Vývoj biomarkerů pro monitorování menopauzy u žen

Pozadí ： Rovnost žen a mužů a spravedlivé zdraví se v posledních letech objevily jako mezinárodní trendy. Navzdory stávajícím řešením zdravotních problémů žen zůstává mnoho potřeb neuspokojených. Podle projekcí se očekává, že globální populace menopauzálních obyvatel do roku 2030 dosáhne 1,2 miliardy, což překročí prevalenci nejběžnějších chronických onemocnění. V současné době existují řešení pro běžné menopauzální příznaky, jako jsou nástrahy na horka, noční pocení, únava, podrážděnost a inkontinence moči. Nevyřešené výzvy však zahrnují psychologické změny a monitorovací systémy. Cílem tohoto projektu je proto vyvinout biomarkery pro menopauzu u žen jako budoucí monitorovací systém.

Většina žen vstupuje do menopauzy ve věku 48 a 52 let. Během tohoto období zastávají ovariální folikuly aktivitu, což vede k ročnímu období po výskytu významných menstruačních nepravidelných, známých jako menopauzální přechod nebo perimenopauzu (1). Vzhledem k tomu, že funkce vaječníků postupně klesá a sekrece estrogenu klesá, dochází k různým systémovým změnám, což vede k několika podmínkám souvisejícím s menopauzou, jako je osteoporóza, kardiovaskulární onemocnění a problémy s močovým systémem. Pokles estrogenu vyvolává smyčku negativní zpětné vazby, což způsobuje zvýšení sekrece hormonu (FSH) stimulující folikuly a snížení produkce E2 (17β-estradiolu) (2). V současné době může menopauzální hormonální terapie (MHT) za použití estrogenu zmírnit menopauzální symptomy a obnovit celkovou hladinu E2, ale nesnižuje hladiny FSH na premenopauzální hladiny (3-4). Přesný biomarker pro monitorování menopauzy však dosud nebyl stanoven. Při nedostatku estrogenu může být narušena mitochondriální morfologie a funkce, zatímco přítomnost estrogenu se vztahuje ke snížené oxidační reakci, zvýšené respirační funkci a stabilní membránové vlastnosti (5). Cílem tohoto projektu je poskytnout komplexní pohled prostřednictvím metabolomiky k identifikaci biomarkerů v mitochondriích, které lze použít pro monitorování menopauzy.

Návrh studie ： Tato studie je průřezová studie. Bude zahrnuto a seskupeno celkem 100 žen do tří kategorií: 25 případů reprodukčního období, 50 případů perimenopauzálního období a 25 případů postmenopauzálního období. Bude shromážděna periferní krev. Po mitochondriální extrakci jsou prováděny kvalitativní i kvantitativní analýzy. Proteinové markery s vysokým obsahem jsou identifikovány jako kandidátní molekuly pomocí kombinovaných dat z RNA-seq a LC/MS/MS. Tyto kandidátské značky podstoupí další testování validace.

Metody ： Po separaci ficoll bude periferní krev rozdělena do mononukleárních buněk, plazmy a červených krvinek. Další extrakce mitochondrií bude provedena z mononukleárních buněk i plazmy. Kvantitativní experimenty zahrnují hippocampální měření metabolické energie a hodnocení JC-1 mitochondriálního zdraví, zatímco počet kopií mitochondriální DNA bude vyhodnocen pomocí digitálního PCR. Kvalitativní experimentální analýza využívá západní blotování k posouzení markerů, jako je cytochrom C a Hsp60 pro mitochondrie a PCNA pro jaderné proteiny. Kandidátské experimenty s validací biomarkerů používají kombinovaná data z RNA-seq a LC/MS/MS k identifikaci proteinových markerů s vysokým konfigurací jako kandidáty, které jsou dále validovány pro proveditelnost pomocí metody ELISA.

Účinek:

1. Pochopte změny v mitochondriální kvalitě a množství během perimenopauzálního přechodu u žen.
2. Rozvíjet ukazatele monitorování pro přechod perimenopauzů u žen.