Augenoberflächenerkrankung bei Patienten mit chronischer Graft-versus-Host-Krankheit (GVHD).

Das Trockene Auge ist eine multifaktorielle Erkrankung, die in der ophthalmologischen Praxis häufig anzutreffen ist. Häufige Symptome des Trockenen Auges sind Augenreizungen, Schweregefühl der Augenlider, verschwommenes Sehen und Lichtempfindlichkeit (1). Die weltweite Prävalenz des Trockenen Auges ist allgemein hoch (2-4). In Asien können in China (5) und Japan (3) bis zu 22 % der Erwachsenen über 40 Jahre vom Trockenen Auge betroffen sein. Bei asiatischen Patienten, die älter als 65 Jahre sind, kann die Prävalenzrate des trockenen Auges bis zu 80 % betragen, wenn die Diagnose auf einer abnormalen Tränenstabilität basiert, oder bis zu 60 % auf einer Meibom-Drüsen-Dysfunktion (MGD), einer Hauptursache für Träneninstabilität ( 6).

Die meisten Patienten mit trockenem Auge können erfolgreich mit Gleitmitteln, Punctal Okklusion, Steroid- und/oder Cyclosporin-Augentropfen behandelt werden. Bei einigen Patienten mit schwerem trockenem Auge und wahrscheinlich zugrunde liegenden Erkrankungen, z. B. der Graft-versus-Host-Krankheit (GVHD), die herkömmliche Behandlungen erschöpft haben, kann es jedoch zu 10-20 Fällen pro Jahr kommen, die schwer zu behandeln sind. Diesen Szenarien stehen diese Patienten und ihre Ärzte hilflos gegenüber.

Die Transplantation hämatopoetischer Stammzellen (SCT) hat sich als potenzielle kurative Therapie für hämatologische Malignome etabliert (9). Die Zahl der SCT-Empfänger ist in den letzten 2 Jahrzehnten weltweit exponentiell gestiegen. GVHD ist die Hauptursache für Morbidität und Mortalität bei Patienten, die sich einer allogenen SCT unterziehen (10).

Trockenes Auge im Zusammenhang mit chronischer GVHD ist eine der wichtigsten Spätkomplikationen nach allogener SZT; sie hat einen erheblichen Einfluss auf die Lebensqualität der Patienten (11-13) und kann zur Erblindung führen (14). Der immunologische Prozess des Trockenen Auges im Zusammenhang mit chronischer GVHD bleibt weitgehend unbekannt, es wird jedoch angenommen, dass es sich um eine traditionelle Alloreaktivität gegenüber Empfängergeweben handelt.

Die Forscher schlagen vor, mit dem Singapore General Hospital, Abteilung für Hämatologie, zusammenzuarbeiten, um sich auf die klinischen Merkmale und das immunologische Profil der Entzündung der Augenoberfläche bei schwereren chronischen GVHD-Patienten zu konzentrieren. Der Schweregrad des Trockenen Auges ist bei SNEC-Patienten mit chronischer GVHD schwerer als bei idiopathischen Fällen des Trockenen Auges. Dies kann auf eine verzerrte Überweisung zurückzuführen sein oder mit der systemischen Erkrankung zusammenhängen. Daher beabsichtigen die Forscher, eine Pilotstudie durchzuführen, um einige okulare Merkmale von nicht überwiesenen Hämatologiepatienten mit GVHD zu definieren. Die Ermittler schlagen vor, 30 geeignete Teilnehmer mit chronischer GVHD zu screenen und zu rekrutieren. Die durchzuführenden Tests umfassen die okulare Bildgebung (Oculus K5M), das okulare immunologische Profil (Bindehaut-Immunzellen) und die Entzündung der Augenoberfläche (MMP-9-Tränenmarker).

1 HYPOTHESE UND ZIELE

Diese Studie zielt daher darauf ab, die Augenoberflächenentzündung von Patienten mit chronischer GvHD zu profilieren, indem sie Bindehautzellen und klinische Bildgebung auf Bindehautrötung und Tränenstabilität untersucht. Daher erwarten die Forscher, dass sie in GVHD-Bindehautproben eine Zunahme der Population von Entzündungszellen finden werden.

Spezifische Ziele:

1. Bestimmung des immunologischen Profils der Augen (konjunktivale Immunzellen) von Patienten mit GVHD und Korrelation mit dem systemischen Status (Behandlung).
2. Um festzustellen, ob objektive Messungen der Tränenfunktionsstörung/Entzündung der Augenoberfläche bei GVHD-Patienten anormal sind und mit dem systemischen Status korrelieren.

Ergebnisse:

• Symptome des trockenen Auges (SPEED-Fragebogen)
• Tränenproduktion
• Profil der konjunktivalen Immunzellen (Anteil von T-Lymphozyten und anderen Immunzellen)
• Klinische Parameter für die Augenoberfläche (Bindehautrötung, nicht-invasive Tränenaufreißzeit, Hornhaut-Fluorescein-Färbung)

Langfristige Ziele:

1. Festlegung von Kriterien für das Screening von cGVH-Patienten zur Überweisung an Augenspezialisten.
2. Bestimmung der Längsschnittergebnisse von cGVH-Fällen des trockenen Auges und der Auswirkungen einer systemischen prophylaktischen Behandlung sowie anderer Augenbehandlungen wie Plasmapherese-Augentropfen.

1.1.1 Potenzielle Risiken Die Prüfärzte gehen davon aus, dass diese Studie nur minimale Risiken und Unannehmlichkeiten mit sich bringt.

• Es ist möglich, dass während der Entnahme von Bindehautzellen mit der Abdruckmembran ein leichtes Unbehagen auftritt
• Einige leichte Beschwerden durch Tränenstreifen-Meniskometrie
• Die Teilnehmer können eine leichte Reizung verspüren, wenn das InflammaDry-Testkit verabreicht wird, da es erforderlich ist, ein weiches Pad aus absorbierendem Material auf das untere Lid des Teilnehmers zu legen, um Tränen zu sammeln.
• Stechendes Gefühl als Folge einer Lokalanästhesie (Alcain)

1.1.2 Mögliche Vorteile Mit einem besseren Verständnis des Vorhandenseins verschiedener Entzündungsmediatoren können die Forscher weitere Einblicke in den komplexen Prozess gewinnen, der bei chronischen GVHD-Patienten stattfindet.

2 STUDIENPOPULATION 3.1 Liste der Anzahl und Art der einzuschreibenden Fächer. Dreißig geeignete GVHD-Patienten werden vom Transplantationszentrum in Block 7, Ebene 1, Singapore General Hospital – Department of Haematology, untersucht und rekrutiert.

3.2 Kriterien für die Rekrutierung und Rekrutierungsprozess

1. Die Probanden erfüllen alle Einschlusskriterien
2. Frei von Ausschlusskriterien.

Die Erlaubnis würde von den behandelnden Ärzten der SGH, Abteilung für Hämatologie, eingeholt, bevor Probanden rekrutiert werden. Berechtigte Probanden werden über die Studie beraten. Bei Interesse wird eine informierte schriftliche Zustimmung aller Teilnehmer eingeholt. Danach wird der SERI-Forschungsoptiker mit der Augenuntersuchung im SGH-Transplantationszentrum fortfahren.

4 STUDIENDESIGN

4.1.1 Studienverfahren

Die Prüfungen werden von Mitgliedern des Studienteams des SBFI durchgeführt. Die Liste der erforderlichen Prüfungen wird angezeigt:

1. Symptome des trockenen Auges (SPEED-Fragebogen)
2. Nicht-invasive Tränenaufbruchzeit (NIKBUT) – Oculus K5M
3. Bindehautrötung – Oculus K5M
4. Tränenstreifen-Meniskometrie (SMTube), Schirmers-Test
5. Träne MMP-9-Ergebnis (Inflammadry)
6. Impression Cytology- unter Verwendung von EyePrim Bindehautmembranen
7. Hornhaut-Fluorescein-Färbung – Oculus K5M

Details der Verfahren

1. Fragebogen zum trockenen Auge Die Teilnehmer werden gebeten, den Fragebogen zum trockenen Auge zu bewerten, um die symptomatische Schwere des trockenen Auges und das Ausmaß seiner Beeinträchtigung der täglichen Aktivitäten in den letzten zwei Wochen zu beurteilen.

   • GESCHWINDIGKEIT-Fragebogen Besteht aus 2 Fragen zur Häufigkeit und zum Schweregrad, die auf einer Skala von 0-3 für die Häufigkeit und 0-4 für den Schweregrad eingestuft werden. Der Fragebogen ermöglicht es dem Patienten, die Häufigkeit von 0 (niemals) bis 3 (immer) und 0 als kein Problem und 4 als unerträglich in der Schwere zu bewerten.

2. Non-invasive Tear Break-Up Time (NIBUT) Der Oculus Keratographer 5M (Oculus, Wetzlar, Deutschland) wird verwendet, um die nicht-invasive Tear Break-Up Time durchzuführen. Der Patient sitzt bequem vor dem Instrument und blinzelt frei, während er ein Ziel direkt vor sich fixiert. Sobald der Patient bereit ist, wird er angewiesen, zweimal zu blinzeln und nicht zu blinzeln. Der Keratograph 5M ist vollautomatisch und erfasst jede Unterbrechung oder Verzerrung im Bild, und der Zeitpunkt der Unterbrechung wird notiert. Für jedes Auge werden drei Messungen durchgeführt, um den Durchschnittswert zu erhalten. Es ist möglich, dass der Tränenfilm der Teilnehmer stabiler ist, d. h. eine längere Tränenaufrisszeit.
3. Bildgebung von Bindehautrötungen mit Oculus Keratography 5M
4. Tear-Strip-Meniskometrie (SMTube) SMTube aus dem sterilen Beutel nehmen. Halten Sie die Mitte von SMTube. Berühren Sie nicht den Färbebereich. Tauchen Sie die Spitze des SMTube 5 Sekunden lang in den seitlichen Unterlid-Tränenmeniskus eines Auges ein. Treffen Sie besondere Vorsichtsmaßnahmen, um zu verhindern, dass die Spitze die Bindehaut des Patienten berührt. Entfernen Sie nach 5 Sekunden den SMTube vom Tränenmeniskus des Unterlids. Messen Sie die Länge der blau gefärbten Säule.
5. Tränen-MMP-9-Ergebnis (Inflammadry) Der InflammaDry-Test wird durchgeführt, nachdem die Tränenmeniskomie durchgeführt wurde, da er die MMP-9-Spiegel (ein Entzündungsmarker) in Tränen bewertet und daher nicht durch Reflexrisse beeinflusst wird (15). Das Vlies des Teststreifens wird an mehreren Stellen entlang der Innenhaut des unteren Augenlids getupft, der Patient wird aufgefordert zu blinzeln, und der Streifen wird dann für weitere 5 Sekunden entlang der unteren Nasenlidbindehaut ruhen gelassen. Montieren Sie das Probenvlies in das Probenübertragungsfenster des Testkassettenkörpers. Danach wird die absorbierende Spitze für 20 Sekunden in die Pufferlösung eingetaucht. Entfernen Sie die absorbierende Spitze vom Pufferfläschchen, setzen Sie die Schutzkappe wieder auf und legen Sie den Test 10 Minuten lang flach auf eine horizontale Oberfläche. Eine einzelne blaue Linie zeigt ein negatives Ergebnis an, während das Erscheinen von 2 Linien (rot und blau) ein positives Ergebnis anzeigt.

6. Abdruckzytologie (unter Verwendung von EyePrim-Membranen)

   i) Vorbereitung der RPMI-Lösung Bereiten Sie in einer sterilen Biosicherheitshaube 2 Fläschchen mit 2-ml-Eppendorf-Röhrchen vor. Jeweils ein Röhrchen für das rechte Auge und das linke Auge. Füllen Sie die 2 Röhrchen mit 1,5 ml RPMI-Lösung. Danach Überführung der Röhrchen in Eisboxen mit Eis und Überführung in das Transplantationszentrum am SGH, wo der Abdruck gemacht wird.

   ii) Anästhesie Schritt 1: Informieren Sie den Teilnehmer, dass er/sie möglicherweise ein vorübergehendes Stechen verspürt. Aufforderung an den Teilnehmer, den Blick nach oben zu richten. Drücken Sie das untere Augenlid herunter und geben Sie einen Tropfen LA in den unteren Lidspalt. Tun Sie dies für beide Augen. Fordern Sie den Patienten auf, mindestens dreimal sanft zu blinzeln. Schritt 2: Sobald das Stechen nachlässt, bitten Sie den Teilnehmer, seinen Blick nach unten zu richten. Heben Sie das obere Augenlid des Patienten an und geben Sie einen Tropfen LA auf die bulbäre Bindehaut an der höchstmöglichen Stelle. Tun Sie dies für beide Augen. Fordern Sie den Patienten auf, mindestens dreimal sanft zu blinzeln. Schritt 3: Wiederholen Sie Schritt 2 noch einmal. Der Teilnehmer sollte zu diesem Zeitpunkt kein Brennen im Auge spüren.

   iii) Bindehautentnahme Schritt 1: Fordern Sie den Teilnehmer auf, seinen Blick in die infero-temporale Richtung zu richten. Dadurch wird die obere nasale bulbäre Bindehaut für den Abdruck freigelegt. Schritt 2: Tragen Sie die EyePRIM-Membran auf den Bereich auf. Schritt 3: Stellen Sie sicher, dass die Membran gut an der Bindehaut anliegt. Bewegen Sie dazu die EyePRIM-Membran nach links und rechts. Schritt 4: Entfernen Sie die Membran mit einer Peeling-ähnlichen Bewegung von der Bindehaut. Schritt 5: Üben Sie eine größere Kraft auf den EyePRIM-Federmechanismus aus. Nach einem „Klick“-Geräusch wird die Membran aus dem Gadget ausgeworfen. Legen Sie die Membran aus dem rechten Auge in das "rechte" Eppendorf-Röhrchen. Schritt 6: Wiederholen Sie dies für die obere temporale bulbäre Bindehaut, dieses Mal richten Sie den Blick des Teilnehmers infero-nasal. Legen Sie diese Membran in das "richtige" Eppendorf-Röhrchen. In diesem Eppendorf-Röhrchen sollten sich 2 Membranen befinden. Schritt 7: Legen Sie dieses Röhrchen in die Eisbox. Schritt 8: Wiederholen Sie die Schritte 1-7 für das andere Auge, aber legen Sie die Membranen in das "linke" Eppendorf-Röhrchen. Schritt 9: An diesem Punkt sollten sowohl „rechte“ als auch „linke“ Eppendorf-Röhrchen mit jeweils 2 darin befindlichen Membranen in 1,5 ml RPMI-Medium eingetaucht sein. Legen Sie sie in die Eisbox.

   iv) Ablösen von Zellen von Membranen Kratzen Sie die Zellen mit einer 10-ul-Mikropipettenspitze von der Membran. Achten Sie darauf, die richtige Seite der Membran zu kratzen (dies kann anhand der Richtung der Haken der Membran erfolgen). Dies geschieht am einfachsten, indem man die Membran gegen die Wand des Fläschchenröhrchens drückt und sie mit einer schleifenden Bewegung abkratzt (die Wand des Fläschchenröhrchens ist der Mörser und die Mikropipettenspitze ist wie ein Stößel). Wiederholen Sie dies für die andere Membran im selben Fläschchenröhrchen. Wiederholen Sie die gleichen Schritte auch für das andere Auge. Sobald das Abkratzen der Zellen abgeschlossen ist, legen Sie die 2 Eppendorf-Röhrchen auf das Eis und übergeben Sie sie am selben Tag an Aihua oder Tanima (Academia Level 12) zur FACs-Analyse.

7. Hornhaut-Fluorescein-Färbungs-Score