ADAMTS-13 LEVEL ALS VORHERSAGENDER BIOMARKER FÜR DIE ENTWICKLUNG VON PORTALVENENTHROMBOSE BEI ​​LEBERZIRRHOSE (ADAPTHRO) (ADAPTHRO)

HINTERGRUND UND BEGRÜNDUNG Das Auftreten einer Pfortaderthrombose (PVT) verändert die Prognose von Zirrhosepatienten radikal, insbesondere von Patienten, die auf eine Lebertransplantation warten. Wenn dies passiert, tritt es bei etwa 8-10% / Jahr bei Patienten mit Zirrhose auf, die auf eine Lebertransplantation warten. Einige Studien haben die Beteiligung verschiedener Risikofaktoren für die Entwicklung von PVT bei Zirrhosepatienten vorgeschlagen, einschließlich der klassischen angeborenen und erworbenen thrombophilen Erkrankungen [1-6], obwohl Beiträge unserer Forschungsgruppe gezeigt haben, dass dies ein Schlüsselelement bei der Entwicklung von PVT ist bei diesen Patienten ist die verringerte Geschwindigkeit des portalen Blutflusses [7, 8]. Der mögliche Beitrag des von Willebrand-Faktors (VWF) und ADAMTS-13, produziert von den Lebersternzellen [9], zur Entstehung von PVT ist eher schlecht dokumentiert. In einer aktuellen Beobachtungsstudie des Befürworters [10], die an 84 Patienten mit Leberzirrhose durchgeführt wurde, wurde festgestellt, dass der Spiegel von zirkulierendem ADAMTS-13 in der Gruppe mit PVT signifikant niedriger ist (Median = 16,8 % vs. 69,1 %, p = 0,0047) und unabhängig mit dem Vorhandensein einer Pfortaderthrombose assoziiert (p = 0,007). Angesichts des nicht längsschnittlichen Charakters der Studie ist es jedoch möglich, dass der beobachtete verringerte ADAMTS-13-Spiegel die Folge und nicht die Ursache der PVT ist. Es muss auch noch die Assoziation des ADAMTS-13-Spiegels mit der spezifischen Ätiologie der Zirrhose (viral, alkoholisch, idiopathisch usw.) und der daraus resultierenden Entzündung im Verlauf der Krankheit untersucht werden.

Dauer der Studienperiode(n) und Teilnahme der Probanden Zweihundert (200) Patienten, die nacheinander über einen Zeitraum von etwa 6 Monaten aufgenommen wurden, werden ab der Aufnahme 18 Monate lang nachbeobachtet. Infolgedessen wird in den folgenden 18 Monaten mit etwa 20-25 PVT-Fällen gerechnet. Alle Patienten unterschreiben eine Einverständniserklärung. Der Schweregrad des Leberfunktionsversagens wird anhand des Child-Pugh-Scores [11] beurteilt.

Primärer Endpunkt Prospektive Beschreibung der Assoziation sowohl des basalen ADAMTS-13-Spiegels als auch des Pfortaderflusses mit der Entwicklung einer PVT bei Patienten mit Zirrhose während 18 Monaten nach der Aufnahme in die Studie. Sekundäre Endpunkte Prospektive Beschreibung der Veränderung des ADAMTS-13-Spiegels als Funktion der Ätiologie der Zirrhose, Gerinnung und biochemischer Parameter

Die prospektive Studie misst die folgenden biochemischen Parameter und Gerinnungsparameter bei jeder Nachuntersuchung, die im Abstand von 4 Monaten gemäß Routinekontrollen geplant ist:

Gerinnungs- und Thrombophiliefaktoren Alle Blutproben werden morgens nüchtern entnommen. Die Bestimmungen von PT, APTT, Fibrinogen, Antithrombin, Protein C, Protein S, Lupus-Antikoagulans, FVIII (zweistufiger chromogener Assay) und D-Dimer werden auf einem automatischen Koagulometer (ACL Top 700, IL) durchgeführt. VWF-Antigen VWF:Aktivität wird in Plasmaproben durch Chemilumineszenz-Assays gemessen. Das VWF-Multimer (VWFm)-Muster wurde wie zuvor berichtet gemessen [10]. FV Leiden R506Q und Prothrombin G20210A Genotypisierung dieser Polymorphismen wurde unter Verwendung kommerzieller Kits basierend auf PCR-RT-basierten Verfahren (von EliTechGroup S.p.A., Torino, Italien) auf einem automatischen Instrument (Modell 7300, Applied Biosystem, Foster City, CA, USA) durchgeführt ).

Messung der ADAMTS-13-Aktivität. Die ADAMTS-13-Aktivität wurde in Zitratplasmaproben durch einen auf Fluoreszenzresonanzenergietransfer (FRET) basierenden Assay unter Verwendung eines VWF86-Aminosäurepeptidsubstrats gemessen, das in einem kommerziellen Kit von Instrumentation Laboratory (ADAMTS-13-Aktivität, Werfen Group, Mailand, Italien) enthalten war ) und einem Varian Eclipse-Spektrofluorometer, wie zuvor beschrieben [10, 13] und ausgedrückt als % des normalen Plasmas.

Klinische Chemie-Assays. Alle klinisch-chemischen Assays (Plasmaalbumin, Kreatinin, Alanin-Leucin-Amino-Transferase (ALT) und Gesamtbilirubin) werden im Rahmen der Routinediagnostik innerhalb von 24 Stunden nach klinischer Beobachtung im Zentrallabor der „A . Gemelli"-Krankenhaus, unter Verwendung von heparinisierten Plasmaproben und kommerziellen Reagenzien von Siemens.

Sekundäre Ziele. Die sekundären Ziele der Analyse der Werte von ADAMTS-13 und VWF als Funktion der Ätiologie der Zirrhose werden erst nach einer zertifizierten Diagnose der jeweiligen Ätiologie der Zirrhose weiter bewertet. Im Falle einer HCV-assoziierten Zirrhose wird auch der Genotyp von HCV analysiert.

Einverständniserklärung und Einschreibung Jeder Patient, der seine Einverständniserklärung abgibt (d. h. das Einverständniserklärungsformular und ggf. das Zustimmungsformular unterschreibt und datiert) und alle anderen Einschluss-/Ausschlusskriterien erfüllt, gilt als in die Studie aufgenommen.

Subjektidentifikationscode. Die folgende Zahlenreihe umfasst den Subjektidentifikationscode (SIC): Protokollakronym (ADAPTHRO) und zweistellige Subjektnummer (z. B. 01….02), die die Reihenfolge der Registrierung widerspiegelt (d. h. Unterzeichnung der Einwilligungserklärung). Beispielsweise wird die dritte Person, die eine Einwilligungserklärung unterschrieben hat, als ADAPTHRO-03 identifiziert. Alle Studiendokumente (z. B. CRFs, klinische Dokumentation usw.) werden mit dem SIC identifiziert.

Screening und Studienbesuche Das Studienzentrum ist für die Führung eines Registrierungs-/Screening-Protokolls verantwortlich, das alle eingeschriebenen Probanden enthält. Das Protokoll dient auch dazu, den Grund für das Scheitern der Überprüfung zu dokumentieren. Alle Screening-Daten werden gesammelt und in CRFs gemeldet, unabhängig vom Screening-Ergebnis.

Abschluss/Abbruch des Probanden Ein Proband gilt als mit der Studie abgeschlossen, wenn er/sie die aktive Teilnahme an der Studie beendet, weil der Proband die Studie gemäß dem Protokoll abgeschlossen hat oder vermutlich abgeschlossen hat, für die festgelegte Beobachtungszeit und wann teilgenommen hat das Studienabgangsformular ausgefüllt ist. Gründe für den Abschluss/Abbruch werden auf der CRF-Seite „Abschluss/Abbruch“ gemeldet, einschließlich: abgeschlossen, Bildschirmfehler, unerwünschtes Ereignis (z kontaktieren Sie den Probanden], Studienabbruch), Entscheidung des Arztes (z. B. Schwangerschaft, fortschreitende Erkrankung, Protokollverstoß(e)), Vitalfunktionen Vitalfunktionen beinhalten Größe (cm) und Gewicht (kg). Größe und Gewicht werden, falls verfügbar, beim Screening-Besuch, bei jedem Besuch im jährlichen Intervall und bei Abschluss/Beendigung der Studie erhoben.

STATISTISCHE ANALYSE. Geplante statistische Analyse Kontinuierliche Variablen werden als Mittelwerte ± Standardabweichungen ausgedrückt. Kategoriale Variablen werden als Häufigkeiten und Prozentsätze ausgedrückt. Fishers exakte Tests und/oder Chi-Quadrat-Tests werden hauptsächlich verwendet, um qualitative Variablen und den Student-t-Test für quantitative ungepaarte Daten zu vergleichen. Ein p-Wert < 0,05 wird im explorativen Sinne als statistisch signifikant angesehen. Neben der deskriptiven Statistik (Standortparameter) und der univariaten Analyse sind multivariate Analysen geplant. Unabhängige Variablen, die in der univariaten Analyse mit p < 0,05 mit PVT in Verbindung gebracht werden, werden in den nächsten 18 Monaten in der multivariablen logistischen Regressionsanalyse als unabhängige Kovariaten in Verbindung mit PVT verwendet. Als statistisch signifikant wurde ein zweiseitiges p < 0,05 definiert. Die Analysen werden unter Verwendung der SPSS-Software (Version 21, Chicago, IL, USA) und der GraphPad Prism-Software (GraphPad Software, Inc, La Jolla, CA, USA) durchgeführt.

Einverständniserklärung. Die Prüfärzte wählen die Patienten für die Aufnahme auf der Grundlage der Zulassungskriterien für die Studie aus. Der Prüfarzt übt keine Selektivität aus, damit aus dieser Quelle keine Voreingenommenheit entsteht. Alle Patienten müssen gemäß den geltenden behördlichen Anforderungen eine Einverständniserklärung unterschreiben, bevor sie an der Studie teilnehmen. Vor der Verwendung wird die Einwilligungserklärung von der EK überprüft. Mit der Unterzeichnung der Einverständniserklärung stimmen die Patienten der Teilnahme an der Studie zu.

Vertraulichkeitsrichtlinie Der Prüfarzt hält sich an die Vertraulichkeitsrichtlinie, wie sie in der Vereinbarung über nichtinterventionelle Studien beschrieben ist.

Studiendokumente und Fallberichtsformulare Der Prüfer bewahrt die vollständige und genaue Studiendokumentation in einer separaten Datei auf. Die Dokumentation kann medizinische Aufzeichnungen, Aufzeichnungen über den Fortschritt der Studie für jeden Probanden, unterzeichnete Einverständniserklärungen, Korrespondenz mit der EC, Registrierungs- und Screening-Informationen, CRFs und Laborberichte umfassen. Der Ermittler hält sich an die Verfahren zur Datenaufzeichnung und Berichterstattung.

Aufbewahrung von Dokumenten und Daten Der Prüfer bewahrt die Studiendokumentation und -daten gemäß den geltenden behördlichen Anforderungen und der Richtlinie zur Aufbewahrung von Dokumenten und Daten auf, wie in der Vereinbarung über nicht-interventionelle Studien beschrieben.