Fischöle und Reduzierung von Fettentzündungen (FAIR)

Wir schlagen die Durchführung einer parallelen, doppelblinden, placebokontrollierten Studie vor, um die entzündungshemmenden und metabolischen Wirkungen von aus dem Meer stammenden Omega-3-Fettsäuren (EPA + DHA) auf durch Fettleibigkeit bedingte Entzündungen und Chemokinsignale beim Menschen zu verstehen. Fettleibige (BMI>30 kg/m2), aber nicht-diabetische junge Männer und Frauen (n~44; 25 bis 50 Jahre alt), die keine Nahrungsergänzungsmittel mit Omega-3-Fettsäuren (EPA + DHA) einnehmen und eine fischarme Ernährung zu sich nehmen (definiert). Wie üblich ist die Aufnahme von Fisch mit hohem Omega-3-Gehalt (Thunfisch und anderer nicht gebratener Fisch) (< 3 bis 4 Portionen pro Monat) enthalten. Ein geringer gewohnheitsmäßiger Fischverzehr ist wichtig, um die EPA- und DHA-Aufnahme während des Ergänzungszeitraums zu kontrollieren (siehe Ausschlusskriterien unten). Die Probanden müssen außerdem während des gesamten Behandlungszeitraums ihren aktuellen Fischkonsum aufrechterhalten.

Es wird zwei Behandlungsgruppen geben; (1) Placebo und (2) Omega-3-Fettsäuren 4 Gramm/Tag. Die Studie wird randomisiert, doppelblind, placebokontrolliert und mit parallelen Behandlungsgruppen durchgeführt; Behandlung mit Omega-3-Fettsäuren 8 Wochen. Wir werden Teilnehmer einschreiben, bis mindestens 22 Probanden pro Studienzweig alle Studienbesuche abgeschlossen haben (d. h. mindestens 44 Teilnehmer).

Es wird verschreibungspflichtiges Lovaza (Omega-3-Säureethylester) von GlaxoSmithKline in einer Dosierung von 4 Gramm pro Tag (2 1-Gramm-Kapseln zweimal täglich, zusammen mit einer Mahlzeit) verwendet. Wir gehen davon aus, dass diese Dosis sicher ist, da es sich um eine Dosis handelt, die zur Behandlung mittelschwerer oder schwererer Hypertriglyceridämie (Werte > 400 mg/dl) empfohlen und routinemäßig angewendet wird. Wir werden passende Placebo-Kapseln verwenden, sodass alle Teilnehmer zweimal täglich 2 Kapseln einnehmen – zusammen mit einer Mahlzeit, wie in der klinischen Praxis empfohlen.

Die Studiendauer wurde so gewählt, dass genügend Zeit für mögliche entzündungshemmende Wirkungen der Behandlungen zur Verfügung steht, ohne dass maximale lipidmodifizierende Wirkungen erforderlich sind, und gleichzeitig das Risiko von Studienabbrüchen und Verlusten bei der Nachbeobachtung, die mit längeren Studiendauern einhergehen, verringert wird.

Die Teilnehmer werden aus den Datenbanken der präventiven kardiologischen Forschung rekrutiert und bestehen aus gesunden Probanden, die an früheren Forschungsstudien teilgenommen haben und darum gebeten haben, für zukünftige Studien kontaktiert zu werden. Potenzielle Teilnehmer werden auch über lokale, vom IRB genehmigte Flyer, Internet und Zeitungsanzeigen (siehe Flyer und Anzeige im Anhang) für die Region Delaware Valley rekrutiert.

STUDIENVERFAHREN

Einverständniserklärung Vor Beginn der Studie werden das klinische Protokoll, das Einverständniserklärungsformular (ICF) und alle Anzeigen zur Probandenrekrutierung dem Institutional Review Board (IRB) zur Prüfung und Genehmigung vorgelegt. Der Prüfer oder sein benanntes Forschungspersonal wird von jedem an der Studie teilnehmenden Probanden eine schriftliche Einverständniserklärung gemäß den Vorschriften 21 CFR Teile 50.20–50.27 der US-amerikanischen Food and Drug Administration (FDA) einholen. Es liegt in der Verantwortung des Prüfers, sicherzustellen, dass die informierte Einwilligung des Probanden oder seines/ihres Vormunds oder gesetzlichen Vertreters eingeholt wird, bevor irgendeine Aktivität oder Behandlung durchgeführt wird, die nicht Teil der Routineversorgung ist.

Sicherheitsbewertungen Die Sicherheit wird anhand der Häufigkeit, Schwere und Beziehung unerwünschter Ereignisse zum Behandlungsmittel bewertet.

Überwachung auf unerwünschte Ereignisse: Einzelheiten zu allen unerwünschten Ereignissen, die nach der ersten Dosis des Studienmedikaments auftreten, werden wie in Abschnitt 12 angegeben erfasst. Alle Krankheiten oder Verletzungen, die vor der ersten Dosis eines Studienmedikaments auftreten, werden in der Krankengeschichte erfasst und ausgewertet festzustellen, ob das Ereignis Auswirkungen auf die Eignung des Patienten zur Teilnahme an der Studie hat. Den Probanden werden vom benannten klinischen Gutachter die folgenden Standardfragen gestellt: Beim Check-in in der Klinik:

1. „Hatten Sie seit Ihrem letzten Besuch irgendwelche medizinischen Probleme?“
2. „Haben sich bei Ihrem letzten Besuch bestehende medizinische Probleme verändert, d. h. sind sie verschwunden, haben sich verschlimmert oder haben sich verbessert?“
3. „Haben Sie seit Ihrem letzten Besuch andere Arzneimittel als das Studienmedikament eingenommen?“ Alle vom Patienten bereitgestellten spontanen AE-Informationen werden aufgezeichnet. HINWEIS: Eine UE kann eine oder mehrere neue Krankheiten, ein oder mehrere unerwünschte Ereignisse oder eine Verschlimmerung einer bereits bestehenden Erkrankung sein. Ausführliche Informationen finden Sie in Abschnitt 12.0.

Fettbiopsie: Ungefähr 500–1000 mg subkutanes Fettgewebe werden aus der Gesäßregion biopsiert, verarbeitet, gewogen und bis zur Analyse eingefroren. Fettgewebe wird durch einen kleinen (~5 mm) Einschnitt unter örtlicher Betäubung (2 % Lidocain ohne Adrenalin) gewonnen, wie bereits beschrieben13-15. Ein Teil (200 mg) der Proben wird schockgefroren und für Genexpressions- und Proteintests analysiert. Ein weiterer Teil (500–800 mg) wird in sterile Medien gegeben und einem Aufschluss mit Kollagenase, Filtration und Zentrifugation zur Abtrennung der stromalen Gefäßfraktion (SVF) unterzogen. SVF-Zellen werden für die Durchflusszytometeranalyse mit Antikörpern gefärbt. Abschließend wird das verbleibende Gewebe für die Immunhistochemie in Paraffin fixiert.

6.5 Subgingivale Analyse

Speichelproben werden mit dem OMNIgene DISCOVER (OM-505) Kit (DNA Genotek) gesammelt, einem All-in-One-Kit, das sowohl mikrobielle DNA als auch RNA im Speichel sammelt und stabilisiert. Die Proben werden vor der Extraktion bei -80 °C gelagert. Nukleinsäuren werden mit dem QIAGEN QIAamp MinElute Virus Spin Kit (Qiagen) extrahiert. Unter Verwendung einer Mikrobürste mit weichen Borsten (DenTek) werden subgingivale Plaque-Proben aus 3 Mundhöhlenregionen jedes Probanden entnommen (2 Proben pro Region). Die Proben werden in allen Fächern am gleichen anatomischen Ort entnommen. Die DNA wird mit dem PSP Spin Stool DNA Kit (Invitec) isoliert. DNA-Proben werden mithilfe von Primern der V1-V2-Region, die auf bakterielle 16S-Gene abzielen, amplifiziert und mithilfe der IlluminaHiSeq- oder 454-Pyrosequenzierungstechnologie sequenziert.

Spezifische Studienabläufe (bei Besuch)

Screening (Besuch 1) Potenzielle Teilnehmer werden zunächst durch ein Telefon- oder E-Mail-Interview mit dem Forschungskoordinator überprüft (siehe Anhang B für das E-Mail-Interviewformular; bei Telefoninterviews werden diese Informationen mündlich ausgetauscht). Teilnehmer, die die anfänglichen Studienvoraussetzungen erfüllen, werden zu einem Screening-Besuch (Besuch 1) im CTRC eingeladen. Vor diesem Besuch erhalten die Teilnehmer einen ausführlichen Gesundheitsfragebogen (siehe Anhang C), der in zahlreichen früheren Studien verwendet wurde und Fragen zur Krankengeschichte in der Vergangenheit, zur aktuellen Einnahme von Medikamenten und Nahrungsergänzungsmitteln, zu Bewegung und zu sozialen Gewohnheiten beantwortet. Darüber hinaus werden die Teilnehmer zum Fischkonsum befragt, um die Rekrutierung von Probanden mit geringerer EPA- und DHA-Aufnahme während des Studienzeitraums sicherzustellen. Die Teilnehmer werden gebeten, diese Fragebögen zu Hause auszufüllen und die ausgefüllten Formulare zu ihrem Screening-Besuch mitzubringen. Während des Screening-Besuchs treffen sie sich mit Forschungspersonal, um ein vom IRB genehmigtes Einverständnisformular zu prüfen und zu unterzeichnen. Das Forschungspersonal wird den Gesundheitsfragebogen mit dem Teilnehmer durchgehen und Gewicht, Größe, Taillen- und Hüftumfang, sitzenden Blutdruck und Herzfrequenz messen. Es wird eine kurze körperliche Untersuchung sowie ein Elektrokardiogramm (EKG) durchgeführt. Darüber hinaus wird den Teilnehmern (nach einem 12-stündigen Fasten) Blut abgenommen, um Nüchternlipide, Glukose, Serumchemie und Leberfunktion zu beurteilen und ein großes Blutbild zu erstellen. Weibliche Teilnehmer werden außerdem gebeten, eine Urinprobe für einen Schwangerschaftstest bereitzustellen. Diese Laborparameter werden einbezogen, um sicherzustellen, dass der Teilnehmer die Zulassungskriterien erfüllt und sich im Allgemeinen in einem guten Gesundheitszustand befindet. Sobald alle klinischen Daten überprüft wurden, wird das Studienpersonal jeden Studienteilnehmer kontaktieren, um ihm mitzuteilen, ob er für die Teilnahme geeignet ist.

Randomisierungsbesuch (Besuch 2) Ein bis vier Wochen nach dem Screening-Besuch 1 kehren berechtigte Teilnehmer nach 12-stündigem Fasten für einen 2-stündigen Besuch zum CTRC zurück. Die Teilnehmer werden gebeten, ihre Zähne nach der letzten Mahlzeit am Tag vor dem Besuch oder zu Beginn der 12-stündigen Fastenzeit zu putzen und bis nach dem Studienbesuch auf weiteres Zähneputzen oder die Verwendung von Mundwasser zu verzichten. Die Teilnehmer treffen sich mit einem Forschungskrankenschwester/Koordinator, der alle Änderungen in der Krankengeschichte und im Medikamentengebrauch beurteilt und alle unerwünschten Ereignisse überprüft. Blutdruck, Herzfrequenz, Größe und Gewicht werden gemessen, Blut und Urin werden gesammelt, um die Wirksamkeit vor der Randomisierung zu messen und einen Urin-Schwangerschaftstest für alle Frauen durchzuführen. Der einfache Fragebogen zum Fischkonsum wird ausgefüllt, um etwaige Veränderungen der Omega-3-Aufnahme in der Ernährung zu beurteilen.

Sie werden außerdem gebeten, alle konsumierten Speisen und Getränke drei Tage vor dem Besuch in Ernährungsprotokollen zu erfassen und einen Fragebogen zur Verdauungsgesundheit und einen Fragebogen zur Ernährungsgeschichte auszufüllen. Alle aus 3-Tage-Ernährungsaufzeichnungen gesammelten Nährstoffdaten werden von Food Processor 8.1 (06/03, Escha) analysiert. Die Teilnehmer werden gebeten, diese Fragebögen zu Hause auszufüllen und die ausgefüllten Formulare zu ihrem Studienbesuch mitzubringen. Wenn ein Proband nicht in der Lage ist, die Formulare zu Hause auszudrucken oder auszufüllen, werden sie beim Besuch ausgefüllt.

Zur Beurteilung des oralen Mikrobioms werden Speichel- und subgingivale Plaqueproben entnommen. Speichelproben werden mit einem standardisierten Kit entnommen. Unter der Aufsicht des Studienpersonals erhalten die Probanden das Kit, das aus einem an einem Röhrchen befestigten Trichter besteht, und werden angewiesen, in den Trichter zu spucken, bis die Flüssigkeitsmenge eine Fülllinie an der Außenseite des befestigten Röhrchens erreicht. Sobald die richtige Menge gesammelt wurde, wird der Deckel des Trichters geschlossen und der Trichter aus dem Röhrchen entfernt. Anschließend wird das Röhrchen verschlossen und etwa 10 Sekunden lang geschüttelt. Subgingivale Plaqueproben werden durch Abwischen mehrerer Bereiche der Mundschleimhaut mit Mikrobürsten entnommen. Für jeden Abstrich wird eine separate Bürste verwendet und aus jeder Region werden zwei Proben entnommen.

Um die Auswirkungen von Behandlungen auf die Entzündungsparameter des Fettgewebes festzustellen, werden wir Biopsien des subkutanen Fettgewebes im Gesäßbereich unter örtlicher Betäubung (2 % Lidocain) durchführen. Eine detaillierte Beschreibung der Verfahren zur Fettsammlung finden Sie in Abschnitt 6.4. Die Teilnehmer werden dann randomisiert einer Medikamenten- oder Placebogruppe zugeteilt. Es werden Vorräte an Studienmedikamenten für 8 Wochen bereitgestellt (4 Tabletten/Tag entweder Lovaza oder Placebo).

Die Teilnehmer erhalten mündliche und schriftliche Anweisungen zur Einnahme der Studienmedikamente wie folgt: 2 Fischöl/Placebo zum Essen morgens, 2 Fischöl/Placebo zum Essen abends. Allen Probanden wird ein Pillentagebuch ausgehändigt.

Telefon-/E-Mail-Follow-up (Besuch 3) Die Teilnehmer werden etwa vier Wochen (Besuch 3) nach der Randomisierung per Telefon oder E-Mail kontaktiert, um die Medikamenteneinhaltung und das Pillentagebuch, unerwünschte Ereignisse und etwaige Änderungen beim Fischkonsum zu überprüfen. Teilnehmern mit einer offensichtlichen Einhaltung der Studienmedikation von <80 % wird geraten, die Einhaltung zu erhöhen, sodass ihre Einhaltung nach 8 Wochen ≥80 % beträgt.

Abschlussbesuch (Besuch 4) Die Teilnehmer kommen nach einem 12-stündigen Fasten zum CTRC. Die Teilnehmer treffen sich mit einem Studienkoordinator, der Änderungen in der Krankengeschichte und im Medikamentengebrauch beurteilt. Sie werden außerdem gebeten, alle konsumierten Speisen und Getränke drei Tage vor dem Besuch in einem Ernährungsprotokoll festzuhalten. Alle unerwünschten Ereignisse werden aufgezeichnet, das Pillentagebuch überprüft und die Studienmedikation gezählt (Pillenzählung). Gewicht und Größe werden aufgezeichnet und der BMI berechnet. Es wird ein EKG durchgeführt. Es wird Blut für das Post-Drug-Screening der Leberfunktionen und -chemie sowie für alle ergebnisbezogenen Maßnahmen (Lipide, Insulin/Glukose, Entzündungsmarker) entnommen. Es wird auch Urin für Wirksamkeitsmessungen gesammelt. Bei allen Frauen wird ein Urin-Schwangerschaftstest durchgeführt. Speichel- und subgingivale Plaqueproben werden entnommen, um festzustellen, ob sich das orale Mikrobiom durch die Behandlung verändert. Eine Fettbiopsie wird wie oben durchgeführt.