УРОВЕНЬ ADAMTS-13 КАК ПРОГНОЗИРУЮЩИЙ БИОМАРКЕР РАЗВИТИЯ ТРОМБОЗА ПОРТНОЙ ВЕНЫ ПРИ ЦИРРОЗЕ ПЕЧЕНИ (АДАПТРО) (ADAPTHRO)

ПРЕДПОСЫЛКИ И ОБОСНОВАНИЕ Возникновение тромбоза воротной вены (ТВВ) радикально меняет прогноз больных циррозом печени, особенно ожидающих трансплантацию печени. Если это и происходит, то примерно в 8-10% случаев в год у пациентов с циррозом печени, ожидающих трансплантацию печени. Некоторые исследования предполагают участие различных факторов риска развития ТВВ у пациентов с циррозом печени, включая классические врожденные и приобретенные тромбофилические состояния [1-6], хотя вклад нашей исследовательской группы показал, что ключевой элемент в развитии ТВВ у этих больных — снижение скорости портального кровотока [7, 8]. Возможный вклад фактора фон Виллебранда (VWF) и ADAMTS-13, продуцируемых звездчатыми клетками печени [9], в развитие ТВВ документирован довольно слабо. В недавнем обсервационном исследовании сторонника [10], проведенном на 84 больных циррозом печени, было установлено, что уровень циркулирующего ADAMTS-13 значительно ниже в группе с ТВВ (медиана = 16,8% против 69,1%, р = 0,0047) и независимо связаны с наличием портального тромбоза (р = 0,007). Однако, учитывая непродольный характер исследования, возможно, что наблюдаемое снижение уровня ADAMTS-13 является следствием, а не причиной ТВВ. Также еще предстоит исследовать связь уровня ADAMTS-13 с конкретной этиологией цирроза печени (вирусной, алкогольной, идиопатической и др.) и возникающим воспалением в течении заболевания.

Продолжительность периода (периодов) исследования и участие субъектов Двести (200) пациентов, последовательно включенных в исследование в течение примерно 6 месяцев, будут находиться под наблюдением в течение 18 месяцев с момента включения. В результате в последующие 18 месяцев ожидается около 20-25 случаев ТВВ. Все пациенты подписывают информированное согласие. Тяжесть функциональной недостаточности печени оценивают по шкале Чайлд-Пью [11].

Первичная конечная точка Проспективно описать связь как базального уровня ADAMTS-13, так и кровотока в воротной вене с развитием ТВВ у пациентов с циррозом печени в течение 18 месяцев после включения. Вторичные конечные точки Проспективно описать изменение уровня ADAMTS-13 в зависимости от этиологии цирроза Коагуляционные и биохимические параметры

В проспективном исследовании будут измеряться следующие биохимические параметры и параметры коагуляции при каждом последующем посещении, запланированном с интервалом в 4 месяца в соответствии с обычным контролем:

Факторы коагуляции и тромбофилии Все образцы крови будут взяты утром натощак. Определение ПВ, АЧТВ, фибриногена, антитромбина, протеина С, протеина S, волчаночного антикоагулянта, FVIII (двухэтапный хромогенный анализ) и D-димера будет проводиться на автоматическом коагулометре (ACL Top 700, IL). VWF-антиген VWF:активность будет измеряться в образцах плазмы с помощью хемилюминесцентного анализа. Паттерн мультимера VWF (VWFm) измеряли, как сообщалось ранее [10]. Генотипирование FV Leiden R506Q и протромбина G20210A этих полиморфизмов проводили с использованием коммерческих наборов на основе метода ПЦР-РВ (от EliTechGroup S.p.A., Турин, Италия) на автоматическом приборе (модель 7300, Applied Biosystem, Фостер-Сити, Калифорния, США). ).

Измерение активности ADAMTS-13. Активность ADAMTS-13 измеряли в образцах цитратной плазмы с помощью анализа на основе переноса энергии флуоресцентного резонанса (FRET) с использованием аминокислотного пептидного субстрата VWF86, содержащегося в коммерческом наборе от Instrumentation Laboratory (активность ADAMTS-13, Werfen Group, Милан, Италия). ) и спектрофлуориметра Varian Eclipse, как описано ранее [10, 13] и выражено в % нормальной плазмы.

Клинические химические анализы. Все клинические биохимические анализы (альбумин плазмы, креатинин, аланин-лейцин-аминотрансфераза (АЛТ) и общий билирубин) будут выполняться в рамках рутинной диагностической работы в течение 24 часов клинического наблюдения в центральной лаборатории «А». . Gemelli» с использованием образцов гепаринизированной плазмы и коммерческих реагентов Siemens.

Второстепенные цели. Вторичные цели анализа уровней ADAMTS-13 и VWF в зависимости от этиологии цирроза будут дополнительно оцениваться только после подтверждения диагноза конкретной этиологии цирроза. В случае цирроза, ассоциированного с ВГС, также будет проанализирован генотип ВГС.

Информированное согласие и зачисление Любой пациент, который предоставит информированное согласие (т. е. поставит дату и подпись в форме информированного согласия и форме согласия, если применимо) и будет соответствовать всем остальным критериям включения/исключения, будет считаться включенным в исследование.

Идентификационный код субъекта. Следующая серия цифр будет включать идентификационный код субъекта (SIC): акроним протокола (ADAPTHRO) и двухзначный номер субъекта (например, 01….02), отражающий порядок регистрации (т. е. подписание формы информированного согласия). Например, третий субъект, подписавший форму информированного согласия, будет идентифицирован как ADAPTHRO-03. Все документы исследования (например, CRF, клиническая документация и т. д.) будут идентифицированы с помощью SIC.

Скрининг и учебные визиты Учебный центр несет ответственность за ведение журнала зачисления/скрининга, который включает всех зачисленных субъектов. Журнал также будет служить для документирования причины сбоя скрининга. Все данные скрининга будут собираться и сообщаться в ИРК, независимо от результатов скрининга.

Субъект Завершение/Прекращение Субъект считается завершившим исследование, когда он/она прекращает активное участие в исследовании, потому что субъект завершил или предположительно завершил исследование в соответствии с протоколом, участвовал в течение указанного времени наблюдения и когда Форма выхода из исследования заполнена. Причины завершения/прекращения будут указаны на странице ИРК «Завершение/прекращение», включая: завершение, неудачный скрининг, неблагоприятное событие (например, смерть), прекращение по субъекту (например, выпадение из-под наблюдения [определяется как 3 задокументированных неудачных попытки связаться с субъектом], отсев), решение врача (например, беременность, прогрессирующее заболевание, нарушение(я) протокола), показатели жизнедеятельности Показатели жизнедеятельности будут включать рост (см) и вес (кг). Данные о росте и весе будут измеряться, если это возможно, при скрининговом посещении, при каждом посещении с интервалом в год и при завершении/прекращении исследования.

СТАТИСТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ. Запланированный статистический анализ. Непрерывные переменные будут выражены как среднее значение ± стандартное отклонение. Категориальные переменные будут выражены как частоты и проценты. Точные критерии Фишера и/или критерии хи-квадрат будут в основном использоваться для сравнения качественных переменных и критерия Стьюдента для количественных непарных данных. Значение p < 0,05 будет считаться статистически значимым в исследовательском смысле. В дополнение к описательной статистике (параметры местоположения) и одномерному анализу планируется многомерный анализ. Независимые переменные, которые будут обнаружены связанными с ТВВ в однофакторном анализе с p<0,05, будут использоваться в качестве независимых ковариат, связанных с ТВВ в течение следующих 18 месяцев в многопараметрическом логистическом регрессионном анализе. Двусторонний p <0,05 был определен как статистически значимый. Анализы будут выполняться с использованием программного обеспечения SPSS (версия 21, Чикаго, Иллинойс, США) и программного обеспечения GraphPad Prism (GraphPad Software, Inc, Ла-Хойя, Калифорния, США).

Информированное согласие. Исследователи будут выбирать пациентов для включения в исследование на основании критериев пригодности для участия в исследовании. Исследователь не будет проявлять избирательности, чтобы не возникало систематической ошибки из этого источника. Все пациенты должны подписать форму информированного согласия перед включением в исследование в соответствии с применимыми нормативными требованиями. Перед использованием форма информированного согласия будет рассмотрена Европейской комиссией. Подписывая форму информированного согласия, пациенты соглашаются принять участие в исследовании.

Политика конфиденциальности Исследователь должен соблюдать политику конфиденциальности, описанную в Соглашении о неинтервенционном испытании.

Документы исследования и формы отчетов о случаях Исследователь будет хранить полную и точную документацию исследования в отдельном файле. Документация может включать медицинские записи, записи с подробным описанием хода исследования для каждого субъекта, подписанные формы информированного согласия, переписку с EC, информацию о регистрации и скрининге, CRF и лабораторные отчеты. Следователь будет соблюдать процедуры регистрации данных и отчетности.

Хранение документов и данных Исследователь будет хранить документацию и данные исследования в соответствии с применимыми нормативными требованиями и политикой хранения документов и данных, как описано в Соглашении о неинтервенционном исследовании.