Auswirkung verschiedener Spermienverarbeitungsmethoden auf das ICSI-Ergebnis.
Auswirkung verschiedener Spermienverarbeitungsmethoden ( Swim up, Zeta, Spermiengradientenzentrifugation ) im ICSI-Ergebnis. "Eine Spermien-DNA-Perspektive"
Studienübersicht
Status
Bedingungen
Intervention / Behandlung
Detaillierte Beschreibung
Studientyp
Einschreibung (Tatsächlich)
Phase
- Phase 2
- Phase 3
Kontakte und Standorte
Studienorte
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Qalubiya
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Banha, Qalubiya, Ägypten, 13512
- Ahmed Saad
-
-
Teilnahmekriterien
Zulassungskriterien
Studienberechtigtes Alter
Akzeptiert gesunde Freiwillige
Studienberechtigte Geschlechter
Beschreibung
Einschlusskriterien:
- ungeklärte unfruchtbare Paare für 2 Jahre
- Alter von 20 Jahren bis 37 Jahren
Ausschlusskriterien:
- Fälle von Endometriose
- Uterusfaktoren
Studienplan
Wie ist die Studie aufgebaut?
Designdetails
- Hauptzweck: Grundlegende Wissenschaft
- Zuteilung: Zufällig
- Interventionsmodell: Parallele Zuordnung
- Maskierung: Verdreifachen
Waffen und Interventionen
Teilnehmergruppe / Arm |
Intervention / Behandlung |
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Aktiver Komparator: Schwimmmethode
Messen Sie das Volumen mit einer sterilen 2-ml-Pipette. Überführen Sie die Probe aus einem Plastikbecher in ein steriles konisches 15-ml-Zentrifugenröhrchen.
Mischen Sie die Probe vorsichtig mit der gleichen Menge Sperm Washing Media.
Zentrifugieren Sie die Röhrchen 10 Minuten lang bei 1500 U/min. Saugen Sie den Überstand vorsichtig ab, ohne das Pellet zu stören, und resuspendieren Sie das Pellet in 50 mcm frischem Waschmedium, geben Sie dann eine Schicht von 0,5 ml Waschmedium vorsichtig auf die Oberfläche.
Inkubieren Sie die Röhrchen in einem 45°-Winkel für 1 Stunde zum Aufschwimmen in einem vertikalen Gestell in einem 37°C-Inkubator.
Nach der Inkubationszeit den gesamten Überstand aus dem Rundbodenröhrchen absaugen.
Aliquots der abgelösten Spermien wurden durch Halosperm-Assay auf DNA-Fragmentierung analysiert, andere Aliquots des gleichen Überstands wurden für ICSI verwendet, dann wurden Befruchtung, Teilung, Blastulation, Schwangerschaft und Implantationsraten tabelliert und statistisch getestet.
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verschiedene Verfahren zur Spermienverarbeitung zur Auswahl der geeignetsten Spermien für ICSI
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Aktiver Komparator: Gradientenzentrifugation von Spermien
Für das Experiment wurden die PureSperm-Gradienten 40 % und 80 % verwendet. Alle Verfahren wurden unter sterilen Bedingungen durchgeführt. Unter Verwendung einer sterilen Pipette wurden 2,0 ml der "unteren Schicht" (80 % PureSperm-Gradient) in ein konisches Zentrifugenröhrchen überführt. Unter Verwendung einer neuen sterilen Pipette wurden 2,0 ml der "oberen Schicht" (40 % PureSperm-Gradient) vorsichtig auf die untere Schicht verteilt. Eine verflüssigte Samenprobe wurde dann oben auf die obere Schicht gegeben und das Röhrchen wurde 20 Minuten lang bei 300 g zentrifugiert. Die oberen und unteren Schichten wurden sorgfältig abgesaugt, ohne das Pellet zu stören. Unter Verwendung einer Transferpipette wurden 2-3 ml Ham's F10 + 10 % HAS zu dem Pellet gegeben und das resuspendierte Pellet wurde 7 Minuten lang bei 300 g zentrifugiert. Der Überstand wurde dann entfernt und das Pellet wurde in einem Volumen von 0,5 ml Ham's F10 + FCS 10% suspendiert. Aliquots der abgetrennten Spermien wurden wie im vorherigen Arm behandelt |
verschiedene Verfahren zur Spermienverarbeitung zur Auswahl der geeignetsten Spermien für ICSI
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Aktiver Komparator: Zeta-Methode
Spermaproben wurden 5 Millionen in 1 ml verdünnt. Um eine positive Ladung zu induzieren, wurde das Röhrchen bis zur Kappe in einen Latexhandschuh gesteckt und die Kappe ergriffen, das Röhrchen um zwei oder drei Umdrehungen gedreht und schnell herausgezogen. Jedes Röhrchen wurde 1 Minute bei Raumtemperatur gehalten, um ein Anhaften des geladenen Spermas an der Wand des Zentrifugenröhrchens zu ermöglichen. Die Röhren wurden an der Kappe gehalten, um eine Erdung der Röhre zu vermeiden. Nach 1 Minute wurden die Röhrchen bei 200 g für 5 Minuten zentrifugiert. Dann wurden das Medium und das Pellet verworfen, um nicht anhaftende Spermien und andere Zellen zu verwerfen. Die Oberfläche des Röhrchens wurde mit 0,2 ml Ham's F10+ FCS 10% gewaschen, um die Ladung an der Wand des Röhrchens zu neutralisieren und die anhaftenden Spermien abzulösen. Das gesammelte Medium am Boden jedes Röhrchens wurde erneut pipettiert und verwendet, um die Wand des gleichen Röhrchens mehrere Male zu spülen, um die Anzahl der gewonnenen Spermien zu erhöhen. Aliquots der abgetrennten Spermien wurden wie im vorherigen Arm behandelt |
verschiedene Verfahren zur Spermienverarbeitung zur Auswahl der geeignetsten Spermien für ICSI
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Was misst die Studie?
Primäre Ergebnismessungen
Ergebnis Maßnahme |
Maßnahmenbeschreibung |
Zeitfenster |
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Spermien-DNA-Fragmentierung
Zeitfenster: 30 Minuten
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Messung der Spermienintegrität durch Halosperm-Assay
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30 Minuten
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Sekundäre Ergebnismessungen
Ergebnis Maßnahme |
Maßnahmenbeschreibung |
Zeitfenster |
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Befruchtungsrate der Oozyten
Zeitfenster: Tag 1
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NEIN. befruchteter Eizellen /Gesamtnr. von Eizellen
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Tag 1
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Blasrate
Zeitfenster: Tag 5
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Anzahl blastulierter Embryonen / Gesamtzahl von Embryonen
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Tag 5
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Schwangerschaftsrate
Zeitfenster: 15 Tage
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Anzahl schwangerer Fälle\ alle nein. von Fällen
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15 Tage
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Mitarbeiter und Ermittler
Sponsor
Mitarbeiter
Studienaufzeichnungsdaten
Haupttermine studieren
Studienbeginn (Tatsächlich)
Primärer Abschluss (Tatsächlich)
Studienabschluss (Tatsächlich)
Studienanmeldedaten
Zuerst eingereicht
Zuerst eingereicht, das die QC-Kriterien erfüllt hat
Zuerst gepostet (Tatsächlich)
Studienaufzeichnungsaktualisierungen
Letztes Update gepostet (Tatsächlich)
Letztes eingereichtes Update, das die QC-Kriterien erfüllt
Zuletzt verifiziert
Mehr Informationen
Begriffe im Zusammenhang mit dieser Studie
Andere Studien-ID-Nummern
- Hawaa-4
Plan für individuelle Teilnehmerdaten (IPD)
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Arzneimittel- und Geräteinformationen, Studienunterlagen
Studiert ein von der US-amerikanischen FDA reguliertes Arzneimittelprodukt
Studiert ein von der US-amerikanischen FDA reguliertes Geräteprodukt
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