Diagnóstico de precisión en enfermedad inflamatoria intestinal, terapia celular y trasplante (ensayo PREDICT) (PREDICT)

Hipótesis:

Hipótesis n.º 1: los investigadores plantean la hipótesis de que pueden definir los mecanismos moleculares responsables de la enfermedad inflamatoria intestinal (EII) y la EICH aguda gastrointestinal (GI) y diferenciarlos de otros trastornos inflamatorios mediante el uso de análisis inmunológicos avanzados que incluyen citometría de flujo, secuenciación profunda TCR y transcriptómica .

Hipótesis n.º 2: Los investigadores plantean además la hipótesis de que el análisis inmunológico basado en sistemas longitudinales permitirá la determinación específica del paciente de la evolución molecular de la EII, así como la EICH aguda y crónica, así como los defectos posteriores al trasplante en la inmunidad protectora, y determinará qué vías, cuando se perturba, puede causar enfermedad clínica. El descubrimiento de estas vías conducirá a mejores enfoques de diagnóstico, pronóstico y tratamiento, y a la toma de decisiones terapéuticas personalizadas para pacientes que se someten a un trasplante de células madre hematopoyéticas (HCT).

Hipótesis #3: Nuestra hipótesis es que podemos definir los mecanismos moleculares, las características inmunológicas fenotípicas y funcionales involucradas en distintos determinantes de las terapias celulares adoptivas, incluida la eficacia, la longevidad y la toxicidad asociadas con la terapia celular. La caracterización longitudinal de las terapias celulares y la respuesta inmune endógena que provocan utilizando análisis inmunológicos avanzados que incluyen citometría de flujo, espectrometría de masas, secuenciación profunda de TCR y transcriptómica unicelular permitirán la identificación y distinción de vías críticas para la eficacia y la toxicidad y habilitarán la modulación terapéutica posterior.

Hipótesis n.° 4: Presumimos que las diferencias en el microbioma intestinal de los pacientes con EII y los receptores de TCH desempeñan un papel importante en la gravedad de la enfermedad y los resultados clínicos generales en ambas enfermedades (p. bacteriemia, fiebres inexplicables, mortalidad). La caracterización longitudinal de las comunidades microbianas intestinales mediante la secuenciación de próxima generación permitirá la detección de cambios microbianos secuenciales que coincidan con los cambios clínicos observados. el descubrimiento de cambios significativos en el microbioma que se observan repetidamente con un resultado clínico particular conducirá a una mejor comprensión mecánica de su fisiopatología e informará futuros enfoques diagnósticos y preventivos.

Hipótesis n.° 5: Presumimos que la desregulación inmunitaria asociada con una amplia gama de trastornos alterará la respuesta inmunitaria a las vacunas, lo que agravará la susceptibilidad a enfermedades infecciosas en estas poblaciones. Específicamente, los receptores de trasplantes de órganos sólidos y HCT, así como los pacientes con antecedentes activos o recientes de neoplasias malignas o enfermedades autoinmunes pueden tener respuestas reducidas de células T y B a la vacunación contra el SARS-CoV-2 debido al efecto de la fisiopatología de la enfermedad o los regímenes de tratamiento en función inmune. El análisis serológico completo, la citometría de flujo de parámetros altos y la secuenciación del ARN de células T y B permitirán el análisis longitudinal de los títulos de anticuerpos neutralizantes y la expansión, fenotipo, diversidad y supervivencia de células T y B específicas de antígeno después de la vacunación en estas poblaciones de pacientes, así como en controles sanos relacionados y no relacionados. Estos datos proporcionarán una visión mecánica de cómo el deterioro inmunológico en estos trastornos contribuye a las respuestas deficientes a las infecciones. Dado que el SARS-CoV-2 es un patógeno al que gran parte de la población sigue siendo ingenua, esto representa una oportunidad única para estudiar la respuesta inmunitaria a un nuevo desafío en personas inmunodeprimidas. Además, estos hallazgos informarán las pautas de salud pública sobre cómo mejorar las medidas para proteger a las poblaciones vulnerables de enfermedades prevenibles.

Objetivos:

Objetivo específico n.º 1: identificar los mecanismos específicos de la EII y la EICH aguda gastrointestinal y diferenciarlos de otros trastornos inflamatorios.

Objetivo 1: Realizar citometría de flujo, secuenciación profunda de TCR y análisis de transcriptoma completo en células T purificadas de muestras de tejido GI tomadas de pacientes que se someten a endoscopia por presunta EICH GI, enfermedad inflamatoria intestinal (EII) y enfermedad gastrointestinal funcional (FGID).

Objetivo 2: Realizar citometría de flujo, secuenciación profunda TCR y análisis de transcriptoma en células T de sangre periférica en el momento de la endoscopia en pacientes diagnosticados con GI GVHD, IBD y FGID.

Objetivo específico n.° 2: Caracterizar la desregulación inmunológica responsable de la EII, la EICH aguda, la EICH crónica y los defectos en la inmunidad protectora en pacientes sometidos a TCH.

Objetivo 1: realizar un análisis inmunitario longitudinal en células T y células B purificadas de pacientes con EII y aquellos sometidos a TCH alogénico. Para los pacientes de trasplante, compararemos la inmunidad de las células T y B en pacientes que desarrollan GVHD aguda y crónica, recaída y complicaciones infecciosas después del trasplante y compararemos con pacientes sin estas complicaciones.

Objetivo 2: Realizar análisis de microbioma longitudinalmente en pacientes con EII y sometidos a TCH para determinar el impacto de las alteraciones del microbioma en el desarrollo de complicaciones postrasplante.

Objetivo específico n.° 3: Identificar los mecanismos inmunológicos moleculares y celulares involucrados en la determinación de la respuesta clínica a las terapias celulares y distinguir las vías críticas para una respuesta antitumoral exitosa de aquellas involucradas en los efectos adversos.

Objetivo 1: Caracterizar el producto celular antes de la administración y rastrear su distribución, cinética, persistencia y función longitudinalmente in vivo en la sangre periférica del paciente y, cuando corresponda, en la médula ósea, el LCR y otros tejidos, utilizando la detección de transgenes basada en qPCR (si corresponde), citometría de flujo, citometría de masas, secuenciación profunda de TCR y análisis de transcriptoma completo en células T y otras células inmunitarias contenidas en el producto celular.

Objetivo 2: interrogar longitudinalmente la interacción de la terapia celular con el sistema inmunitario endógeno y delinear el papel de la respuesta inmunitaria endógena en la eficacia, persistencia y toxicidad de la terapia celular, utilizando citometría de flujo, citometría de masas, secuenciación profunda de TCR, análisis de transcriptoma completo sobre células inmunitarias endógenas y análisis de factores solubles y anticuerpos.

Objetivo específico n.º 4: Caracterizar la respuesta inmunitaria adaptativa específica de antígeno a la vacunación contra el SARS-CoV-2 en pacientes con desregulación inmunitaria debido a cáncer, trasplante o enfermedad autoinmune e identificar los mecanismos subyacentes a la generación alterada de inmunidad duradera.

Objetivo 1: realizar un análisis longitudinal completo de la inmunidad serológica antes y después de la vacunación, incluidas las vacunas de refuerzo, en pacientes y controles sanos, incluida la evaluación de los niveles de anticuerpos específicos contra el SARS-CoV-2 y los títulos de anticuerpos neutralizantes.

Objetivo 2: utilizar la citometría de flujo de parámetros altos, la secuenciación de ARN de células individuales (scRNAseq) y el análisis del repertorio de células T y B para caracterizar el desarrollo longitudinal de la memoria de células T y B específicas de antígeno al SARS-CoV-2 después de la vacunación y las vacunas de refuerzo posteriores en pacientes y controles sanos.

Objetivo 3: Evaluar la capacidad de los sueros y los anticuerpos clonados de los pacientes para responder a la unión y neutralización de las variantes virales, en comparación con los controles sanos.

Antecedentes y significado:

EII: La enfermedad inflamatoria intestinal (EII), que incluye la enfermedad de Crohn (CD) y la colitis ulcerosa (UC), es una afección autoinmune gastrointestinal (GI) compleja crónica que afecta a 1,4 millones de personas en los Estados Unidos1. La incidencia y la prevalencia tanto de la EC como de la CU aumentan con el tiempo y abarcan áreas más grandes del mundo1,2. Además, la EII pediátrica comprende el 25 % de todas las EII diagnosticadas, lo que relega al niño a una vida de enfermedad gastrointestinal y exposición a la inmunosupresión, especialmente durante un período destinado al crecimiento y desarrollo. A pesar de la investigación en curso sobre la patogénesis y las anomalías genéticas, el mecanismo detrás del desarrollo y la progresión de la EII no se comprende bien. Las terapias estándar aún se basan en esteroides, otros inmunosupresores no específicos (como metotrexato y azatioprina) y productos biológicos anti-TNF. Aunque están surgiendo terapias más nuevas, como agentes que bloquean las citoquinas y el tráfico de leucocitos, no se han identificado tratamientos universalmente exitosos. Por lo tanto, las formas recurrentes de EII continúan provocando un compromiso sistémico en la capacidad de absorción nutricional, anemia y, a menudo, la necesidad de intervenciones quirúrgicas. Descifrar los mecanismos que impulsan los subtipos únicos de EII (incluso dentro de la CU y la EC) y luego optimizar el tratamiento en función de la desregulación sistémica subyacente es una necesidad crítica no satisfecha en el campo. Si bien el mecanismo inmunitario subyacente de la EII sigue sin determinarse, existen datos significativos que sugieren que la EII puede representar una respuesta inmunitaria inapropiada hacia los antígenos propios y la microbiota comensal en un huésped genéticamente susceptible3. Por lo tanto, los modelos de colitis murina sugieren que la inflamación de la mucosa es el resultado de respuestas patológicas de células T auxiliares (Th), junto con defectos de las células reguladoras. Estos datos han surgido de experimentos en ratones deficientes en IL-24, ratones deficientes en IL-105, TGF-beta6 y ratones transgénicos negativos dominantes de TGF-betaGRII7. La patogenia también incluye una exageración en las respuestas de las células efectoras, que han surgido de experimentos en ratones transgénicos Stat48 y ratones mutantes TNFARE9. Más recientemente, el análisis de citoquinas humanas sugiere que, a pesar de las similitudes clínicas, cada subtipo de EII muestra perfiles de citoquinas distintivos10. Aunque los estudios iniciales han comenzado a dirigirse a vías de células T efectoras específicas11, la aplicación de la transcriptómica de órganos diana está en pañales y las vías específicas de destino aún son difíciles de alcanzar.

HCT: El HCT alogénico es un tratamiento eficaz para pacientes con enfermedades hematológicas malignas y no malignas. Sin embargo, este tratamiento se complica con altas tasas de morbilidad y mortalidad que limitan su aplicación más amplia. Las principales causas de morbilidad y mortalidad posteriores al trasplante incluyen la EICH aguda y crónica, la recaída y las enfermedades infecciosas. El objetivo del ensayo PREDICT es aplicar un enfoque de sistemas para comprender los mecanismos que impulsan estas complicaciones, de modo que se puedan diseñar estrategias de tratamiento basadas en la evidencia.

EICH aguda: la EICH aguda está mediada por células T alorreactivas derivadas del donante que se activan y provocan citotoxicidad contra las células huésped12,13, así como daño tisular mediado por citoquinas. La EICH aguda de moderada a grave puede ocurrir en hasta el 60 % de los pacientes sometidos a TCH y las formas más graves se han asociado con tasas de mortalidad >50 %14-17. Los sitios más comunes del daño tisular inmunomediado son el hígado, la piel y el tracto gastrointestinal (GI). La EICH GI ocurre en el 40-50% de los pacientes con TCH y es la principal causa de morbilidad y mortalidad por esta enfermedad17.

El diagnóstico de GVHD GI se deriva de los hallazgos clínicos e histopatológicos. La GVHD puede ocurrir tanto en el tracto GI superior como en el inferior y provocar síntomas de diarrea, dolor abdominal, náuseas, vómitos y/o anorexia12. Los criterios diagnósticos histopatológicos para la EICH GI incluyen la identificación de apoptosis de las células de las criptas, destrucción de las criptas y/o denudación de la mucosa18. Desafortunadamente, la gravedad de la GVHD en la histología está poco correlacionada con el curso clínico de la enfermedad.

Si bien la GVHD GI es una complicación común después de un TCH, aún quedan muchas barreras para su diagnóstico consistente y preciso. En primer lugar, el diagnóstico depende de la toma de muestras de tejido adecuada. Las lesiones visibles están frecuentemente ausentes19 y los hallazgos endoscópicos pueden ser difusos e inespecíficos. Tampoco hay consenso sobre la ubicación óptima del tracto GI para las biopsias o el número de biopsias necesarias para asegurar un diagnóstico. También existe una discordancia frecuente entre las muestras de biopsia del tracto gastrointestinal superior e inferior20. En segundo lugar, los pacientes que se presentan temprano en el curso de la EICH pueden tener hallazgos histopatológicos sutiles que pueden pasarse por alto o que aún no están presentes. Al comienzo de la EICH, es posible que se observen pocas células apoptóticas y es posible que aún no se hayan producido la pérdida de criptas y el daño de la mucosa18. Por último, también existen factores de confusión que pueden conducir a un diagnóstico erróneo de la EICH, que incluyen la toxicidad relacionada con el régimen de acondicionamiento, las infecciones concomitantes y los medicamentos que pueden causar inflamación focal del tracto GI. En los primeros 20 días posteriores a un régimen de acondicionamiento mieloablativo, se puede observar una apoptosis difusa que simula la EICH21 aguda. Las infecciones por Clostridium difficile y citomegalovirus también pueden tener presentaciones clínicas e histopatológicas similares22. También se ha encontrado que el uso de micofenolato mofetilo23 e inhibidores de la bomba de protones24 está asociado con la apoptosis del tracto GI que puede diagnosticarse erróneamente como GVHD. Todos estos factores conducen al alto grado de variabilidad entre observadores en el diagnóstico histológico de la EICH18,25 ya la escasa correlación con las observaciones clínicas, lo que ilustra la necesidad de métodos de diagnóstico más sensibles y específicos.

Ha habido avances recientes en la identificación de biomarcadores en GVHD que tienen importancia diagnóstica y pronóstica. IL-8, receptor alfa de IL-2, receptor 1 del factor de necrosis tumoral (TNF-1), factor de crecimiento de hepatocitos (HGF), elafina, 3-alfa derivado de islotes en regeneración (reg-3alfa), TIM3, IL-6 , ST2, factor activador de células B (BAFF), IL-33, CXCL10 y CXCL11 se han encontrado útiles para predecir el desarrollo de GVHD26-28. Si bien estos biomarcadores han sido identificados, no han sido ampliamente validados y aún no se han adoptado clínicamente como una guía para modificar el tratamiento. Además, los biomarcadores descubiertos hasta el momento son a menudo el resultado de perturbaciones de la vía aguas abajo y descubrir la desregulación aguas arriba que ocurre antes en el curso de la enfermedad puede ser valioso para desarrollar modelos de diagnóstico o pronóstico que podrían conducir a ensayos destinados a alterar el curso natural de la enfermedad. la enfermedad.

Nuestro grupo ha demostrado previamente que mediante el uso de análisis inmunológicos avanzados que incluyen citometría de flujo y análisis de transcriptomas completos, podemos identificar vías moleculares activas en GVHD29-31 previamente no reconocidas. Anticipamos que al utilizar un enfoque de inmunología de sistemas en pacientes con EICH aguda, podremos identificar vías que tengan valor diagnóstico y pronóstico. Esto puede mejorar nuestra capacidad de diagnóstico y, lo que es más importante, permitirnos individualizar el manejo de los pacientes en función de sus perfiles inmunológicos específicos.

EICH crónica: la EICH crónica ocurre en el 40-60 % de los pacientes trasplantados32-35 y la incidencia de esta enfermedad ha aumentado en las últimas 2 décadas36 La EICH crónica causa una mortalidad significativa y, en aquellos pacientes que sobreviven, puede tener efectos profundos en la calidad de vida37 -40. A pesar de la mayor frecuencia de GVHD crónica, todavía falta un diagnóstico preciso y una terapia basada en evidencia. Por lo tanto, aunque se han identificado biomarcadores de EICH crónica, aún no se ha encontrado ninguno que califique para su aplicación clínica41. Además, estos biomarcadores a menudo representan perturbaciones de la ruta en la etapa final y pueden ser el resultado de inflamación no específica y daño tisular, así como mecanismos contrarreguladores. Además de los desafíos en el diagnóstico, también existen importantes desafíos en el tratamiento: por lo tanto, el tratamiento de la GVHD crónica no ha cambiado significativamente en las últimas décadas. La terapia de primera línea sigue siendo corticosteroides con o sin inhibidores de la calcineurina (CNI) 42-44 y, lamentablemente, aproximadamente el 50 % de los pacientes fallarán y requerirán un tratamiento de segunda línea 45,46 con una supervivencia libre de fallas a los 2 años después de la terapia de segunda línea que es solo del 25 %. 47. Estos datos subrayan las importantes necesidades insatisfechas en este campo, tanto para el diagnóstico molecular como para los paradigmas de tratamiento basados ​​en la evidencia.

Inmunidad protectora: además de los desafíos de la EICH aguda y crónica, los pacientes que se someten a un TCH y aquellos con EII también enfrentan otras toxicidades, muchas de las cuales están relacionadas con la reconstitución inmunitaria disfuncional después del trasplante. Sin embargo, aunque la fenomenología de los muchos defectos en la inmunidad protectora (tanto contra patógenos infecciosos como contra la recaída de la leucemia) está bien documentada, los mecanismos moleculares causales aún se desconocen. Para abordar estas preguntas, nuestro grupo y otros han comenzado a realizar evaluaciones detalladas de la reconstitución inmunológica después de un TCH, incluida la aplicación de nuevas tecnologías de secuenciación profunda del receptor de células T (TCR) y del receptor de células B (BCR)30,48-54. Estas tecnologías permiten la investigación de la amplitud y profundidad de la reconstitución inmunitaria posterior al trasplante a un nivel de detalle molecular que antes no era posible y prometen profundizar nuestra comprensión del impacto de los patógenos infecciosos en la salud inmunitaria global y la reconstitución inmunitaria. La aplicación generalizada de estas tecnologías y su intersección con la evaluación detallada del fenotipo y la función inmunitaria pueden proporcionar nuevos conocimientos sobre el estado de la salud inmunitaria en los pacientes trasplantados y prometen identificar a los pacientes que necesitan intervenciones novedosas para mejorar su estado postrasplante. reconstitución inmune.

El objetivo del ensayo PREDICT es aplicar un enfoque de biología de sistemas para permitir diagnósticos de precisión para los resultados inmunológicos clave posteriores al trasplante. Este enfoque profundizará nuestra comprensión de los mecanismos moleculares que provocan las complicaciones postrasplante más mortales y servirá como una plataforma crítica sobre la cual diseñar paradigmas de tratamiento basados ​​en evidencia para pacientes trasplantados.

Terapia celular: las nuevas terapias celulares adoptivas están entrando cada vez más en ensayos clínicos y están disponibles como productos biológicos aprobados por la FDA, lo que proporciona una opción terapéutica para pacientes previamente refractarios. Este campo amplio y emocionante incluye células T receptoras de antígenos quiméricos (CAR) dirigidas contra una variedad de antígenos55, células T modificadas genéticamente para expresar TCR56,57, células NK estimuladas por citocinas58, así como enfoques de vacunas tumorales con tumores endógenos e irradiados. muestras59 o células inmunitarias pulsadas con antígeno tumoral.60 Los linfocitos T quiméricos con receptores de antígenos han dado lugar a respuestas dramáticas, particularmente en pacientes con tumores malignos de linfocitos B CD19+61-64, lo que ha llevado a la aprobación de varios productos por parte de la FDA. Si bien inicialmente se pueden lograr remisiones clínicas sin precedentes, el enfoque con frecuencia está limitado por la durabilidad de la respuesta y la persistencia de las células CAR T con una SSC del 50 % a los 12 meses después de la infusión61, los mecanismos de escape del tumor65 y la toxicidad significativa que involucra el síndrome de liberación de citoquinas, la toxicidad neurológica66 . En el contexto de la terapia con células CAR T, se han identificado factores clave para una aplicación exitosa e incluyen la incorporación de un mecanismo de señalización coestimulador67,68, la asociación de la expansión de células CAR T in vivo con la respuesta69 y la contribución de subgrupos fenotípicos de células T con capacidad para proliferar y persistir a largo plazo70. Además, se han obtenido conocimientos importantes sobre las funciones de IL-6 e IL-1 en el síndrome de liberación de citoquinas y la neurotoxicidad71,72 y la contribución de un infiltrado de células pan-T y altos niveles de citoquinas en el SNC como mediadores de la neurotoxicidad73. nuestro grupo y otros. Sin embargo, existe una importante necesidad insatisfecha de aplicar un enfoque sistemático que cuestione los determinantes de una respuesta exitosa, la toxicidad, la interacción con el sistema inmunitario endógeno y los efectos a corto y largo plazo de las intervenciones destinadas a reducir la toxicidad, como la administración de IL6R- antagonista Tocilizumab o bloqueador de IL-174.

En este estudio, nuestro objetivo es interrogar sistemáticamente las características de los productos de terapia celular, la evolución después de la administración in vivo y el comportamiento en diferentes compartimentos, como sangre periférica, médula ósea, SNC y, si corresponde, tejidos y su interacción con el sistema inmunitario endógeno. Se empleará la transcriptómica de células individuales, junto con la secuenciación TCR (cuando corresponda, la secuenciación BCR) y la caracterización fenotípica de las células inmunitarias transferidas y endógenas, así como el análisis de los factores inmunitarios secretados, como citocinas, quimiocinas y anticuerpos en el plasma, y ​​se correlacionará con las respuestas clínicas. . Este enfoque de diagnóstico de precisión sistemático e imparcial permitirá la identificación de vías críticas que son comunes o distintas según la naturaleza del enfoque terapéutico celular, el objetivo y las entidades de la enfermedad y las toxicidades no deseadas asociadas o segregables. Esto informará de manera crítica el diseño racional futuro de la terapia celular e informará las posibles intervenciones terapéuticas después de la administración de la terapia celular.

Respuestas a la vacuna: un tema común entre los receptores de trasplantes de células madre y de órganos sólidos, los pacientes con cánceres actuales o anteriores y los pacientes con enfermedades autoinmunes o reumatológicas, incluida la EII, es la alteración de la regulación inmunitaria, que a menudo se ve agravada por el efecto de los tratamientos modificadores del sistema inmunitario. , incluida la radiación, la quimioterapia y la inmunosupresión a largo plazo. El 15% de los receptores de trasplantes de órganos sólidos son hospitalizados con una enfermedad prevenible con vacunas en los primeros cinco años después del trasplante a pesar de las medidas para inmunizar a estos pacientes (Feldman et al., 2019), lo que es consistente con estudios que muestran respuestas deficientes a las vacunas en estos pacientes (Madan et al., 2008; Mazzone et al., 2004). Los receptores de HCT responden en grados variables a la vacunación, pero no tienen la misma magnitud de respuesta que los controles sanos y pueden tener respuestas más alteradas si también tienen GVHD (Avetisyan et al., 2008; Shalabi et al., 2019). También se ha demostrado que los pacientes con enfermedades reumatológicas o autoinmunes tienen respuestas deficientes a vacunas particulares, especialmente si reciben agentes inmunomoduladores como el bloqueo de TNFalfa (Dell' Era et al., 2011). Los estudios de sobrevivientes de cáncer infantil sugieren que el deterioro inmunitario puede persistir más allá de la resolución de la enfermedad; Los sobrevivientes de leucemia pediátrica que no reciben HCT tienen una inmunidad humoral y adaptativa alterada al finalizar el tratamiento (Perkins et al., 2017; Top et al., 2020), y algunos pacientes no responden y otros pueden tener una disminución de la inmunidad (Nilsson et al. ., 2002; Top et al., 2020) a pesar de los intentos de revacunación. A medida que los esfuerzos de inmunización contra el SARS-CoV-2 se generalicen, la comprensión de la respuesta de la vacuna en pacientes inmunocomprometidos será fundamental para informar estrategias más efectivas para proteger a esta población de la COVID-19 grave, que se puede extrapolar a otros patógenos prevenibles por vacunación.

En este estudio, proponemos utilizar un enfoque sistemático para perfilar longitudinalmente las respuestas de células T y B humorales y específicas de antígeno después de la vacunación contra el SARS-CoV-2 en pacientes con una amplia gama de enfermedades inmunomodificadoras. Se recogerán muestras de sangre de los pacientes antes de la vacunación ya intervalos regulares después de la misma. Evaluaremos la durabilidad y la magnitud de las respuestas de anticuerpos a largo plazo mediante ELISA específicos de isotipo y ensayos de anticuerpos neutralizantes. La citometría de flujo de parámetros altos y el scRNAseq permitirán el fenotipado de alta resolución de células de memoria de células T y B específicas de antígeno, así como el análisis de repertorio, lo que puede afectar la probabilidad de escape inmunitario en pacientes vacunados. Finalmente, este estudio nos permitirá determinar si los anticuerpos clonados o el suero de pacientes con desregulación inmunitaria tienen menos capacidad para neutralizar las variantes virales, lo que nos permitirá comprender si la reducción de la diversidad clonal en los pacientes puede resultar en una menor protección contra las variantes virales.