Biomarkkereiden kehittäminen vaihdevuosien seurantaan naisilla

Tausta ： Sukupuolten tasa -arvo ja oikeudenmukainen terveys on noussut kansainvälisiksi suuntauksiksi viime vuosina. Naisten terveyskysymysten olemassa olevista ratkaisuista huolimatta monet tarpeet ovat tyydyttämättömiä. Ennusteiden mukaan globaalin vaihdevuosin väestön odotetaan saavuttavan 1,2 miljardia vuoteen 2030 mennessä, mikä ylittää yleisimpien kroonisten sairauksien esiintyvyyden. Tällä hetkellä on olemassa ratkaisuja, jotka ovat olemassa tavallisissa vaihdevuosien oireissa, kuten kuumissa välähdyksissä, yöhikoilla, väsymyksellä, ärtyneisyydellä ja virtsainkontinenssilla. Ratkaisemattomat haasteet kattavat kuitenkin psykologiset muutokset ja seurantajärjestelmät. Siksi tämän hankkeen tavoitteena on kehittää biomarkkereita naisilla tulevaisuuden seurantajärjestelmänä.

Useimmat naiset tulevat vaihdevuodet 48–52 -vuotiaina. Tänä ajanjaksona munasarjojen follikkelit lopettavat aktiivisuuden, mikä johtaa yhden vuoden ajanjaksoon merkittävien kuukautisten väärinkäytösten esiintymisen jälkeen, joka tunnetaan vaihdevuosina tai perimenopausa (1). Kun munasarjojen toiminta vähenee vähitellen ja estrogeenin eritys vähenee, tapahtuu erilaisia ​​systeemisiä muutoksia, mikä johtaa useisiin vaihdevuosiin liittyviin tiloihin, kuten osteoporoosiin, sydän- ja verisuonisairauksiin ja virtsajärjestelmäongelmiin. Estrogeenin lasku laukaisee negatiivisen palautteen silmukan aiheuttaen follikkelia stimuloivan hormonin (FSH) erityksen lisääntymisen ja E2: n (17p-estradioli) tuotannon vähentymisen (2). Tällä hetkellä vaihdevuosien hormonihoito (MHT), joka käyttää estrogeenia, voi lievittää vaihdevuosien oireita ja palauttaa yleiset E2-tasot, mutta ei alenna FSH: ta premenopausaalisiin tasoihin (3-4). Tarkkaa biomarkkeria vaihdevuosien seurantaan ei kuitenkaan ole vielä perustettu. Estrogeenin puutteessa mitokondrioiden morfologia ja toiminta voivat vaarantua, kun taas estrogeenin läsnäolo liittyy vähentyneisiin oksidatiivisiin reaktioihin, parantuneisiin hengitystoimiin ja stabiiliin kalvon ominaisuuksiin (5). Projektin tavoitteena on tarjota kattava näkemys metabolomian kautta mitokondrioiden biomarkkereiden tunnistamiseksi, joita voidaan käyttää vaihdevuosien seurantaan.

Tutkimuksen suunnittelu ： Tämä tutkimus on poikkileikkaustutkimus. Yhteensä 100 naista sisällytetään ja ryhmitetään kolmeen luokkaan: 25 lisääntymisajan tapausta, 50 perimenopausaalisen siirtymäkauden tapausta ja 25 postmenopausaalisen ajanjakson tapausta. Perifeerinen veri kerätään. Mitokondrioiden uuttamisen jälkeen suoritetaan sekä laadulliset että kvantitatiiviset analyysit. Korkean luokan proteiinimarkkerit tunnistetaan ehdokasmolekyyleiksi käyttämällä RNA-Seq: n ja LC/MS/MS: n yhdistettyä tietoa. Nämä ehdokasmarkkerit suoritetaan lisävalidointitestaus.

Menetelmät ： Ficoll -erotuksen jälkeen perifeerinen veri jaetaan mononukleaarisiin soluihin, plasmaan ja punasoluihin. Mitokondrioiden uuttaminen suoritetaan sekä mononukleaarisista soluista että plasmasta. Kvantitatiivisiin kokeisiin sisältyy metabolisen energian hippokampuksen mittaukset ja mitokondrioiden terveyden JC-1-arviointi, kun taas mitokondrioiden DNA-kopioluku arvioidaan digitaalisella PCR: llä. Laadullista kokeellista analyysiä käytetään Western -blottausta arvioidakseen markkereita, kuten sytokromi C ja HSP60 mitokondrioille ja PCNA: lle ydinproteiineille. Ehdokkaan biomarkkerien validointikokeissa käytetään RNA-Seq: n ja LC/MS/MS: n yhdistettyä tietoa tunnistaakseen korkean luokan proteiinimarkkerit ehdokkaiksi, jotka edelleen validoidaan toteutettavuuden saavuttamiseksi ELISA-menetelmän avulla.

Vaikutus:

1. Ymmärrä mitokondrioiden laadun ja määrän muutokset naisten perimenopausaalisen muutoksen aikana.
2. Kehitä seurantaindikaattoreita naisten perimenopausaaliseen siirtymiseen.