Effekt af forskellige sædbehandlingsmetoder i ICSI-resultater.

PureSperm-gradienter 40 % og 80 % blev brugt til eksperimentet. Alle procedurer blev udført under sterile betingelser. Ved anvendelse af en steril pipette blev 2,0 ml af det "nedre lag" (80 % PureSperm-gradient) overført til et konisk centrifugerør.

Ved hjælp af en ny steril pipette blev 2,0 ml af det "øvre lag" (40 % PureSperm-gradient) forsigtigt dispenseret oven på det nederste lag. En flydende sædprøve blev derefter anbragt oven på det øvre lag, og røret blev centrifugeret i 20 minutter ved 300 g. De øvre og nedre lag blev omhyggeligt aspireret uden at forstyrre pelleten. Ved anvendelse af en overførselspipette blev 2-3 ml Ham's F10 +10% HAS tilsat til pelleten, og den resuspenderede pellet blev centrifugeret i 7 minutter ved 300 g. Supernatanten blev derefter fjernet, og pelleten blev suspenderet i et volumen på 0,5 ml Ham's F10 + FCS 10%. Alikvoter af den frigjorte sperm blev behandlet som tidligere arm

sædprøver blev fortyndet 5 millioner i 1 ml. For at inducere en positiv ladning blev røret anbragt inde i en latexhandske op til hætten og greb om hætten, røret blev drejet to eller tre omgange og hurtigt trukket ud. Hvert rør blev holdt ved stuetemperatur i 1 minut for at tillade adhærering af den ladede sperm til væggen af ​​centrifugerøret.

Rørene blev holdt ved hætten for at undgå jordforbindelse af røret. Efter 1 minut blev rørene centrifugeret ved 200 g i 5 minutter. Derefter blev mediet og pelleten kasseret for at kassere ikke-vedhæftende sædceller og andre celler. Overfladen af ​​røret blev vasket med 0,2 ml Ham's F10+ FCS 10% for at neutralisere ladningen på rørets væg og frigøre den vedhæftede sæd.

Det opsamlede medium i bunden af ​​hvert rør blev gentaget og brugt til at skylle væggen af ​​det samme rør flere gange for at øge antallet af genvundne sædceller. Alikvoter af den frigjorte sperm blev behandlet som tidligere arm