Die Wirkung von 0,1% topischem Ciclosporin A für 12 Wochen auf die Augenoberfläche Immunzellen in trockenen Augen

Das Immunsystem spielt eine entscheidende Rolle bei der Pathogenese der Trockenaugenerkrankung (DED). Ein erhöhtes Spiegel mehrerer Tränenzytokine, Chemokine, Expression von HLA -DR -Molekülen und Aktivierung von Antigen -präsentierenden Zellen - dendritischen Zellen (DCs) und Lymphozyten spielen eine zentrale Rolle bei der Ded -Pathogenese. Die erhöhten Ausdrücke von CD4+ - und CD8+ T -Zellen in der Augenoberfläche von DED -Patienten deuten auf eine mögliche Rolle der adaptiven Immunität bei der DED -Chronizität hin. Das Vorhandensein von Antigen-präsentierenden Zellen in der Augenoberfläche und die Hochregulation von MHC II, IL-2, IL-17, IL-6 und IFN- & ggr; und anderen co-stimulatorischen Molekülen bei den Rissen von DED-Patienten deuten auf eine mögliche Aktivierung der lokalen adaptiven Immunantwort hin.

Die Bindehaut dient als primäre Stelle für die immunologische und histochemische Analyse bei Augenoberflächenerkrankungen. Forscher haben verschiedene Techniken angewendet, um die Immunologie der Augenoberfläche wie die Impression-Zytologie, die Konjunktivalbiopsie und durch Echtzeit-Polymerasekettenreaktion, Immunzytochemie und Lichtmikroskopie zu untersuchen. Durchflusszytometrie ist eine leistungsstarke Technik, die die phänotypische Analyse von Zellen durch Immunmarkierung extrazellulärer Expressionen verschiedener Immunzellmarker ermöglicht. Ein erhöhter Ausdrücke von Aktivierungsmarkern wie HLA-DR und verschiedenen Immunzellpopulationen, einschließlich T-Zellen (CD3+, CD4+und CD8+), B-Zellen, natürlichen Killerzellen und Monozyten (CD14+-Zellen), werden in DED unter Verwendung von Durchflusszytometrie auf den Zusammenimativ-Zytologie-Samples der Fließzytometrie beobachtet.

In der Vergangenheit erforderten die Untersuchung der Immunzellen der menschlichen Augenoberfläche invasive Techniken. Mit dem Aufkommen der in vivo konfokalen Mikroskopie (IVCM) hat eine nicht-invasive Visualisierung von Augenoberflächenepithel-Immunzellen (EICs) und Hornhautnerven in Echtzeit ermöglicht. In den letzten 20 Jahren haben Forscher IVCM verwendet, um pathologische Veränderungen bei verschiedenen Augenoberflächenerkrankungen zu untersuchen. Aus mehreren IVCM -Studien geht hervor, dass Hornhaut -EICs Veränderungen wie die Zunahme der Dichte und Veränderungen seiner Morphologie in allen Formen von DED unterzogen werden. Das konventionelle statische IVCM erfasst Abschnittsbilder zu einem Zeitpunkt der Hornhaut -EICs, und ihre Analyse beschränkt sich auf ihre Dichte und Morphologie. Während die In -vivo -Natur von IVCM eine direkte Immunzellphänotypisierung verhindert, wird angenommen, dass die beobachteten Zellen vorwiegend auf ihren morphologischen Eigenschaften DCs sind. Daher haben die Autoren den Begriff EICs verwendet, um die Dichte der Immunzellen (EIC-Dichte) mit statischen IVCM zu definieren. Im Gegensatz zu dieser Methode, die die Identifizierung des Immunzelltyps begrenzt, ermöglicht eine kürzlich pionierische, neuartige Technik, die als funktionaler IVCM (Fun-IVCM) bezeichnet wird, die Identifizierung der Immunzelltypen in der Hornhaut, indem sie ihre Morphodynamik beobachten. Diese Methode beinhaltet die Aufnahme aufeinanderfolgender Sequenz- und Volumen-Scan-Bilder über einen Zeitraum von 30 bis 40 Minuten mit Intervallen von 4 bis 5 Minuten. Die Bilder werden dann zeitlich verabreicht, um dynamisches Verhalten jeder Immunzelle zu identifizieren. Basierend auf ihrem dynamischen Verhalten und ihrer Morphologie können Zellen entweder in epitheliale T -Zellen (stark bewegliche, kleinere Körpergröße) oder dendritischen Zellen (DCs, weniger Motile, größere Körpergröße mit Dendriten) differenziert werden. Anterior Hornhautstromalmakrophagen können ebenfalls identifiziert werden. Zeitgelöste Bilder ermöglichen die Untersuchung zusätzlicher Zellmotilitätsparameter, wie z. B. sofortige Geschwindigkeit und Verschiebungsgeschwindigkeit.

Die Erstbehandlung für DED sind künstliche Tränen. Aufgrund der chronischen Natur der Krankheit und der wiederkehrenden akuten Exazerbationen wurde jedoch weitgehend umgesetzt. Infolgedessen zielen viele der aktuellen therapeutischen Ansätze auf verschiedene Entzündungswege, um den Teufelskreis von DED zu brechen. Sowohl topische Kortikosteroide als auch Immunsuppressiva reduzieren die Entzündung effektiv in DED. Topische Kortikosteroide werden in DED verwendet, um die akuten Entzündungsentzündungen der Augenoberfläche zu kontrollieren, aber ihre längerfristige Verwendung wird durch ihre iatrogenen Augen-Nebenwirkungen begrenzt. Im Gegensatz dazu haben immunsuppressive Mittel wie Ciclosporin A (CSA) eine potenzielle entzündungshemmende Wirkung mit minimalen lokalen Nebenwirkungen. Die Verwendung von CSA bei chronischem DED kann die Augenfärbung, Rötung, Entzündungsmarker und die Symptome der trockenen Augen erheblich verringern. Kurz gesagt, CSA dämpft die T -Zell -Proliferation durch Hemmung des Phosphatase Calcineurin. CSA funktioniert bei verschiedenen Schritten der Immunantwort während der Antigenpräsentation und der DC-T-Zell-Wechselwirkung. In angeborene Immunzellen werden jetzt als potenziell wichtige Ziele von CSA angesehen und können gleichzeitiges Ziel von dendritischen Zellen, Makrophagen und Neutrophilen widerspiegeln. In den vorläufigen Beweisen der Augenoberfläche legen Beweise nahe, dass CSA Aktivierungsmarker wie HLA-DR, CD11C, bestimmte Apoptose-Marker und konjunktivale T-Lymphozyten signifikant reduzieren kann, und die klinischen Verbesserung der CSA-behandelten DED-Patienten begleiteten.

Während eine Handvoll klinischer Studien die Wirksamkeit von CSA bei der Reduzierung von Entzündungen und zur Verbesserung der Symptome von DED gezeigt hat, wurde der direkte Effekt von CSA auf die Immunzellen der Augenoberfläche nicht ausführlich unter Verwendung von statischen und unter Verwendung von Fun-IVCM untersucht. Angesichts der Wirkung von CSA auf angeborene und adaptive Immunzellen hypothet die Autoren, dass die Verwendung von 0,1% CSA eine hemmende Wirkung auf die Immunantwort der Augenoberfläche sowie die Verbesserung der Anzeichen und Symptome von DED im Vergleich zu seinem Fahrzeug hat. In diesem Artikel wird das randomisierte Protokoll für klinische Studien hervorgehoben, um die Wirkung von CSA auf das angeborene und adaptive Immunsystem in DED umfassend zu untersuchen. Die Studie wird den Einfluss von CSA auf DCs (CD11c+ DCs, HLA-DR), T-Helferzellpopulationen (CD4+ T) durch Analyse von Lymphozytenmarkern (CD45, CD3, CD4) und deren assoziierte Zytokine (Th1-Pathway-Cytokine), insbesondere IF-2-IF-γ- und IF-γ-Actoul- und IF-γ-Actoul- und IF-γ-are-are-are-are-are-are-are-are-are-are-are-are-are-are-are-are-are-are-are-are-are-are-are-are-act-assoziiert, untersuchen.

1.2. Study aims and hypothesis Aim 1: To investigate and compare the effect of 12-weeks topical 0.1% CsA therapy on ocular surface innate and adaptive immune cells using imaging - Static-IVCM and Fun-IVCM (immune cell density, morphology and morphodynamic behaviours), immune cell phenotyping using conjunctival impression cytology and flow cytometry techniques and tear cytokine analysis (Multiplex-Kügelchen-Assay zur Bewertung der Tränenkonzentrationen von IL-2, IL-4, IL-6, IL-12, IL-17, IL-23, IFN- & ggr;) Hypothese: CSA hat eine inhibitorische Wirkung auf die angeborene und adaptive Immunzellendichte, Morphologie und Tränenzytokine in DED.

AIM 2: Bewertung des Zusammenhangs zwischen DED -Anzeichen, Symptomen und Eigenschaften von Immunzellen und Tränenzytokinen in der DED -Hypothese: Eine direkte Beziehung zwischen Immunzelleneigenschaften, Zeizzytokinen und DED -Anzeichen, Symptome.

AIM 3: Untersuchung der zeitlichen Beziehung zwischen Veränderungen im Immunzellen und der klinischen Verbesserungshypothese: Veränderungen der Immunzelleigenschaften (Dichte und Dynamik) und Entzündungsmarker gehen der klinischen Verbesserung der Anzeichen und Symptome der DED -DED -Behandlung nach CSA -Behandlung voraus.