Proteomisches Muster bei weiblicher Stressharninkontinenz: eine Pilotstudie
Ziel: Das Hauptziel der Studie ist der Vergleich der Proteinkonzentrationen zwischen Patienten mit Stressharninkontinenz (SUI) und gesunden Kontrollpersonen.
Ziel: Diese Pilotstudie zielt darauf ab, ein möglicherweise verändertes Proteinprofil bei Frauen mit SUI im Vergleich zu gesunden Frauen zu ermitteln und somit einen potenziellen Proteinbiomarker für SUI zu identifizieren.
Hauptergebnismaß: massenspektrometrische Messung des proteomischen Urinsekretoms bei erkrankten und gesunden Probanden (Sequenzabdeckung und Anzahl der identifizierten Proteine)
Studiendesign: Prospektive Fall-Kontroll-Studie
Rahmen: Universitätsklinik für Gynäkologie und Geburtshilfe der Medizinischen Universität Wien in Kooperation mit den Core Facilities Proteomics der Medizinischen Universität Wien
Population: Zwanzig weibliche Patienten mit SUI und zwanzig gesunde Patienten, die die Ambulanz der Abteilung für Geburtshilfe und Gynäkologie der Medizinischen Universität Wien aufsuchen (Stichprobengrößenberechnung FDR 0,05, Potenz von 80 %, angenommener Anteil an echtem H0 0,95, angenommener standardisierter Effekt Größe von 1)
Methoden: Durchzuführende Untersuchungen: Anamnese, provokativer Stresstest, ICIQ-Kurzfragebogen, Restharnvolumen (Ultraschall) und Urinanalyse (Messstabtest). Dem Patienten wird nach spontaner Miktion eine Urinprobe entnommen, der sofort Proteasehemmer zugesetzt wird. Für routinemäßige Laboruntersuchungen und weitere Untersuchungen werden zwei Fläschchen mit Serumblut (jeweils 9 ml) aus einer peripheren Vene des Patienten entnommen.
Die Proteomikanalyse wird mittels chromatographischer Trennung (LC) mit massenspektrometrischer Detektion (MS) durchgeführt.
Studienübersicht
Status
Status
Bedingungen
Bedingungen
Intervention / Behandlung
Intervention / Behandlung
Detaillierte Beschreibung
Methoden:
Die Probenvorbereitung und -analyse umfasst:
- Probenentnahme und sofortige Zugabe eines Protease-Inhibitor-Cocktails (Roche, Complete Protease Inhibitor Cocktail).
- Urinzentrifugation und -filtration zur Entfernung von Zelltrümmern.
- Proteinfällung durch Methanol/Chloroform-Trennung zur Entfernung aller möglichen nicht-proteinischen Substanzen.
- Proteinverdauung unter Verwendung von Trypsin, Pepsin und Glu-C in Lösung.
Peptidtrennung mittels Nano-HPLC und verschiedenen chromatographischen Ansätzen.
- Umkehrphasentrennung (RP) von Peptiden und MS-Detektion
- Trennung von Peptiden mittels HILIC (hydrophile Interaktionsflüssigkeitschromatographie) zur Unterscheidung polarer Peptide.
- Zusätzlich zu RP und HILIC, die direkt an MS gekoppelt sind, werden verdaute Peptide mithilfe multidimensionaler Ansätze getrennt. Schwache Anionenaustauschersäulen, die unter HILIC-Bedingungen betrieben werden, werden zur Trennung von Peptiden verwendet, die posttranslationale Modifikationen wie Phosphorylierung oder Acetylierung tragen, wodurch der dynamische Detektionsbereich erhöht wird. Während dieser Trennung werden Fraktionen gesammelt und mit MS-Detektion erneut auf RP und HILIC injiziert.
- Alle Nano-HPLC-Trennungen werden mit einem biokompatiblen Trennsystem durchgeführt.
Die massenspektrometrische Analyse verdauter Peptide wird mit zwei verschiedenen Nachweismethoden durchgeführt: Ionenfalle und Flugzeit-MS (qToF). Die massenspektrometrische Detektion und Analyse mit qToF wird auch für die markierungsfreie Quantifizierung von in Proben nachgewiesenen Peptiden und Proteinen verwendet. Alle Messungen werden in dreifacher Ausfertigung durchgeführt, um Korrekturen für die technische Variabilität der Trennung und Ionisierung bereitzustellen.
Die allgemeine Datenbanksuche wird unter Verwendung der Human SwissProt-Datenbank in der zum Zeitpunkt der Analyse aktuellen Version durchgeführt. Die Datensuche wird mit Mascot (http://www.matrixscience.com/) durchgeführt. und X!Tandem (http://www.thegpm.org/tandem/) Suchmaschinen und die endgültige Datenzuordnung und -filterung mithilfe von Scaffold (www.proteomsoftware.com).
Statistische Analyse:
Die Datenanalyse wird mit dem Bioleiterpaket Limma durchgeführt. Vor der Datenanalyse werden die Daten gefiltert, indem Proteine mit Messungen mit geringem Interquartilbereich ausgeschlossen werden. Die Gruppen werden anhand moderierter gepaarter T-Statistiken unter Berücksichtigung des Alters verglichen. Die Anpassung für mehrere Tests erfolgt durch die Benjamini-Hochberg-Korrektur, die den FDR auf 0,05 steuert.
Studientyp
Studientyp
Einschreibung (Tatsächlich)
Einschreibung
Kontakte und Standorte
Studienorte
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Vienna, Österreich, 1090
- Medical University of Vienna, Department of Obstetrics and Gynaecology
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-
Teilnahmekriterien
Zulassungskriterien
Zulassungskriterien
Studienberechtigtes Alter
Akzeptiert gesunde Freiwillige
Probenahmeverfahren
Studienpopulation
Beschreibung
Einschlusskriterien:
- Patienten mit Belastungsinkontinenz: Symptome einer Belastungsinkontinenz in der Anamnese seit mindestens 3 Monaten (einschließlich anamnestischer Beschwerden über unwillkürlichen Harnverlust bei Anstrengung oder Anstrengung oder beim Niesen oder Husten) und ein positiver provokativer Belastungstest (definiert als beobachteter transurethraler Verlust von Urin, der gleichzeitig mit einem Husten oder einem Valsalva-Manöver bei einem Blasenvolumen von 300 ml oder weniger erfolgte)
- Patienten, die zu selbständigem Arbeiten fähig sind
- Patienten, die in der Lage sind, alle Studienabläufe vollständig zu verstehen und eine schriftliche Einverständniserklärung zur Studienteilnahme abzugeben
- Alter ≥ 18
- Patienten nach vaginaler Entbindung
Ausschlusskriterien:
- Patienten, die zuvor wegen SUI behandelt wurden (sowohl chirurgische als auch pharmakologische Behandlung)
- Patienten, bei denen in der Krankengeschichte eine unkontrollierte überaktive Blase (OAB) oder andere Harninkontinenz als SUI aufgetreten ist (einschließlich anamnestischer Beschwerden über unfreiwilligen Harnverlust, begleitet von oder unmittelbar vorangegangenem Harndrang, nicht stressbedingt)
- Patienten mit gut etablierter neurologischer Störung (z. B. Multiple Sklerose, Parkinson-Krankheit, Alzheimer-Krankheit)
- Patienten mit Beckenorganprolaps Stadium ≥ II (ICS-Klassifikation)
- Patienten mit einer klinisch signifikanten Obstruktion des Blasenauslasses und/oder Patienten mit einem Restvolumen nach der Blasenentleerung (PVR) > 100 ml
- Patienten mit einer Vorgeschichte von akutem Harnverhalt oder wiederholten Katheterisierungen aufgrund eines akuten Harnverhalts in der Vorgeschichte innerhalb der letzten 3 Monate vor dem Tag der Einwilligung nach Aufklärung
- Patienten mit einem Dauerkatheter und Patienten, die eine intermittierende Selbstkatheterisierung durchführen
- Patienten, die sich weniger als 30 Tage vor dem Tag der Einwilligung nach Aufklärung einer Blasenbiopsie oder einem anderen geringfügigen chirurgischen Eingriff im Becken unterzogen haben
- Patienten mit Blasenkrebs in der Vorgeschichte
- Patienten mit akuter oder wiederkehrender Harnwegsinfektion und/oder ungeklärter Hämaturie
- Patienten mit Steinen in der Blase oder Harnröhre und einer Steinerkrankung im oberen Harntrakt, die Symptome verursacht
- Patienten mit Anzeichen einer Niereninsuffizienz (Kreatinin > 1,5-fache Obergrenze des Normalwerts)
- Patienten mit Anzeichen einer Lebererkrankung (Gesamtbilirubin >1,5x Obergrenze des Normalwerts oder AST oder ALT oder alkalische Phosphatase >2x Obergrenze des Normalwertes)
- Patienten mit Alkohol- und/oder anderem Drogenmissbrauch in der Vorgeschichte
- Patienten, die nicht in der Lage und/oder unwahrscheinlich sind, die Studienabläufe und -anweisungen zu verstehen und zu befolgen
- Patienten, die schwanger sind oder stillen
- Patienten mit schwerwiegenden Erkrankungen, die nach Meinung der Forscher nicht an dieser Studie teilnehmen sollten
Die Kontrollgruppe besteht aus Patienten mit denselben Einschluss- und Ausschlusskriterien wie die Fallgruppe, mit Ausnahme der Belastungsharninkontinenz.
Studienplan
Wie ist die Studie aufgebaut?
Designdetails
Anzahl der Gruppen / Kohorten
Kohorten und Interventionen
Gruppe / KohorteGruppe / Kohorte |
Intervention / BehandlungIntervention / Behandlung |
|---|---|
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Belastungsinkontinenz
Patienten mit Belastungsharninkontinenz gemäß den Einschluss- und Ausschlusskriterien
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gesunde Kontrollen
gesunde Frauen mit den gleichen Einschluss- und Ausschlusskriterien wie die Fallgruppe, mit Ausnahme von Belastungsharninkontinenz
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Was misst die Studie?
Primäre Ergebnismessungen
Primäre Ergebnismessungen
Ergebnis Maßnahme |
Maßnahmenbeschreibung |
Zeitfenster |
|---|---|---|
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Massenspektrometrische Messung des proteomischen Urinsekretoms bei erkrankten und gesunden Probanden (Sequenzabdeckung und Anzahl der identifizierten Proteine)
Zeitfenster: Das primäre Ergebnismaß wird für jeden Teilnehmer innerhalb eines Zeitraums von 4 bis 7 Tagen nach der Rekrutierung bewertet
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Vergleich der Proteinkonzentrationen basierend auf der Anzahl der identifizierten Proteine und der massenspektrometrischen Spektralzählung für Patienten mit Stressharninkontinenz und gesunde Kontrollpersonen.
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Das primäre Ergebnismaß wird für jeden Teilnehmer innerhalb eines Zeitraums von 4 bis 7 Tagen nach der Rekrutierung bewertet
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Mitarbeiter und Ermittler
Sponsor
Sponsor
Ermittler
Ermittler
- Hauptermittler: Heinz Kölbl, Univ.-Prof.Dr.Dr.h.c., Medical University of Vienna, Department of Obstetrics and Gynaecology
Publikationen und hilfreiche Links
Allgemeine Veröffentlichungen
- Petricoin EF, Ardekani AM, Hitt BA, Levine PJ, Fusaro VA, Steinberg SM, Mills GB, Simone C, Fishman DA, Kohn EC, Liotta LA. Use of proteomic patterns in serum to identify ovarian cancer. Lancet. 2002 Feb 16;359(9306):572-7. doi: 10.1016/S0140-6736(02)07746-2.
- Chen B, Wen Y, Zhang Z, Guo Y, Warrington JA, Polan ML. Microarray analysis of differentially expressed genes in vaginal tissues from women with stress urinary incontinence compared with asymptomatic women. Hum Reprod. 2006 Jan;21(1):22-9. doi: 10.1093/humrep/dei276. Epub 2005 Aug 26.
- Mushkat Y, Bukovsky I, Langer R. Female urinary stress incontinence--does it have familial prevalence? Am J Obstet Gynecol. 1996 Feb;174(2):617-9. doi: 10.1016/s0002-9378(96)70437-4.
- Elia G, Bergman J, Dye TD. Familial incidence of urinary incontinence. Am J Obstet Gynecol. 2002 Jul;187(1):53-5. doi: 10.1067/mob.2002.124842.
- Hu S, Loo JA, Wong DT. Human body fluid proteome analysis. Proteomics. 2006 Dec;6(23):6326-53. doi: 10.1002/pmic.200600284.
- Ho L, Sharma N, Blackman L, Festa E, Reddy G, Pasinetti GM. From proteomics to biomarker discovery in Alzheimer's disease. Brain Res Brain Res Rev. 2005 Apr;48(2):360-9. doi: 10.1016/j.brainresrev.2004.12.025.
- Semmes OJ, Feng Z, Adam BL, Banez LL, Bigbee WL, Campos D, Cazares LH, Chan DW, Grizzle WE, Izbicka E, Kagan J, Malik G, McLerran D, Moul JW, Partin A, Prasanna P, Rosenzweig J, Sokoll LJ, Srivastava S, Srivastava S, Thompson I, Welsh MJ, White N, Winget M, Yasui Y, Zhang Z, Zhu L. Evaluation of serum protein profiling by surface-enhanced laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry for the detection of prostate cancer: I. Assessment of platform reproducibility. Clin Chem. 2005 Jan;51(1):102-12. doi: 10.1373/clinchem.2004.038950.
Studienaufzeichnungsdaten
Haupttermine studieren
Studienbeginn
Studienbeginn
Primärer Abschluss (Tatsächlich)
Primärer Abschluss
Studienabschluss (Tatsächlich)
Studienabschluss
Studienanmeldedaten
Zuerst eingereicht
Zuerst eingereicht
Zuerst eingereicht, das die QC-Kriterien erfüllt hat
Zuerst eingereicht, das die QC-Kriterien erfüllt hat
Zuerst gepostet (Geschätzt)
Zuerst gepostet
Studienaufzeichnungsaktualisierungen
Letztes Update gepostet (Tatsächlich)
Letztes Update gepostet
Letztes eingereichtes Update, das die QC-Kriterien erfüllt
Letztes eingereichtes Update, das die QC-Kriterien erfüllt
Zuletzt verifiziert
Zuletzt verifiziert
Mehr Informationen
Begriffe im Zusammenhang mit dieser Studie
Schlüsselwörter
Zusätzliche relevante MeSH-Bedingungen
- Verhaltenssymptome
- Psychische Störungen
- Urologische Erkrankungen
- Symptome der unteren Harnwege
- Urologische Manifestationen
- Störungen beim Wasserlassen
- Ausscheidungsstörungen
- Weibliche Urogenitalerkrankungen
- Weibliche Urogenitalerkrankungen und Schwangerschaftskomplikationen
- Urogenitale Erkrankungen
- Männliche Urogenitalerkrankungen
- Harninkontinenz
- Enuresis
- Harninkontinenz, Stress
Andere Studien-ID-Nummern
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- EK 1788/2013
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