Fragilidade osmótica em hemácias de pacientes pediátricos com doença hepática colestática

Objetivo primário:

O objetivo principal é determinar se a ectacitometria dos glóbulos vermelhos é anormal em uma população de pacientes pediátricos com mais de um ano de idade com colestase.

Objetivos Secundários:

O objetivo secundário é verificar até que ponto as anormalidades nos níveis de bilirrubina, níveis de ácidos biliares, níveis de vitamina E ou níveis de colesterol em pacientes colestáticos estão relacionadas a alterações na ectacitometria de glóbulos vermelhos nessa população de pacientes.

ANTECEDENTES A doença hepática colestática é um termo geral para redução do fluxo biliar decorrente de obstrução extra-hepática dos ductos biliares ou secreção defeituosa da bile dos hepatócitos. A colestase é uma causa bem reconhecida de dislipidemia e está intimamente associada ao colesterol anormal e ao metabolismo dos fosfolipídios (3). A conversão do colesterol em ácidos biliares pode ser prejudicada, e a ligação da apolipoproteína B ao colesterol pode ser prejudicada, resultando na formação da lipoproteína X que contém apolipoproteína C (3). O resultado final da dislipidemia em pacientes colestáticos é a hipercolesterolemia e um aumento da proporção de colesterol de membrana para fosfolipídios (3).

A falta de bile entrando no trato digestivo pode levar ao aumento do colesterol sérico e colesterol da membrana das hemácias anormalmente altas: proporções de fosfolipídios, resultando em alteração da integridade estrutural da membrana das hemácias (4,5). Para testar esse fenômeno em pacientes com atresia biliar extra-hepática, 20 pacientes pediátricos serão testados por ectacitometria para testar a deformabilidade e fragilidade osmótica das hemácias.

A ectacitometria é uma ferramenta de diagnóstico usada para medir a deformabilidade dos glóbulos vermelhos em um gradiente osmótico (6). Mais especificamente, ele mede a deformabilidade devido ao estresse de cisalhamento, enquanto as hemácias estão suspensas em um meio osmótico (6,7). Ele pode diferenciar entre várias doenças do sangue, como esferocitose hereditária, eliptocitose hereditária, ovalocitose do sudeste asiático e piropoiquilocitose, que de outra forma são difíceis de diagnosticar (8). Ele faz isso analisando o comportamento reológico sob tensão de cisalhamento constante in vitro e usando análise fotométrica de deformabilidade. Isso é então quantificado e fornece uma curva ektacytometry específica (Figura 1).

A curva de ectacitometria terá várias características únicas, dependendo do glóbulo vermelho que está sendo analisado. A porção Omin da curva representa o valor da osmolaridade em que 50 por cento dos glóbulos vermelhos sofrem lise. O Elmax é o valor do índice de alongamento que atinge seu máximo próximo à osmolaridade fisiológica (300 mOsm/Kg). E por último o Ohyp, que representa a parte decrescente da curva e se correlaciona com a viscosidade intracelular inicial da amostra de células.

Até o momento, a ectacitometria não foi empregada sistematicamente para caracterizar potenciais anormalidades dos glóbulos vermelhos em pacientes colestáticos. Em nossa análise, os perfis de ectacitometria de pacientes colestáticos serão comparados aos de controles históricos não colestáticos pareados por idade. O grau de fragilidade será correlacionado com os níveis séricos de bilirrubina direta, níveis séricos de colesterol e níveis séricos de vitamina E.

DESENHO DO ESTUDO Este estudo piloto será uma investigação transversal prospectiva de um único centro sobre a ectacitometria de glóbulos vermelhos retirados de 20 pacientes pediátricos colestáticos acompanhados no Cincinnati Children's Hospital. Os pacientes são vistos regularmente para acompanhamento contínuo na clínica de hepatologia. Os pais de todos esses pacientes serão convidados a participar desta investigação. Os investigadores também analisarão simultaneamente a ectacitometria de 20 controles pareados por idade, recrutados das clínicas GI gerais sem doença hepática colestática nem com defeitos conhecidos nas membranas dos glóbulos vermelhos.

DURAÇÃO Prevê-se que o estudo leve de 6 a 12 meses para ser concluído. Este cronograma inclui 3-6 meses para recrutar pacientes e realizar os ensaios e outros 3-6 meses para analisar os dados e concluir um manuscrito.