žlučových kyselin, vitaminu E nebo cholesterolu u cholestatických pacientů se změnami v ektocytometrii červených krvinek u této populace pacientů.

DOSAVADNÍ STAV TECHNIKY Cholestatické onemocnění jater je zastřešující termín pro snížený tok žluči buď z extrahepatální obstrukce žlučových cest nebo z chybné sekrece žluči hepatocyty. Cholestáza je dobře známou příčinou dyslipidemie a úzce souvisí s abnormálním metabolismem cholesterolu a fosfolipidů (3). Přeměna cholesterolu na žlučové kyseliny může být narušena a vazba apo-lipoproteinu B na cholesterol může být narušena, což má za následek tvorbu lipoproteinu X, který obsahuje apo-lipoprotein C (3). Konečným výsledkem dyslipidémie u cholestatických pacientů je hypercholesterolémie a zvýšený poměr membránového cholesterolu k fosfolipidům (3).

Nedostatek žluči vstupující do trávicího traktu může vést ke zvýšení sérového cholesterolu a abnormálně vysokému poměru cholesterolu v membráně červených krvinek: fosfolipidů, což vede ke změně strukturální integrity membrány červených krvinek (4,5). Pro testování tohoto jevu u pacientů s extrahepatální biliární atrézií bude 20 dětských pacientů testováno pomocí ektacytometrie k testování deformovatelnosti a osmotické fragility červených krvinek.

Ektacytometrie je diagnostický nástroj používaný k měření deformovatelnosti červených krvinek na osmotickém gradientu (6). Konkrétněji měří deformovatelnost v důsledku smykového napětí, zatímco RBC jsou suspendovány v osmotickém médiu (6,7). Může rozlišovat mezi několika krevními chorobami, jako je dědičná sférocytóza, dědičná elliptocytóza, ovalocytóza jihovýchodní Asie a pyropoikilocytóza, které je jinak obtížné diagnostikovat (8). Provádí to analýzou reologického chování při konstantním smykovém napětí in vitro a použitím fotometrické analýzy deformovatelnosti. To je pak kvantifikováno a poskytuje specifickou ektocytometrickou křivku (obrázek 1).

Křivka ektocytometrie bude mít několik jedinečných vlastností v závislosti na analyzované červené krvince. Omin část křivky představuje hodnotu osmolality, při které dochází k lýze 50 procent červených krvinek. Elmax je hodnota indexu prodloužení, která dosahuje svého maxima blízkého fyziologické osmolalitě (300 mOsm/Kg). A konečně Ohyp, který představuje klesající část křivky a koreluje s počáteční intracelulární viskozitou buněčného vzorku.

Dosud nebyla ektocytometrie systematicky využívána k charakterizaci potenciálních abnormalit červených krvinek u cholestatických pacientů. V naší analýze budou ektocytometrické profily cholestatických pacientů porovnány s profily historických necholestatických věkově odpovídajících kontrol. Stupeň křehkosti bude korelovat s hladinami přímého bilirubinu v séru, hladinami cholesterolu v séru a hladinami vitaminu E.

NÁVRH STUDIE Tato pilotní studie bude jediným centrem, prospektivním průřezovým šetřením ektacytometrie červených krvinek odebraných od 20 cholestatických dětských pacientů sledovaných v dětské nemocnici v Cincinnati. Pacienti jsou pravidelně sledováni na hepatologické ambulanci. Rodiče všech těchto pacientů budou požádáni o účast na tomto šetření. Vyšetřovatelé budou také současně analyzovat ektacytometrii 20 věkově odpovídajících kontrol rekrutovaných z obecných GI klinik bez cholestatického onemocnění jater ani s neznámými defekty membrány červených krvinek.

TRVÁNÍ Očekává se, že dokončení studie bude trvat přibližně 6–12 měsíců. Tento časový rozvrh zahrnuje 3–6 měsíců na nábor pacientů a provádění testů a dalších 3–6 měsíců na analýzu dat a dokončení rukopisu.