Undersøgelse af sammenhængen mellem donor CIRBP og transplanteret nyrefunktion

Studiet var et retrospektivt åbent kohortestudie, der omfattede afdøde patienter fra januar 2016 til december 2019. Det overholdt retningslinjerne for det nationale program for afdøde organdonationer i Kina og involverede succesfulde nyredonorer fra det tredje tilknyttede hospital ved Sun Yat-sen University. Donorer blev udelukket, hvis de opfyldte en af ​​følgende betingelser: (a) manglede en blodprøve; (b) havde kontaminerede blodprøver, der påvirkede CIRBP-niveauer; (c) var modtagere, der gennemgik kombinerede multiorgantransplantationer; (d) deltog i andre kliniske forsøg; (e) havde en historie med organtransplantation; (f) havde andre forhold anset for uegnede til tilmelding af investigator. Blodprøver blev indsamlet fra donorer af Organ Procurement Organisations (OPO'er) og brugt til forskellige undersøgelser med donorernes samtykke. Alle modtagere (207 modtagere, 207 donorer) blev fulgt op på lang sigt efter transplantation.

Efterforskerne fulgte principperne i Helsinki-erklæringen (20) og Istanbul-erklæringen. Godkendelse til denne undersøgelse blev opnået fra Human Organ Transplantation and Ethics Committee ved Sun Yat-sen University. Den etiske komité blev dannet i overensstemmelse med Verdenssundhedsorganisationens operationelle retningslinjer for etisk komitégennemgang af biomedicinsk forskning. Organallokering blev udført på en retfærdig og gennemsigtig måde via det kinesiske organtransplantationsresponssystem. Donationstypen blev frivilligt bestemt af donorens familie, og modtageren blev fulgt op efter transplantationen. Både donorens familie og modtageren gav samtykke til brug af prøver og kliniske data i forskning.

Donordata blev indhentet fra China Organ Transplant Response System, udfyldt af medlemmer af organtransplantationsorganisationer. Derudover blev nogle donoroplysninger suppleret fra kliniske elektroniske journaler. Modtagerdata blev afledt fra kliniske elektroniske optegnelser alene. Efterforskere kategoriserede donorer og modtagere i grupper med forsinket graftfunktion (DGF) og øjeblikkelig graftfunktion (IGF) baseret på modtagerens tidlige nyrefunktionsstatus. DGF blev defineret som et fald i daglig plasmakreatinin på mindre end 10 % fra den foregående dag i 3 på hinanden følgende dage inden for 1 uge postoperativt, eller hvis serumkreatinin (SCr) ikke faldt til 400 μmol/L inden for 1 uge efter operationen. Modtagere, der ikke udviklede DGF, blev kategoriseret som IGF. Primær ikke-funktion (PNF) blev diagnosticeret hos patienter, der krævede kontinuerlig dialyse efter operation eller retransplantation. Derudover blev donorer med brugte kriterier defineret som dem i alderen over 60 år eller mellem 50 og 59 år, der opfylder mindst to af følgende kriterier: endelig serumkreatinin > 133 μmol/L, cerebrovaskulær ulykke som dødsårsag og en historie med hypertension.

Prøvetagning Fuldblodsprøver blev taget fra donoren i operationsstuen før organudtagning og transporteret på knust is til laboratoriet med en gennemsnitlig transitvarighed på 2 timer. Til serumforberedelse blev fuldblodsprøverne efterladt ved stuetemperatur i 2 timer, derefter centrifugeret ved 1000 g i 15 minutter ved en temperatur på 2-8°C. Den resulterende supernatant blev opsamlet og opbevaret ved -80°C i laboratoriet. Før testning blev serumprøverne optøet på knust is og centrifugeret igen ved 1000 g i 15 minutter ved 2-8°C.

Måling af koldt inducerbart RNA-bindende proteinniveau serum CIRBP blev påvist under anvendelse af et ELISA-kit (CSB-EL005440HU). Proteinstandarden blev fortyndet i overensstemmelse med instruktionerne, og 100 µl forskellige koncentrationer af standard og prøver (1:10 fortynding) blev tilsat til en 96-brønds plade i duplikat. Pladen blev inkuberet ved 37°C i 2 timer i mørke. Efter inkubation blev væsken i brøndene kasseret, og 100 µl biotin-mærket antistof-arbejdsopløsning blev tilsat til hver brønd. Efter inkubation ved 37°C i 1 time blev pladen vasket tre gange med vaskeopløsning. Efterfølgende blev 100 µl peberrodsperoxidase-mærket affinitetsopløsning tilsat til hver brønd. Efter yderligere 1 times inkubation ved 37°C blev pladen vasket fem gange. Derefter blev 90 µl substratopløsning tilsat til hver brønd, og efter en 15-minutters farveudvikling ved 37°C blev 50 µl termineringsopløsning brugt til at standse reaktionen. Absorbansen blev målt ved 450 nm inden for 5 minutter under anvendelse af en mikropladelæser, og koncentrationerne blev beregnet på basis af standardkurven.