Oleje rybie i redukcja stanu zapalnego tkanki tłuszczowej (FAIR)

Proponujemy przeprowadzenie równoległej, podwójnie ślepej próby kontrolowanej placebo, aby zrozumieć przeciwzapalne i metaboliczne działanie kwasów tłuszczowych omega-3 pochodzenia morskiego (EPA + DHA) na stany zapalne związane z otyłością i sygnalizację chemokin u ludzi. Otyli (BMI>30 kg/m2), ale nie chorujący na cukrzycę młodzi mężczyźni i kobiety (n~44; w wieku od 25 do 50 lat) nie przyjmujący suplementów kwasów tłuszczowych omega-3 (EPA + DHA) i spożywający dietę ubogą w ryby (zdefiniowana jak zwykle spożycie ryb bogatych w kwasy omega-3 (tuńczyk i inne niesmażone ryby) < 3 do 4 porcji miesięcznie). Niskie zwyczajowe spożycie ryb jest ważne, aby kontrolować spożycie EPA + DHA w okresie suplementacji (patrz kryteria wykluczenia poniżej). Osoby badane będą również musiały utrzymać swoje obecne spożycie ryb przez cały okres leczenia.

Będą dwie grupy terapeutyczne; (1) placebo i (2) kwasy tłuszczowe omega-3 4 gramy dziennie. Badanie będzie randomizowane, podwójnie ślepe, kontrolowane placebo, z równoległymi grupami terapeutycznymi; kuracja kwasami tłuszczowymi omega-3 8 tyg. Będziemy rejestrować uczestników do czasu, aż co najmniej 22 uczestników na ramię badania ukończy wszystkie wizyty studyjne (tj. co najmniej 44 uczestników).

Stosowana będzie recepta Lovaza (estry etylowe kwasów omega-3) firmy GlaxoSmithKline w dawce 4 gramów dziennie (2 1-gramowe kapsułki dwa razy dziennie, z jedzeniem). Oczekujemy, że ta dawka będzie bezpieczna, ponieważ jest to dawka zalecana i rutynowo stosowana w leczeniu hipertriglicerydemii o nasileniu umiarkowanym lub ciężkim (stężenia > 400 mg/dl). Będziemy używać pasujących kapsułek placebo, tak aby wszyscy uczestnicy przyjmowali 2 kapsułki dwa razy dziennie – z jedzeniem zgodnie z zaleceniami praktyki klinicznej.

Czas trwania badania wybrano tak, aby zapewnić odpowiedni czas na potencjalne działanie przeciwzapalne leczenia bez wymagania maksymalnych efektów modyfikujących lipidy, a jednocześnie zmniejszyć możliwość rezygnacji i utraty obserwacji, co jest związane z dłuższym czasem trwania badania.

Uczestnicy będą rekrutowani z baz danych badań kardiologii prewencyjnej, składających się ze zdrowych osób, które brały udział w poprzednich badaniach naukowych i które poprosiły o kontakt w sprawie przyszłych badań. Potencjalni uczestnicy będą również rekrutowani za pośrednictwem lokalnych ulotek zatwierdzonych przez IRB, Internetu i ogłoszeń prasowych (patrz ulotka i załączona reklama) skierowanych do regionu Delaware Valley.

PROCEDURY STUDIÓW

Świadoma zgoda Przed rozpoczęciem badania protokół kliniczny, formularz świadomej zgody (ICF) oraz wszelkie ogłoszenia dotyczące rekrutacji uczestników zostaną przedłożone do przeglądu i zatwierdzenia Institutional Review Board (IRB). Badacz lub wyznaczony przez niego personel badawczy uzyska pisemną świadomą zgodę od każdego uczestnika biorącego udział w badaniu, zgodnie z przepisami amerykańskiej Agencji ds. Żywności i Leków (FDA) 21 CFR, części 50.20-50.27. Do obowiązków badacza należy upewnienie się, że osoba badana lub jej opiekun lub przedstawiciel prawny uzyskała świadomą zgodę przed podjęciem jakiejkolwiek czynności lub leczenia niebędącego częścią rutynowej opieki.

Oceny bezpieczeństwa Bezpieczeństwo zostanie ocenione na podstawie częstości występowania, ciężkości i związku z czynnikiem terapeutycznym zdarzeń niepożądanych.

Monitorowanie zdarzeń niepożądanych: Szczegółowe informacje o wszystkich zdarzeniach niepożądanych, które wystąpiły po pierwszej dawce badanego leku, zostaną zebrane zgodnie z Sekcją 12. Każda choroba lub uraz, który wystąpi przed pierwszą dawką badanego leku, zostanie odnotowany w Historii medycznej i oceniony pod kątem ustalić, czy zdarzenie ma wpływ na kwalifikację pacjenta do udziału w badaniu. Badani będą zadawać następujące standardowe pytania przez wyznaczonego ewaluatora klinicznego: Podczas odprawy w klinice:

1. „Czy miałeś jakieś problemy zdrowotne od ostatniej wizyty?”
2. „Czy jakiekolwiek problemy zdrowotne obecne podczas ostatniej wizyty uległy zmianie, tj. ustały, pogorszyły się lub poprawiły?”
3. „Czy od ostatniej wizyty brałeś jakieś leki poza badanym lekiem?” Każda spontaniczna informacja o AE podana przez pacjenta zostanie zarejestrowana. UWAGA: AE może być nową chorobą, dowolnym niepożądanym zdarzeniem lub zaostrzeniem wcześniej istniejącego stanu. Szczegółowe informacje znajdują się w sekcji 12.0.

Biopsja tkanki tłuszczowej: Około 500-1000 mg podskórnej tkanki tłuszczowej zostanie poddane biopsji z okolicy pośladków, przetworzone, zważone i zamrożone do czasu analizy. Tkanka tłuszczowa zostanie pobrana przez małe (~5 mm) nacięcie w znieczuleniu miejscowym (2% lidokaina bez epinefryny), jak opisano wcześniej13-15. Część (200 mg) próbek zostanie szybko zamrożona i przeanalizowana pod kątem ekspresji genów i testów białek. Kolejna porcja (500-800 mg) zostanie umieszczona w sterylnych pożywkach i poddana trawieniu kolagenazą, filtracji i wirowaniu w celu oddzielenia frakcji naczyniowej zrębu (SVF). Komórki SVF będą barwione przeciwciałami do analizy cytometrii przepływowej. Na koniec pozostała tkanka zostanie utrwalona w parafinie do immunohistochemii.

6.5 Analiza poddziąsłowa

Próbki śliny zostaną pobrane przy użyciu zestawu OMNIgene DISCOVER (OM-505) (DNA Genotek), uniwersalnego zestawu, który zbiera i stabilizuje DNA i RNA drobnoustrojów w ślinie. Próbki będą przechowywane w -80C przed ekstrakcją. Kwasy nukleinowe będą ekstrahowane przy użyciu zestawu QIAGEN QIAamp MinElute Virus Spin Kit (Qiagen). Próbki płytki poddziąsłowej zostaną pobrane z 3 obszarów jamy ustnej każdego pacjenta (2 próbki na obszar) za pomocą mikroszczoteczki z miękkim włosiem (DenTek). Próbki będą pobierane z tego samego miejsca anatomicznego u wszystkich pacjentów. DNA zostanie wyizolowane przy użyciu zestawu PSP Spin Stool DNA (Invitec). Próbki DNA zostaną zamplifikowane przy użyciu starterów regionu V1-V2 ukierunkowanych na bakteryjne geny 16S i zsekwencjonowane przy użyciu technologii IlluminaHiSeq lub 454 Pyrosequencing.

Specyficzne procedury badania (przez wizytę)

Weryfikacja (Wizyta 1) Potencjalni uczestnicy zostaną najpierw zweryfikowani przez rozmowę telefoniczną lub e-mailową z koordynatorem badań (zob. załącznik B, aby zapoznać się z formularzem wywiadu e-mailowego; w przypadku rozmów telefonicznych informacje te będą wymieniane ustnie). Uczestnicy, którzy spełnią wstępne wymagania dotyczące badania, zostaną zaproszeni na wizytę przesiewową (wizyta 1) w CTRC. Przed tą wizytą uczestnicy otrzymają szczegółowy kwestionariusz zdrowotny (patrz Załącznik C), który był używany w wielu poprzednich badaniach, który odpowiada na pytania dotyczące historii medycznej, obecnego stosowania leków i suplementów diety, ćwiczeń i nawyków społecznych. Ponadto uczestnicy zostaną zapytani o spożycie ryb, aby zapewnić rekrutację osób o niższym spożyciu EPA + DHA w okresie badania. Uczestnicy zostaną poproszeni o wypełnienie tych kwestionariuszy w domu i zabranie ze sobą wypełnionych formularzy na wizytę przesiewową. Podczas wizyty przesiewowej spotkają się z personelem badawczym w celu przejrzenia i podpisania zatwierdzonego przez IRB formularza zgody. Personel badawczy przejrzy kwestionariusz zdrowotny z uczestnikiem, a także zmierzy wagę, wzrost, obwód talii i bioder, ciśnienie krwi w pozycji siedzącej i tętno. Zostanie przeprowadzone krótkie badanie fizykalne, a także elektrokardiogram (EKG). Ponadto uczestnikom zostanie pobrana krew (po 12-godzinnym poście) w celu oceny lipidów na czczo, glukozy, chemii surowicy i czynności wątroby oraz pełnej morfologii krwi. Kobiety zostaną również poproszone o dostarczenie próbki moczu do testu ciążowego. Te parametry laboratoryjne są uwzględnione, aby upewnić się, że uczestnik spełnia kryteria kwalifikacyjne i ogólnie jest w dobrym stanie zdrowia. Po przejrzeniu wszystkich danych klinicznych personel badawczy skontaktuje się z każdym ochotnikiem biorącym udział w badaniu, aby poinformować go, czy się kwalifikuje.

Wizyta randomizacyjna (Wizyta 2) Jeden do czterech tygodni po wizycie przesiewowej 1 kwalifikujący się uczestnicy powrócą do CTRC po 12-godzinnym poście na 2-godzinną wizytę. Uczestnicy zostaną poproszeni o umycie zębów po ostatnim posiłku na dzień przed wizytą lub na początku 12-godzinnej głodówki i powstrzymanie się od dodatkowego szczotkowania lub stosowania płynów do płukania ust do czasu zakończenia wizyty studyjnej. Uczestnicy spotkają się z pielęgniarką/koordynatorem badań, która oceni wszelkie zmiany w historii medycznej i stosowaniu leków, a także przeanalizuje wszelkie zdarzenia niepożądane. Zostaną zmierzone ciśnienie krwi, częstość akcji serca, wzrost i masa ciała, pobrana zostanie krew i mocz w celu przeprowadzenia podstawowych pomiarów skuteczności przed randomizacją oraz zostanie wykonany test ciążowy z moczu u wszystkich kobiet. Prosty kwestionariusz spożycia ryb zostanie przeprowadzony w celu oceny wszelkich zmian w poziomie spożycia omega-3 w diecie.

Zostaną również poproszeni o zapisanie całej spożywanej żywności i napojów w dokumentacji żywieniowej na 3 dni przed wizytą, a także o wypełnienie kwestionariusza dotyczącego zdrowia układu pokarmowego i kwestionariusza dotyczącego historii diety. Wszystkie dane dotyczące składników odżywczych zebrane z 3-dniowych zapisów diety zostaną przeanalizowane przez Food Processor 8.1 (06/03, Escha). Uczestnicy zostaną poproszeni o wypełnienie tych kwestionariuszy w domu i zabranie ze sobą wypełnionych formularzy na wizytę studyjną. Jeśli pacjent nie ma możliwości wydrukowania lub wypełnienia formularzy w domu, zostaną one uzupełnione podczas wizyty.

W celu oceny mikrobiomu jamy ustnej zostaną pobrane próbki śliny i płytki nazębnej poddziąsłowej. Próbki śliny zostaną pobrane przy użyciu znormalizowanego zestawu. Pod nadzorem personelu badawczego, badani otrzymają zestaw, który składa się z lejka przymocowanego do rurki i poinstruowani, aby pluć do lejka, aż ilość płynu osiągnie linię napełnienia umieszczoną na zewnątrz dołączonej rurki. Po zebraniu odpowiedniej ilości wieczko lejka zostanie zamknięte, a lejek wyjęty z probówki. Następnie probówkę zamyka się i wstrząsa przez około 10 sekund. Próbki płytki nazębnej poddziąsłowej zostaną pobrane poprzez wymaz z kilku obszarów błony śluzowej policzka za pomocą mikroszczoteczek. Do każdego wymazu zostanie użyta osobna szczoteczka, az każdego regionu zostaną pobrane dwie próbki.

W celu ustalenia wpływu zabiegów na parametry stanu zapalnego tkanki tłuszczowej pobierzemy biopsje podskórnej tkanki tłuszczowej okolicy pośladkowej w znieczuleniu miejscowym (lidokaina 2%). Szczegółowy opis procedur pobierania tkanki tłuszczowej znajduje się w punkcie 6.4. Uczestnicy zostaną następnie losowo przydzieleni do grupy leku lub placebo. Dostawy badanego leku będą dostarczane na okres 8 tygodni (4 tabletki dziennie Lovaza lub placebo).

Uczestnicy otrzymają ustne i pisemne instrukcje dotyczące przyjmowania badanych leków w następujący sposób; 2 oleje rybne/placebo z jedzeniem rano, 2 oleje rybne/placebo z jedzeniem wieczorem. Wszystkim badanym zostanie wręczony dzienniczek pigułek.

Kontakt telefoniczny/e-mailowy (wizyta 3) Z uczestnikami skontaktujemy się telefonicznie lub pocztą elektroniczną po około czterech tygodniach (wizyta 3) po randomizacji w celu przeglądu stosowania się do zaleceń lekarskich i dzienniczka przyjmowania tabletek, zdarzeń niepożądanych i wszelkich zmian w spożyciu ryb. Uczestnicy z <80% widocznym przestrzeganiem zaleceń dotyczących badanego leku zostaną poinformowani o zwiększeniu przestrzegania zaleceń, tak aby ich przestrzeganie zaleceń po 8 tygodniach wyniosło ≥80%.

Wizyta końcowa (Wizyta 4) Uczestnicy przyjdą do CTRC po 12-godzinnym poście. Uczestnicy spotkają się z koordynatorem badania, który oceni zmiany w historii medycznej i stosowaniu leków. Zostaną również poproszeni o odnotowanie wszystkich spożywanych posiłków i napojów w dokumentacji żywieniowej na 3 dni przed wizytą. Wszelkie zdarzenia niepożądane zostaną odnotowane, dzienniczek pigułek zostanie przejrzany, a badane leki zostaną policzone (liczba tabletek). Zarejestrowana zostanie waga i wzrost oraz obliczony BMI. Zostanie wykonane EKG. Krew zostanie pobrana do badań przesiewowych funkcji i chemii wątroby po podaniu leku, jak również do wszystkich pomiarów związanych z wynikiem (lipidy, insulina/glukoza, markery stanu zapalnego). Pobrany zostanie również mocz do pomiarów skuteczności. U wszystkich kobiet zostanie wykonany test ciążowy z moczu. Pobrane zostaną próbki śliny i płytki nazębnej poddziąsłowej w celu oceny ewentualnych zmian w mikrobiomie jamy ustnej w wyniku leczenia. Biopsja tkanki tłuszczowej zostanie przeprowadzona jak powyżej.