褪黑激素支持 2 型糖尿病和牙周炎患者的非手术牙周治疗

伦理批准 这项双盲和随机对照临床研究针对 55 名 2 型糖尿病和牙周炎患者进行，这些患者在 2021 年/2 月至 2022/1 月期间申请了 Recep Tayyip Erdogan 大学牙科学院牙周病诊所，并符合研究标准。 同一所大学医学院的临床研究伦理委员会在赫尔辛基宣言 (2008) (2022/03) 的框架内给予了伦理批准。 提及了将应用于参与者的治疗的可能风险和益处，并获得了他们的口头和书面同意。

工作组 根据WHO，在年轻人群中，根据现行的牙周疾病和病症分类，确定“3/4期牙周炎”作为牙周炎的诊断标准。 因此，探诊袋深度 (PPD) 应至少为 6 毫米，骨丢失应至少为 3 毫米。 我们对 2 型 DM 的诊断标准是空腹血糖 (FPG) 水平大于 126 mg/dl 和糖化血红蛋白水平 (HbA1c) 大于 6.5%。 吸烟、过去 6 个月内使用抗生素、抗炎和抗氧化药物、上夜班、怀孕和哺乳、患有癌症和自身免疫性疾病、患有肾脏疾病、过去 6 个月内接受过任何牙周治疗的人 肥胖患者也被排除在研究之外。 在欧洲，肥胖被定义为体重指数 (BMI) 超过 30 kg/m2，女性腰围超过 88 厘米，男性腰围超过 102 厘米。

治疗方案 根据上述标准，独立研究人员 (HA) 通过计算机程序将参与研究的患者随机分为对照组 (fmSRP) 和治疗组 [fmSRP-褪黑激素 (fmSRP-mel)]。 提供样本并进行临床程序的研究者 (YSG) 对研究组不知情。 fmSRP 是一种在 24 小时内使用牙周刮匙、洁牙器和超声波仪器完成龈上和龈下清创手术的方法。 从 SRP 之后的第二天起，以每天含有 6 毫克褪黑激素的片剂形式进行额外的褪黑激素给药，持续 30 天。 患者被指示在睡前服用药片。 对照组不追加应用。 在非手术牙周治疗计划的范围内，所有患者都接受了使用改进的低音技术刷牙和使用适当的界面清洁工具的培训。 这些培训在维护期间重复进行。 还指示参与者不要使用任何漱口水。

样本采集和临床牙周测量 在 fmSRP 后的基线 (T0) 和第 3 个月 (T1) 和第 6 个月 (T2) 进行牙龈沟液 (GCF) 和血清样本的临床牙周测量。 在所有三个时期中，取样都是在临床牙周测量前一天进行的。

GCF 样本取自两个牙齿的邻间区域，在早上四个象限中的每个象限中具有最多的放射照相骨丢失。 最初，通过棉卷实现适当的隔离。 该区域稍微干燥 10 秒。 无菌纸条（Periopaper, Proflow, Inc., Amityviile, NY）被推进直到在沟中感觉到最小的阻力。 等了 30 秒。 不包括被血液或唾液污染的纸条。 每个纸条中的 GCF 体积使用 periotron 装置（Periotron 8010 Harco Electronics，Winnipeg，Canada）通过电气阻抗法测量并记录为 µl。 紧接着，将从每个患者获得的 8 个纸条转移到含有 250 µl 磷酸盐缓冲溶液的 eppendorf 管中。 将其储存在 -80°C 冰箱（Thermo Fisher Scientific，Waltham，MA，USA）中直至进行生化分析。

在 GCF 样品之后，立即从患者的左臂肘前窝区域采集 16 cc 静脉血样。 将血液在 2-8oC 下以 3000 rpm 离心 15 分钟后，获得血清样品（Elektro-mag，伊斯坦布尔，土耳其）。 将样品放入 Eppendorf 管中并保存在 -80°C 冰箱（Thermo Fisher Scientific，Waltham，MA，USA）中直至分析当天。

牙菌斑指数 (PI)、牙龈指数 (GI)、探诊出血 (BOP)、PPD 和临床附着水平 (CAL) 测量用于临床牙周状态评估。 PPD 测量为沟最深点与牙龈边缘之间的距离，CAL 测量为沟最深点与牙釉质-牙骨质交界处之间的距离。 PPD 和 CAL 从 6 个不同区域对每颗牙齿进行评分，其他指数从 4 个不同区域进行评分。 威廉姆斯牙周探针 (Hu-Friedy, Chicago, IL, USA) 用于测量。

生化分析 在实验前 24 小时从冰箱中取出的 Eppendorf 管逐渐解冻，先在 -20oC，然后在 +4oC。 分析前将样品和试剂置于室温 (18-25oC)。 RANKL（货号：E-EL-H5813）、OPG（货号：E-EL-H1341）和 MMP-8（货号：E-EL-H1450）分析 GCF 样品、IL-1ß（货号：E - EL-H0149) 使用酶联免疫吸附测定 (ELISA) 方法并根据试剂盒制造商（Elabscience，休斯敦，德克萨斯州，美国）的说明对血清样品进行分析。 结果计算为 ng/ml (MMP-8) 和 pg/ml（IL-1β、RANKL 和 OPG）。

统计分析 Windows 17.0 for SPSS 程序用于统计分析。 (SPSS Inc., Chicago, USA) 数据对正态分布的符合性通过 Shapiro Wilk 检验进行评估。 Mann Whitney U 检验用于组间比较，Friedman、Wilxocon 检验和 Bonferroni 校正用于分析随时间变化的组内变化。 卡方检验用于组间性别比较。 p<0.05 水平被认为具有统计学意义。