Aceites de Pescado y Reducción de la Inflamación Adiposa (FAIR)

Proponemos realizar un ensayo de brazo paralelo, doble ciego, controlado con placebo para comprender los efectos antiinflamatorios y metabólicos de los ácidos grasos omega-3 de origen marino (EPA + DHA) sobre la inflamación relacionada con la obesidad y la señalización de quimiocinas en humanos. Hombres y mujeres jóvenes obesos (IMC>30 kg/m2) pero no diabéticos (n~44; 25 a 50 años de edad) que no toman suplementos de ácidos grasos omega-3 (EPA + DHA) y consumen una dieta baja en pescado (definida como habitual se incluirá la ingesta de pescado alto en omega-3 (atún y otros pescados no fritos) < 3 a 4 raciones al mes). Una ingesta habitual baja de pescado es importante para controlar la ingesta de EPA + DHA durante el período de suplementación (consulte los criterios de exclusión a continuación). También se requerirá que los sujetos mantengan su consumo actual de pescado durante todo el período de tratamiento.

Habrá dos grupos de tratamiento; (1) placebo y (2) ácidos grasos omega-3 4 gramos/día. El ensayo será aleatorizado, doble ciego, controlado con placebo, con grupos de tratamiento paralelos; tratamiento con ácidos grasos omega-3 8 semanas. Inscribiremos a los participantes hasta que al menos 22 sujetos por brazo de estudio completen todas las visitas del estudio (es decir, al menos 44 participantes).

Se utilizará Lovaza con receta (ésteres etílicos de ácidos omega-3) de GlaxoSmithKline en dosis de 4 gramos al día (2 cápsulas de 1 gramo dos veces al día, con alimentos). Esperamos que esta dosis sea segura porque es una dosis que se recomienda y se usa de forma rutinaria para el tratamiento de la hipertrigliceridemia moderada o peor (niveles > 400 mg/dl). Usaremos cápsulas de placebo correspondientes para que todos los participantes tomen 2 cápsulas dos veces al día, con las comidas recomendadas en la práctica clínica.

La duración del estudio se eligió para proporcionar el tiempo adecuado para los posibles efectos antiinflamatorios de los tratamientos sin requerir efectos máximos de modificación de los lípidos y, al mismo tiempo, reducir el potencial de abandono y pérdida durante el seguimiento que se asocia con duraciones más largas del estudio.

Los participantes serán reclutados de las bases de datos de Investigación de Cardiología Preventiva, compuestas por sujetos sanos que han participado en estudios de investigación anteriores y que han solicitado ser contactados para futuros estudios. Los participantes potenciales también serán reclutados a través de volantes locales aprobados por el IRB, Internet y anuncios en periódicos (ver volante y anuncio adjunto) dirigidos a la región del Valle de Delaware.

PROCEDIMIENTOS DE ESTUDIO

Consentimiento informado Antes del inicio del estudio, el protocolo clínico, el Formulario de consentimiento informado (ICF) y cualquier anuncio para el reclutamiento de sujetos se enviarán para su revisión y aprobación a la Junta de revisión institucional (IRB). El investigador, o su personal de investigación designado, obtendrá el consentimiento informado por escrito de cada sujeto inscrito en el estudio, de acuerdo con las regulaciones 21 CFR partes 50.20-50.27 de la Administración de Drogas y Alimentos de los Estados Unidos (FDA). Es responsabilidad del investigador asegurarse de obtener el consentimiento informado del sujeto o de su tutor o representante legal antes de emprender cualquier actividad o tratamiento que no forme parte de la atención de rutina.

Evaluaciones de seguridad La seguridad se evaluará por la incidencia, la gravedad y la relación con el agente de tratamiento de los eventos adversos.

Monitoreo de eventos adversos: los detalles de todos los eventos adversos que ocurran después de la primera dosis del fármaco del estudio se recopilarán como se indica en la Sección 12. Cualquier enfermedad o lesión que ocurra antes de la primera dosis de un fármaco del estudio se registrará en Historial médico y se evaluará para determinar si la ocurrencia afecta la elegibilidad del paciente para participar en el estudio. El evaluador clínico designado les hará a los sujetos las siguientes preguntas estándar: En los registros de la clínica:

1. "¿Ha tenido algún problema médico desde su última visita?"
2. "¿Cambió algún problema médico presente en su última visita, es decir, se detuvo, empeoró o mejoró?"
3. "¿Ha tomado algún medicamento, aparte del fármaco del estudio, desde su última visita?" Se registrará cualquier información de EA espontáneo proporcionada por el paciente. NOTA: Un EA puede ser una nueva enfermedad, cualquier evento adverso o una exacerbación de una condición preexistente. Consulte la Sección 12.0 para obtener detalles completos.

Biopsia adiposa: Aproximadamente 500-1000 mg de tejido adiposo subcutáneo serán biopsiados de la región glútea, procesados, pesados ​​y congelados hasta su análisis. El tejido adiposo se obtendrá a través de una pequeña incisión (~5 mm) bajo anestesia local (lidocaína al 2% sin epinefrina), como se ha descrito previamente13-15. Una porción (200 mg) de las muestras se congelará rápidamente y se analizará para determinar la expresión génica y los ensayos de proteínas. Otra porción (500-800 mg) se colocará en medios estériles y se someterá a digestión con colagenasa, filtración y centrifugación para la separación de la fracción vascular estromal (SVF). Las células SVF se tiñerán con anticuerpos para el análisis del citómetro de flujo. Finalmente, el tejido restante se fijará en parafina para inmunohistoquímica.

6.5 Análisis subgingival

Las muestras de saliva se recolectarán utilizando el kit OMNIgene DISCOVER (OM-505) (DNA Genotek), un kit todo en uno que recolecta y estabiliza tanto el ADN microbiano como el ARN en la saliva. Las muestras se almacenarán a -80C antes de la extracción. Los ácidos nucleicos se extraerán con el QIAamp MinElute Virus Spin Kit de QIAGEN (Qiagen). Las muestras de placa subgingival se obtendrán de 3 regiones de la cavidad oral en cada sujeto (2 muestras por región) utilizando un microcepillo de cerdas suaves (DenTek). Las muestras se recolectarán de la misma ubicación anatómica en todos los sujetos. El ADN se aislará utilizando el kit PSP Spin Stool DNA (Invitec). Las muestras de ADN se amplificarán utilizando cebadores de la región V1-V2 dirigidos a los genes bacterianos 16S y se secuenciarán utilizando IlluminaHiSeq o la tecnología de pirosecuenciación 454.

Procedimientos de estudio específicos (por visita)

Selección (Visita 1) Los posibles participantes serán seleccionados primero mediante una entrevista telefónica o por correo electrónico con el coordinador de la investigación (consulte el Apéndice B para ver el formulario de entrevista por correo electrónico; para las entrevistas telefónicas, esta información se intercambiará verbalmente). Los participantes que cumplan con los requisitos iniciales del estudio serán invitados a una visita de selección (visita 1) en el CTRC. Antes de esta visita, los participantes recibirán un cuestionario de salud detallado (consulte el Apéndice C) que se ha utilizado en numerosos estudios anteriores que aborda preguntas sobre antecedentes médicos, uso actual de medicamentos y suplementos dietéticos, ejercicio y hábitos sociales. Además, se preguntará a los participantes sobre el consumo de pescado para asegurar el reclutamiento de sujetos con una ingesta más baja de EPA + DHA durante el período de estudio. Se les pedirá a los participantes que completen estos cuestionarios en casa y que traigan los formularios completados a su visita de selección. Durante la visita de selección, se reunirán con el personal de investigación para revisar y firmar un formulario de consentimiento aprobado por el IRB. El personal de investigación revisará el cuestionario de salud con el participante y medirá el peso, la altura, la circunferencia de la cintura y la cadera, la presión arterial al sentarse y la frecuencia cardíaca. Se realizará un breve examen físico y un electrocardiograma (ECG). Además, a los participantes se les extraerá sangre (después de un ayuno de 12 horas) para evaluar los lípidos en ayunas, la glucosa, la química sérica y la función hepática y un hemograma completo. A las participantes femeninas también se les pedirá que proporcionen una muestra de orina para una prueba de embarazo. Estos parámetros de laboratorio se incluyen para garantizar que el participante cumpla con los criterios de elegibilidad y que, en general, goce de buena salud. Una vez que se hayan revisado todos los datos clínicos, el personal del estudio se comunicará con cada voluntario del estudio para informarles si son elegibles.

Visita de aleatorización (Visita 2) De una a cuatro semanas después de la Visita de selección 1, los participantes elegibles regresarán al CTRC después de un ayuno de 12 horas para una visita de 2 horas. Se les pedirá a los participantes que se cepillen los dientes después de su última comida el día anterior a la visita, o al comienzo del período de ayuno de 12 horas, y que se abstengan de cepillarse los dientes o usar enjuague bucal adicional hasta después de la visita del estudio. Los participantes se reunirán con un enfermero/coordinador de investigación que evaluará cualquier cambio en el historial médico y el uso de medicamentos, así como también revisará cualquier evento adverso. Se medirá la presión arterial, la frecuencia cardíaca, la altura y el peso, se recolectarán muestras de sangre y orina para medir la eficacia de referencia antes de la aleatorización y se realizará una prueba de embarazo en orina para todas las mujeres. Se administrará el cuestionario simple de consumo de pescado para evaluar cualquier cambio en el nivel de ingesta de omega-3 en la dieta.

También se les pedirá que registren todos los alimentos y bebidas consumidos en los registros dietéticos en los 3 días anteriores a la visita, además de completar un cuestionario de salud digestiva y un cuestionario de historial dietético. Todos los datos de nutrientes recopilados de los registros dietéticos de 3 días serán analizados por Food Processor 8.1 (06/03, Escha). Se les pedirá a los participantes que completen estos cuestionarios en casa y que traigan los formularios completados a su visita de estudio. Si un sujeto no puede imprimir o completar los formularios en casa, se completarán en la visita.

Se tomarán muestras de saliva y placa subgingival para evaluar el microbioma oral. Las muestras de saliva se recolectarán utilizando un kit estandarizado. Bajo la supervisión del personal del estudio, a los sujetos se les entregará el kit, que consiste en un embudo unido a un tubo, y se les indicará que escupan en el embudo hasta que la cantidad de líquido llegue a la línea de llenado ubicada en el exterior del tubo adjunto. Una vez que se haya recolectado la cantidad adecuada, se cerrará la tapa del embudo y se retirará el embudo del tubo. A continuación, se tapa el tubo y se agita durante unos 10 segundos. Las muestras de placa subgingival se recogerán frotando varias regiones de la mucosa bucal con microcepillos. Se usará un cepillo separado para cada hisopo y se recolectarán dos muestras de cada región.

Con el fin de establecer los efectos de los tratamientos sobre los parámetros inflamatorios del tejido adiposo, obtendremos biopsias de tejido adiposo subcutáneo de la región glútea bajo anestesia local (lidocaína al 2%). En la Sección 6.4 se proporciona una descripción detallada de los procedimientos de recolección de tejido adiposo. Luego, los participantes serán asignados al azar al grupo de fármaco o placebo. Se proporcionarán suministros del fármaco del estudio para durar 8 semanas (4 píldoras/día de Lovaza o placebo).

Los participantes recibirán instrucciones verbales y escritas para tomar los medicamentos del estudio de la siguiente manera; 2 aceite de pescado/placebo con la comida por la mañana, 2 aceite de pescado/placebo con la comida por la noche. Se entregará un diario de pastillas a todos los sujetos.

Seguimiento por teléfono/correo electrónico (visita 3) Se contactará a los participantes por teléfono o correo electrónico aproximadamente cuatro semanas (visita 3) posteriores a la aleatorización para revisar el cumplimiento de la medicación y el diario de píldoras, eventos adversos y cualquier cambio en el consumo de pescado. Se aconsejará a los participantes con una adherencia aparente <80 % a la medicación del estudio que aumenten la adherencia para que su adherencia a las 8 semanas sea ≥80 %.

Visita de finalización (Visita 4) Los participantes llegarán al CTRC después de un ayuno de 12 horas. Los participantes se reunirán con un coordinador del estudio que evaluará los cambios en el historial médico y el uso de medicamentos. También se les pedirá que registren todos los alimentos y bebidas consumidos en los registros dietéticos durante los 3 días anteriores a la visita. Se registrará cualquier evento adverso, se revisará el diario de píldoras y se contarán los medicamentos del estudio (recuento de píldoras). Se registrará el peso y la altura y se calculará el IMC. Se realizará un ECG. Se extraerá sangre para la evaluación posmedicamento de las funciones hepáticas y químicas, así como para todas las medidas relacionadas con los resultados (lípidos, insulina/glucosa, marcadores inflamatorios). También se recolectará orina para medidas de eficacia. Se realizará prueba de embarazo en orina a todas las hembras. Se tomarán muestras de saliva y placa subgingival para evaluar cualquier cambio en el microbioma oral por el tratamiento. Se realizará una biopsia adiposa como se indicó anteriormente.