Melatonina wspomaga niechirurgiczne leczenie przyzębia u pacjentów z cukrzycą typu 2 i zapaleniem przyzębia

Zatwierdzenie etyczne To podwójnie ślepe, randomizowane, kontrolowane badanie kliniczne przeprowadzono na 55 pacjentach z cukrzycą typu 2 i zapaleniem przyzębia, którzy zgłosili się do Kliniki Periodontologii Wydziału Stomatologii Uniwersytetu Recepa Tayyipa Erdoğana w okresie od 2021/luty do 2022/styczeń kryteria studiowania. Zgodę etyczną wydała Komisja Etyki Badań Klinicznych Wydziału Lekarskiego tej samej uczelni w ramach Deklaracji Helsińskiej (2008) (2022/03). Wspomniano o możliwych zagrożeniach i korzyściach związanych z zastosowanym leczeniem oraz uzyskano ich ustną i pisemną zgodę.

Grupy robocze Według WHO u osób w młodej kategorii wiekowej jako kryterium diagnostyczne zapalenia przyzębia określono „zapalenie przyzębia stopnia 3/4” zgodnie z aktualną klasyfikacją chorób i stanów przyzębia. W związku z tym głębokość kieszeni sondującej (PPD) powinna wynosić co najmniej 6 mm, a utrata kości powinna wynosić co najmniej 3 mm. Naszymi kryteriami diagnostycznymi dla cukrzycy typu 2 było stężenie glukozy w osoczu na czczo (FPG) powyżej 126 mg/dl i stężenie hemoglobiny glikozylowanej (HbA1c) powyżej 6,5%. Osoby palące papierosy, stosujące w ciągu ostatnich 6 miesięcy antybiotyki, leki przeciwzapalne i antyoksydacyjne, pracujące na nocne zmiany, będące w ciąży i karmiące piersią, chorujące na nowotwory, choroby autoimmunologiczne, choroby nerek, które w ciągu ostatnich 6 miesięcy były leczone periodontologicznie, otyłe pacjentów również wykluczono z badania. W Europie otyłość definiuje się jako wskaźnik masy ciała (BMI) powyżej 30 kg/m2 i obwód talii powyżej 88 cm u kobiet i 102 cm u mężczyzn.

Protokół leczenia Zgodnie z powyższymi kryteriami, pacjentów włączonych do badania podzielono losowo na grupy kontrolną (fmSRP) i leczoną [fmSRP-melatonina (fmSRP-mel)] za pomocą programu komputerowego niezależnego badacza (HA). Badacz (YSG), który dostarczył próbkę i przeprowadził procedury kliniczne, był ślepy na badane grupy. fmSRP jest podejściem polegającym na ukończeniu zabiegów oczyszczania naddziąsłowego i poddziąsłowego w ciągu 24 godzin za pomocą kiret periodontologicznych, skalerów i instrumentów ultradźwiękowych. Dodatkową dawkę melatoniny podawano w postaci tabletek zawierających 6 mg melatoniny dziennie przez 30 dni od dnia następującego po SRP. Pacjenci zostali poinstruowani, aby przyjmować tabletki tuż przed snem. W grupie kontrolnej nie wykonano dodatkowej aplikacji. W ramach programu niechirurgicznego leczenia periodontologicznego wszyscy pacjenci zostali przeszkoleni w zakresie szczotkowania zębów techniką basową modyfikowaną oraz stosowania odpowiednich narzędzi do czyszczenia interfejsów. Szkolenia te powtarzano w sesjach konserwacyjnych. Uczestników poinstruowano również, aby nie używali żadnych płynów do płukania jamy ustnej.

Pobieranie próbek i kliniczne pomiary przyzębia Kliniczne pomiary przyzębia za pomocą płynu dziąsłowego (GCF) i próbek surowicy przeprowadzono na początku badania (T0) oraz w 3. (T1) i 6. miesiącu (T2) po fmSRP. We wszystkich trzech okresach próbki pobierano jeden dzień przed klinicznymi pomiarami periodontologicznymi.

Próbki GCF pobrano rano z obszarów międzyzębowych dwóch zębów z największą radiograficzną utratą kości w każdym z czterech ćwiartek. Początkowo właściwą izolację uzyskiwano za pomocą wacików. Obszar był lekko suszony przez 10 sekund. Sterylne paski papieru (Periopaper, Proflow, Inc., Amityviile, NY) przesuwano aż do wyczucia minimalnego oporu w bruździe. Czekałem 30 sekund. Paski papieru zanieczyszczone krwią lub śliną nie zostały uwzględnione. Objętość GCF w każdym pasku papieru mierzono za pomocą urządzenia periotronowego (Periotron 8010 Harco Electronics, Winnipeg, Kanada) metodą zgodności elektrycznej i zapisywano jako ul. Bezpośrednio potem 8 pasków bibuły uzyskanych od każdego pacjenta przeniesiono do probówki Eppendorfa zawierającej 250 µl roztworu buforu fosforanowego. Przechowywano go w zamrażarce -80°C (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) do dnia analizy biochemicznej.

Bezpośrednio po pobraniu próbek GCF pobrano 16 cm3 próbek krwi żylnej z okolicy dołu łokciowego lewego ramienia pacjentów. Po odwirowaniu krwi przy 3000 obr./min w temperaturze 2-8oC przez 15 minut uzyskano próbki surowicy (Elektro-mag, Stambuł, Turcja). Próbki pobrano do probówek Eppendorfa i przechowywano w zamrażarce -80°C (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) do dnia analizy.

W celu klinicznej oceny stanu przyzębia przeprowadzono pomiary wskaźnika płytki nazębnej (PI), wskaźnika dziąseł (GI), krwawienia podczas sondowania (BOP), PPD i klinicznego poziomu przyczepu (CAL). PPD mierzono jako odległość między najgłębszym punktem bruzdy a brzegiem dziąsła, a CAL jako odległość między najgłębszym punktem bruzdy a połączeniem szkliwo-cement. Oceny dla każdego zęba dokonano z 6 różnych regionów dla PPD i CAL oraz z 4 różnych regionów dla innych wskaźników. Do pomiarów użyto sondy periodontologicznej Williamsa (Hu-Friedy, Chicago, IL, USA).

Analiza biochemiczna Probówki Eppendorfa, które wyjęto z zamrażarki 24 godziny przed eksperymentem, pozostawiono do stopniowego rozmrożenia, najpierw w -20oC, a następnie w +4oC. Tuż przed analizą próbki i odczynniki doprowadzono do temperatury pokojowej (18-25oC). Analizy RANKL (nr katalogowy: E-EL-H5813), OPG (nr katalogowy: E-EL-H1341) i MMP-8 (nr katalogowy: E-EL-H1450) w próbkach GCF, IL-1ß (nr katalogowy: E - EL-H0149) przeprowadzono analizy próbek surowicy przy użyciu metody testu immunoenzymatycznego (ELISA) i zgodnie z instrukcjami producenta zestawu (Elabscience, Houston, Teksas, USA). Wyniki obliczono jako ng/ml (MMP-8) i pg/ml (IL-1β, RANKL i OPG).

Analiza statystyczna Do analizy statystycznej wykorzystano program Windows 17.0 for SPSS. (SPSS Inc., Chicago, USA) Zgodność danych z rozkładem normalnym oceniono za pomocą testu Shapiro Wilka. Do porównań międzygrupowych wykorzystano test U Manna Whitneya, a do analizy zależnych od czasu zmian wewnątrzgrupowych zastosowano testy Friedmana, Wilxocona i poprawkę Bonferroniego. Do porównania grup pod względem płci zastosowano test chi-kwadrat. Poziom p<0,05 uznano za istotny statystycznie.