Osmotyczna kruchość krwinek czerwonych pacjentów pediatrycznych z cholestatyczną chorobą wątroby

Główny cel:

Głównym celem jest określenie, czy ektocytometria krwinek czerwonych jest nieprawidłowa w populacji pacjentów pediatrycznych powyżej pierwszego roku życia z cholestazą.

Cele drugorzędne:

Celem drugorzędnym jest ustalenie, w jakim stopniu nieprawidłowości poziomu bilirubiny, poziomu kwasów żółciowych, poziomu witaminy E lub poziomu cholesterolu u pacjentów z cholestazą są związane ze zmianami ektocytometrii krwinek czerwonych w tej populacji pacjentów.

WPROWADZENIE Cholestatyczna choroba wątroby to ogólny termin określający zmniejszony przepływ żółci z powodu pozawątrobowej niedrożności dróg żółciowych lub nieprawidłowego wydzielania żółci przez hepatocyty. Cholestaza jest dobrze poznaną przyczyną dyslipidemii i jest ściśle związana z nieprawidłowym metabolizmem cholesterolu i fosfolipidów (3). Konwersja cholesterolu do kwasów żółciowych może być upośledzona, a wiązanie apolipoproteiny B z cholesterolem może być upośledzone, co prowadzi do powstania lipoproteiny X, która zawiera apolipoproteinę C (3). Końcowym skutkiem dyslipidemii u pacjentów z cholestazą jest hipercholesterolemia i zwiększony stosunek cholesterolu błonowego do fosfolipidów (3).

Brak żółci w przewodzie pokarmowym może prowadzić do podwyższonego poziomu cholesterolu w surowicy i nienormalnie wysokiego stosunku cholesterolu do fosfolipidów w błonie krwinek czerwonych, co skutkuje zmienioną integralnością strukturalną błony krwinek czerwonych (4,5). Aby zbadać to zjawisko u pacjentów z pozawątrobową atrezją dróg żółciowych, 20 pacjentów pediatrycznych zostanie przebadanych za pomocą ektocytometrii w celu zbadania odkształcalności i kruchości osmotycznej krwinek czerwonych.

Ektacytometria jest narzędziem diagnostycznym służącym do pomiaru odkształcalności krwinek czerwonych w gradiencie osmotycznym (6). Dokładniej mierzy odkształcalność spowodowaną naprężeniem ścinającym, podczas gdy RBC są zawieszone w ośrodku osmotycznym (6,7). Może rozróżnić kilka chorób krwi, takich jak dziedziczna sferocytoza, dziedziczna eliptocytoza, owalocytoza w Azji Południowo-Wschodniej i piropoikilocytoza, które w inny sposób są trudne do zdiagnozowania (8). Robi to, analizując zachowanie reologiczne w warunkach stałego naprężenia ścinającego in vitro i stosując fotometryczną analizę odkształcalności. Jest to następnie określane ilościowo i zapewnia specyficzną krzywą ektocytometrii (ryc. 1).

Krzywa ektocytometrii będzie miała kilka unikalnych cech w zależności od analizowanej krwinki czerwonej. Część Omin krzywej reprezentuje wartość osmolalności, przy której lizie ulega 50 procent czerwonych krwinek. Elmax to wartość wskaźnika wydłużenia, która osiąga swoje maksimum w pobliżu osmolalności fizjologicznej (300 mOsm/kg). I wreszcie Ohyp, który reprezentuje opadającą część krzywej i koreluje z początkową lepkością wewnątrzkomórkową próbki komórkowej.

Do tej pory ektocytometria nie była systematycznie stosowana do charakteryzowania potencjalnych nieprawidłowości krwinek czerwonych u pacjentów z cholestazą. W naszej analizie profile ektocytometrii pacjentów z cholestazą zostaną porównane z profilami historycznych nie cholestatycznych grup kontrolnych dobranych pod względem wieku. Stopień kruchości będzie skorelowany z poziomem bilirubiny bezpośredniej w surowicy, poziomem cholesterolu w surowicy i poziomem witaminy E.

PROJEKT BADANIA To badanie pilotażowe będzie jednoośrodkowym, prospektywnym, przekrojowym badaniem ektocytometrii krwinek czerwonych pobranych od 20 cholestatycznych pacjentów pediatrycznych, którzy byli obserwowani w Szpitalu Dziecięcym w Cincinnati. Pacjenci są regularnie obserwowani w celu dalszej obserwacji w poradni hepatologicznej. Rodzice wszystkich tych pacjentów zostaną poproszeni o udział w tym badaniu. Badacze będą również jednocześnie analizować ektocytometrię 20 osób kontrolnych dobranych pod względem wieku, rekrutowanych z ogólnych klinik GI bez cholestatycznej choroby wątroby ani znanych defektów błony krwinek czerwonych.

CZAS TRWANIA Przewiduje się, że badanie potrwa około 6-12 miesięcy. Ten harmonogram obejmuje 3-6 miesięcy na rekrutację pacjentów i wykonanie testów oraz kolejne 3-6 miesięcy na analizę danych i ukończenie manuskryptu.