Undersøgelse af produkt fra undfangelse afledt af ultralydsstyret manuel vakuumaspiration

Tidligt graviditetstab er meget almindeligt, cirka hver fjerde kvinde vil opleve en abort i deres liv [1]. Ætiologien af ​​graviditetstab er stort set ukendt, selvom genetiske, anatomiske, endokrinologiske og immunologiske abnormiteter er blevet impliceret [2].

Det er kendt, at embryonale/føtale kromosomafvigelser bidrog til ca. 50% af det tidlige graviditetstab, hvoriblandt 60-70% var aneuploidier, stort set kan påvises af den nuværende guldstandard karyotyping-tilgang anbefalet af forskellige internationale samfund. Ulemperne ved konventionel karyotyping omfatter imidlertid risikoen for dyrkningssvigt, modercellekontamination (MCC), begrænset detektionsopløsning (5-10 Mb) og differentiel vækst af specifikke cellelinjer, som kunne hindre diagnosticering af genetiske abnormiteter, især mosaicismer. Yderligere genetiske faktorer ud over opløsningen af ​​karyotyping er ikke godt undersøgt.

Næste generations sekventering (NGS) har bragt genetisk testning til nye grænser, hvilket udvider omfanget af påviselige genomiske varianter. Desuden har dets betydelige reduktion i omkostninger gennem årene lettet implementeringen af ​​genetisk diagnostisk testning. Vores tilpassede analyse-pipeline til lav-pas-genomsekventering, nemlig lavpasgenomsekventering (GS), muliggør effektiv og omkostningseffektiv påvisning af genomomfattende kopinummervarianter (CNV'er, >50 kb) og kromosomale mosaicismer på lavt niveau ( så lavt som 10 %). Desuden var rollerne for kryptiske strukturelle omlejringer, fravær af heterozygositet (AOH) og enkeltnukleotidvariant (SNV) mindre forstået i nuværende undersøgelser.

Forskellige versioner af sekventeringsplatforme rettet mod forskellige varianter var allerede etableret og valideret i Prenatal Genetic Diagnostic Laboratory, The Chinese University of Hong Kong, herunder FetalSeq, ChromoSeq og 30xWGS.

Humant endometrie- og decidualvæv, der indeholder et utal af immun- og inflammatoriske populationer [3-4], er immunologisk dynamiske. I den tidlige proliferative fase af menstruationscyklussen er T-celler den hyppigst forekommende leukocytpopulation i endometriet, men de falder til 20 % af alle stromale leukocytter under tidlig graviditet [5]. Makrofager er også til stede i endometrievæv under alle faser af menstruationscyklussen, men er mest udbredt i sen sekretorisk endometrium og i decidualvæv under tidlig graviditet [6]. Den hyppigst forekommende population (70%) af stromale leukocytter observeret i det sene sekretoriske endometrium og i decidua under tidlig normal graviditet er store granulære lymfocytter (LGL), der bærer den unikke fænotype: CD56++, CD16-, CD57-, CD2±, CD38±, CD3-, CD4-, CD8- [7-10]. Øget gennemsnitligt antal CD56+-celler er blevet rapporteret i sekretorisk endometrium hos kvinder med tilbagevendende aborter [11].

Hypotesen om, at balancen mellem T-celle undergrupper (dvs. CD4+ og CD8+ celler) spiller en rolle i at opretholde en vellykket graviditet er kontroversiel. Nogle undersøgelser har ikke rapporteret nogen forskel mellem andelene af T-celle undergrupper i enten sekretorisk endometrium eller decidua fra første trimester fra kvinder med en historie med tilbagevendende graviditetstab sammenlignet med normale kontroller; mens andre har beskrevet et skift i retning af et højere forhold af CD8+ T-celler i endometriebiopsier fra kvinder med en historie med tilbagevendende graviditetstab [12-15].

Aktiveringsstatus for T-cellepopulationer kan give en anden indikator for cellulær immunitet, der potentielt er involveret i graviditetstab. IL-2-receptoren er blevet rapporteret at være fraværende på T-celler i normalt decidualvæv i første trimester ved anvendelse af immunhistokemiske teknikker [16]; ved hjælp af flowcytometri er CD3+CD25+-aktiverede T-celler imidlertid blevet identificeret i decidualvæv [17]. CD69 er en anden tidlig aktiveringsmarkør udtrykt på overfladen af ​​T-celler [18]. En del af T-cellerne udtrykker konstitutivt denne markør gennem hele menstruationscyklussen og i normal tidlig graviditet.

Cirka 60% af spontane aborter kan tilskrives numerisk abnorme kromosomer i den udviklende konceptus [19], men begrænsede data til dato, der adresserer immunologiske fænomener i decidua hos aborterede kvinder, har sammenlignet deres data i forhold til veldefinerede kromosomale abnormiteter, der tilhører koncepter. Dette er vigtigt, da kromosomabnormaliteten trisomi 16, som forekommer i 26 % af alle spontane aborter, er uforenelig med livet [20] og dermed ville være en ubestridt årsag til spontan abort. Derfor var formålet med vores undersøgelse at bestemme, om deciduelle leukocytsubpopulationer og deres associerede aktiveringsmarkører var forskellige mellem kvinder, der havde abort af enten en trisomi 16-konceptus (47XY+16 eller 47XX+16) sammenlignet med en kromosomalt normal mandlig konceptus (46XY) og sammenlignet med svangerskabsmæssigt aldersmatchede decidualvæv. Prøver fra formodentlig normale kvindelige koncepter (46XX) blev ikke udvalgt til undersøgelse på grund af manglende evne til nøjagtigt at differentiere fra mulig modercellekontamination.

Til håndtering af abort eller afbrydelse af graviditet (TOP) i første trimestertab er ultralydsstyret manuel vakuumaspiration (USG-MVA) en af ​​behandlingsmulighederne. USG-MVA til behandling af tidligt graviditetstab har været brugt i mange årtier. Det var blevet rapporteret, at USG-MVA er sikrere, mere omkostningseffektivt og er forbundet med kortere indlæggelsestid og omkostninger end kirurgisk evakuering under generel anæstesi [21, 22]. USG-MVA er en kirurgisk teknik til sugekurettage. Det udføres ved at bruge en håndholdt vakuumkilde (en sprøjte med cylinder og stempel) fastgjort til en livmoderkanyle [23, 24] USG-MVA-anordningen virker ved at aspirere livmoderindholdet via kanylen ind i sprøjten. Endvidere kan undfangelsesprodukt afledt af USG-MVA sendes til karyotypingsanalyse.