Fragilità osmotica nei globuli rossi di pazienti pediatrici con malattia epatica colestatica

Obiettivo primario:

L'obiettivo principale è determinare se l'ectacitometria dei globuli rossi è anormale in una popolazione di pazienti pediatrici di età superiore a un anno con colestasi.

Obiettivi secondari:

Lo scopo secondario è quello di accertare la misura in cui le anomalie nei livelli di bilirubina, livelli di acidi biliari, livelli di vitamina E o livelli di colesterolo nei pazienti colestatici sono correlati ai cambiamenti nell'ectacitometria dei globuli rossi in questa popolazione di pazienti.

BACKGROUND La malattia epatica colestatica è un termine generico per la riduzione del flusso biliare da un'ostruzione extraepatica dei dotti biliari o da una secrezione biliare difettosa da parte degli epatociti. La colestasi è una causa ben nota di dislipidemia ed è strettamente associata ad anomalie del metabolismo del colesterolo e dei fosfolipidi (3). La conversione del colesterolo in acidi biliari può essere compromessa e il legame dell'apolipoproteina B al colesterolo può essere compromesso, determinando la formazione della lipoproteina X che contiene l'apolipoproteina C (3). Il risultato finale della dislipidemia nei pazienti colestatici è l'ipercolesterolemia e un aumento del rapporto tra colesterolo di membrana e fosfolipidi (3).

La mancanza di bile che entra nel tratto digestivo può portare ad un aumento del colesterolo sierico e ad un rapporto anormalmente elevato di colesterolo della membrana dei globuli rossi: fosfolipidi, con conseguente alterazione dell'integrità strutturale della membrana dei globuli rossi (4,5). Per testare questo fenomeno in pazienti con atresia biliare extraepatica, 20 pazienti pediatrici saranno testati utilizzando l'ectacitometria per testare la deformabilità e la fragilità osmotica dei globuli rossi.

L'ectacitometria è uno strumento diagnostico utilizzato per misurare la deformabilità dei globuli rossi su un gradiente osmotico (6). Più in particolare misura la deformabilità dovuta allo sforzo di taglio, mentre i globuli rossi sono sospesi in un mezzo osmotico (6,7). Può differenziare tra diverse malattie del sangue come la sferocitosi ereditaria, l'ellissocitosi ereditaria, l'ovalocitosi del sud-est asiatico e la piropoichilocitosi che sono altrimenti difficili da diagnosticare (8). Lo fa analizzando il comportamento reologico sotto sforzo di taglio costante in vitro e utilizzando l'analisi fotometrica della deformabilità. Questo viene quindi quantificato e fornisce una curva ektacytometry specifica (Figura 1).

La curva ektacytometry avrà diverse caratteristiche uniche a seconda del globulo rosso analizzato. La parte Omin della curva rappresenta il valore dell'osmolalità in cui il 50% dei globuli rossi si lisa. L'Elmax è il valore dell'indice di allungamento che raggiunge il suo massimo vicino all'osmolalità fisiologica (300 mOsm/Kg). E infine l'Ohyp, che rappresenta la porzione discendente della curva e si correla alla viscosità intracellulare iniziale del campione di cellule.

Ad oggi, l'ectacitometria non è stata impiegata sistematicamente per caratterizzare potenziali anomalie dei globuli rossi nei pazienti colestatici. Nella nostra analisi i profili ektacitometrici dei pazienti colestatici saranno confrontati con quelli dei controlli storici non colestatici di pari età. Il grado di fragilità sarà correlato con i livelli sierici di bilirubina diretta, livelli sierici di colesterolo e livelli sierici di vitamina E.

DISEGNO DELLO STUDIO Questo studio pilota sarà un singolo centro, indagine prospettica trasversale sull'ectacitometria dei globuli rossi prelevati da 20 pazienti pediatrici colestatici seguiti al Cincinnati Children's Hospital. I pazienti vengono visitati regolarmente per un follow-up continuo nella clinica di epatologia. I genitori di tutti questi pazienti saranno invitati a partecipare a questa indagine. Gli investigatori analizzeranno anche contemporaneamente l'ectacitometria di 20 controlli di pari età reclutati dalle cliniche gastrointestinali generali senza malattia epatica colestatica né con difetti della membrana dei globuli rossi.

DURATA Si prevede che lo studio richiederà circa 6-12 mesi per essere completato. Questa tabella di tempo include 3-6 mesi per reclutare pazienti ed eseguire i test e altri 3-6 mesi per analizzare i dati e completare un manoscritto.