Ikke-invasiv prænatal diagnose af trisomi 21 ved genetisk analyse af cirkulerende føtale celler (ISETTRI21)

Efterforskerne har planlagt og udviklet følgende tilgang: Fosterceller beriges først fra blod fra gravide kvinder, mellem 7 og 12 ugers svangerskab, ved at anvende ISET-teknikken (isolering efter størrelse af epiteltumorceller). Celler, der formodes at være af føtal oprindelse, mikrodissekeres og analyseres efterfølgende genetisk ved hjælp af STR-markører for at verificere deres føtale natur. Efterforskerne planlægger derefter at teste to strategier for at vurdere antallet af kopier af kromosom 21. Den første involverer DNA'et fra en enkelt føtal celle, der skal analyseres med CGH-array (komparativ genomisk hybridisering). Faktisk har vores team allerede udviklet en applikation af metafase CGH-metoden til enkeltceller isoleret af ISET, hvor vi var i stand til at demonstrere forstærkningen af ​​kromosom 21 DNA i enkelte føtale celler isoleret fra navlestrengsblod fra et foster med Downs syndrom. Den anden strategi vil blive opnået ved brug af kvantitativ fluorescerende PCR-analyse af korte tandemgentagelser (STR'er), anvendt på enkeltceller. Mindst 5-8 meget polymorfe STR-markører, der er specifikke for kromosom 21, vil blive testet for at minimere virkningerne af et fænomen kaldet allel drop-out, hvor en allel ikke formår at forstærke, og for at maksimere antallet af trialleliske signaler til en nøjagtig diagnose af disomi eller trisomi 21.

Denne undersøgelse er udført i samarbejde med afdelingen for gynækologi-obstetrik - reproduktionsmedicin på Antoine Béclère Hospital i Clamart. De kvinder, der er inkluderet i undersøgelsen, vil blive taget en 20 ml blodprøve og en cervikal Pap-smear før den invasive test (amniocentese). Blodprøven vil blive behandlet med ISET-metoden inden for 3 timer efter opsamling, og filteret vil blive opbevaret ved -20°C. Cellerne opnået ved Pap-smear vil blive opbevaret i en passende væske og derefter behandlet med ISET-metoden i Biochemistry Laboratory of Necker Hospital. De molekylære analyser rettet mod de trofoblastiske celler for NI-PND af Trisomi 21 vil blive udført i et blindt studie.

Initiativtagerne har planlagt at bruge ISET-metoden i et blindt studie, der omfatter 100 tilfælde af trisomi 21 og 300 kontroltilfælde med normal caryotype. Denne undersøgelse vil gøre det muligt at opnå resultater med en sensitivitet højere end 97 % og specificitet højere end 99 % (IC 95 % [70-100]). Valideringen vil blive opnået ved åbning af det blinde studie og sammenligning af resultater opnået ved den invasive metode (amniocentese) og den ikke-invasive metode.