Melatonin podporuje nechirurgickou parodontální léčbu u pacientů s diabetem 2. typu a parodontitidou

Etické schválení Tato dvojitě zaslepená a randomizovaná kontrolovaná klinická studie byla provedena na 55 pacientech s DM 2. typu a parodontitidou, kteří se v letech 2021/únor a 2022/leden přihlásili na Parodontologickou kliniku Fakulty zubního lékařství Univerzity Recepa Tayyipa Erdoğana a splnili studijní kritéria. Etický souhlas udělila Etická komise klinického výzkumu Lékařské fakulty téže univerzity v rámci Helsinské deklarace (2008) (2022/03). Účastníkům byla zmíněna možná rizika a přínosy léčby a byl získán jejich ústní a písemný souhlas.

Pracovní skupiny Podle WHO byla u jedinců v mladé věkové kategorii stanovena jako diagnostické kritérium pro parodontitidu „paradentóza 3/4 stadia“ podle aktuální klasifikace onemocnění parodontu a stavu. V souladu s tím by hloubka sondovací kapsy (PPD) měla být alespoň 6 mm a ztráta kosti by měla být alespoň 3 mm. Naším diagnostickým kritériem pro DM 2. typu byla hladina glukózy v plazmě nalačno (FPG) vyšší než 126 mg/dl a hladina glykosylovaného hemoglobinu (HbA1c) vyšší než 6,5 %. Ti, kteří kouří, užívají antibiotika, protizánětlivé a antioxidační léky v posledních 6 měsících, pracují na noční směny, jsou v těhotenství a kojení, mají rakovinu a autoimunitní onemocnění, mají onemocnění ledvin, podstoupili jakoukoli parodontologickou léčbu v posledních 6 měsících obézní pacienti byli také ze studie vyloučeni. V Evropě je obezita definována jako body-mass index (BMI) vyšší než 30 kg/m2 a obvod pasu více než 88 cm u žen a 102 cm u mužů.

Protokol léčby Podle výše uvedených kritérií byli pacienti zařazení do studie náhodně rozděleni do kontrolní (fmSRP) a léčebné skupiny [fmSRP-melatonin (fmSRP-mel)] pomocí počítačového programu nezávislého výzkumníka (HA). Zkoušející (YSG), který poskytl vzorek a provedl klinické postupy, byl vůči studijním skupinám slepý. fmSRP je přístup k dokončení supragingiválního a subgingiválního debridementu během 24 hodin pomocí parodontálních kyret, scalerů a ultrazvukových nástrojů. Další podávání melatoninu bylo provedeno ve formě tablet obsahujících 6 mg melatoninu denně po dobu 30 dnů ode dne následujícího po SRP. Pacienti byli instruováni, aby užívali tablety těsně před spaním. V kontrolní skupině nebyla provedena žádná další aplikace. V rámci programu nechirurgické parodontologické léčby byli všichni pacienti proškoleni v čištění zubů modifikovanou basovou technikou a používání vhodných nástrojů pro čištění rozhraní. Tato školení se opakovala při údržbě. Účastníci byli také poučeni, aby nepoužívali žádnou ústní vodu.

Odběr vzorků a klinická měření parodontu Klinická měření parodontu se vzorky gingivální crevikulární tekutiny (GCF) a séra byla prováděna na začátku (T0) a ve 3. (T1) a 6. měsíci (T2) po fmSRP. Ve všech třech obdobích byl odběr vzorků proveden jeden den před klinickým měřením parodontu.

Vzorky GCF byly ráno odebrány z interproximálních oblastí dvou zubů s největší radiografickou ztrátou kostní hmoty v každém ze čtyř kvadrantů. Zpočátku se řádné izolace dosahovalo pomocí bavlněných smotků. Oblast byla mírně vysušena po dobu 10 sekund. Sterilní papírové proužky (Periopaper, Proflow, Inc., Amityviile, NY) byly posouvány, dokud nebyl v sulku pociťován minimální odpor. Čekal 30 sekund. Papírové proužky kontaminované krví nebo slinami nebyly zahrnuty. Objem GCF v každém papírovém proužku byl měřen pomocí periotronového zařízení (Periotron 8010 Harco Electronics, Winnipeg, Kanada) metodou elektrické kompedance a zaznamenán jako ul. Ihned poté bylo 8 papírových proužků získaných od každého pacienta přeneseno do eppendorfovy zkumavky obsahující 250 ul roztoku fosfátového pufru. Byl skladován v mrazáku -80 °C (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) až do dne biochemické analýzy.

Bezprostředně po odběru vzorků GCF bylo pacientům odebráno 16 cc vzorků žilní krve z oblasti předloktní jamky levé paže. Poté, co byla krev centrifugována při 3000 ot./min. při 2-8°C po dobu 15 minut, byly získány vzorky séra (Elektro-mag, Istanbul, Turecko). Vzorky byly odebrány do Eppendorfových zkumavek a uchovávány v -80 °C mrazáku (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) až do dne analýzy.

Pro klinické hodnocení stavu parodontu byla provedena měření plakového indexu (PI), gingiválního indexu (GI), krvácení při sondování (BOP), PPD a úrovně klinického přilnutí (CAL). PPD byla měřena jako vzdálenost mezi nejhlubším bodem sulku a okrajem dásně a CAL jako vzdálenost mezi nejhlubším bodem sulku a spojením skloviny a cementu. Bodování pro každý zub bylo provedeno ze 6 různých oblastí pro PPD a CAL a ze 4 různých oblastí pro ostatní indexy. K měření byla použita Williamsova parodontální sonda (Hu-Friedy, Chicago, IL, USA).

Biochemická analýza Eppendorfovy zkumavky, které byly vyjmuty z mrazáku 24 hodin před experimentem, byly ponechány postupně rozmrazit, nejprve při -20 °C a poté při +4 °C. Vzorky a činidla byly těsně před analýzou vytemperovány na pokojovou teplotu (18-25oC). Analýzy RANKL (katalogové číslo: E-EL-H5813), OPG (katalogové číslo: E-EL-H1341) a MMP-8 (katalogové číslo: E-EL-H1450) ve vzorcích GCF, IL-1ß (katalogové číslo: E - EL-H0149) analýzy byly provedeny na vzorcích séra metodou ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) a podle pokynů výrobce soupravy (Elabscience, Houston, Texas, USA). Výsledky byly vypočteny jako ng/ml (MMP-8) a pg/ml (IL-lp, RANKL a OPG).

Statistická analýza Pro statistickou analýzu byl použit program Windows 17.0 pro SPSS. (SPSS Inc., Chicago, USA) Shoda dat s normální distribucí byla hodnocena Shapiro Wilk testem. Pro meziskupinové srovnání byl použit Mann Whitney U test a pro analýzu časově závislých změn v rámci skupiny byly použity Friedmanovy, Wilxoconovy testy a Bonferroniho korekce. Chí-kvadrát test byl použit pro srovnání mezi skupinami z hlediska pohlaví. Hladina p<0,05 byla považována za statisticky významnou.