Udvikling af biomarkører til overvågning af overgangsalderen hos kvinder

Baggrund ： Ligestilling mellem kønnene og et retfærdigt helbred er fremkommet som internationale tendenser i de senere år. På trods af eksisterende løsninger til kvinders sundhedsspørgsmål forbliver mange behov uopfyldte. Ifølge fremskrivninger forventes den globale menopausale befolkning at nå 1,2 milliarder i 2030 og overgå forekomsten af ​​de mest almindelige kroniske sygdomme. I øjeblikket findes der opløsninger til almindelige menopausale symptomer såsom hetetokter, nattesved, træthed, irritabilitet og urininkontinens. Imidlertid omfatter uopløste udfordringer psykologiske ændringer og overvågningssystemer. Derfor sigter dette projekt at udvikle biomarkører til overgangsalderen hos kvinder som et fremtidig overvågningssystem.

De fleste kvinder går ind i overgangsalderen i alderen 48 og 52 år. I denne periode ophører æggestokkens follikler aktivitet, hvilket førte til etårsperioden efter udseendet af betydelige menstruations uregelmæssigheder, kendt som menopausal overgang eller perimenopause (1). Når ovariefunktionen gradvist falder, og østrogensekretionen mindskes, forekommer forskellige systemiske ændringer, hvilket resulterer i adskillige overgangsalderelaterede tilstande, såsom osteoporose, hjerte-kar-sygdomme og urinsystemproblemer. Faldet i østrogen udløser en negativ feedback-loop, hvilket forårsager en stigning i follikelstimulerende hormon (FSH) sekretion og en reduktion i E2 (17p-østradiol) produktion (2). I øjeblikket kan menopausal hormonbehandling (MHT) ved anvendelse af østrogen lindre menopausale symptomer og gendanne de samlede E2-niveauer, men sænker ikke FSH til premenopausale niveauer (3-4). Imidlertid er der endnu ikke etableret en præcis biomarkør til overvågning af overgangsalderen. Under østrogenmangel kan mitokondrial morfologi og funktion kompromitteres, mens østrogen -tilstedeværelse vedrører reducerede oxidative reaktioner, forbedret respiratorisk funktion og stabile membranegenskaber (5). Dette projekt sigter mod at give et omfattende overblik gennem metabolomics for at identificere biomarkører inden for mitokondrier, der kan bruges til overgangsalderovervågning.

Undersøgelsesdesign ： Denne undersøgelse er en tværsnitsundersøgelse. I alt 100 kvinder vil blive inkluderet og grupperet i tre kategorier: 25 tilfælde af reproduktionsperiode, 50 tilfælde af perimenopausal overgangsperiode og 25 tilfælde af postmenopausal periode. Det perifere blod opsamles. Efter mitokondrial ekstraktion udføres både kvalitative og kvantitative analyser. Proteinmarkører med høj tillid identificeres som kandidatmolekyler ved hjælp af kombinerede data fra RNA-seq og LC/MS/MS. Disse kandidatmarkører vil gennemgå yderligere valideringstest.

Metoder ： Efter Ficoll -adskillelse vil perifert blod blive opdelt i mononukleære celler, plasma og røde blodlegemer. Yderligere ekstraktion af mitokondrier vil blive udført fra både mononukleære celler og plasma. Kvantitative eksperimenter involverer hippocampale målinger af metabolisk energi og JC-1-vurdering af mitokondrisk sundhed, mens mitokondrisk DNA-kopikummer vil blive evalueret ved hjælp af digital PCR. Kvalitativ eksperimentel analyse anvender Western blotting til at vurdere markører såsom cytochrome C og HSP60 for mitokondrier og PCNA til nukleare proteiner. Kandidatbiomarkørvalideringseksperimenter bruger kombinerede data fra RNA-seq og LC/MS/MS til at identificere proteinmarkører med høj tillid som kandidater, som yderligere valideres til gennemførlighed ved hjælp af ELISA-metoden.

Effekt:

1. Forstå ændringerne i mitokondrisk kvalitet og mængde under den perimenopausale overgang hos kvinder.
2. Udvikle overvågningsindikatorer for den perimenopausale overgang hos kvinder.