Precisiediagnostiek bij inflammatoire darmaandoeningen, celtherapie en transplantatie (het PREDICT-onderzoek) (PREDICT)

Hypothesen:

Hypothese #1: De onderzoekers veronderstellen dat ze de moleculaire mechanismen kunnen definiëren die verantwoordelijk zijn voor inflammatoire darmziekte (IBD) en gastro-intestinale (GI) acute GVHD en deze kunnen onderscheiden van andere ontstekingsaandoeningen door gebruik te maken van geavanceerde immunologische analyse, waaronder flowcytometrie, TCR deep sequencing en transcriptomics .

Hypothese #2: De onderzoekers veronderstellen verder dat longitudinale, op systemen gebaseerde immunologische analyse de patiëntspecifieke bepaling van de moleculaire evolutie van IBD, evenals acute en chronische GVHD, evenals post-transplantatiedefecten in beschermende immuniteit mogelijk zal maken, en zal bepalen welke routes, wanneer verstoord, kan klinische ziekte veroorzaken. De ontdekking van deze routes zal leiden tot verbeterde diagnostische, prognostische en behandelingsbenaderingen, en tot gepersonaliseerde therapeutische besluitvorming voor patiënten die een hematopoëtische stamceltransplantatie (HCT) ondergaan.

Hypothese # 3: We veronderstellen dat we de moleculaire mechanismen, fenotypische en functionele immunologische kenmerken kunnen definiëren die betrokken zijn bij verschillende determinanten van adoptieve cellulaire therapieën, inclusief de werkzaamheid, levensduur en toxiciteit geassocieerd met cellulaire therapie. Longitudinale karakterisering van cellulaire therapieën en de endogene immuunrespons die ze opwekken met behulp van geavanceerde immunologische analyse, waaronder flowcytometrie, massaspectrometrie, TCR deep sequencing en single-cell transcriptomics, zal identificatie en onderscheid mogelijk maken van routes die cruciaal zijn voor werkzaamheid en toxiciteit en latere therapeutische modulatie mogelijk maken.

Hypothese #4: We veronderstellen dat verschillen in het darmmicrobioom van patiënten met IBD en ontvangers van HCT een belangrijke rol spelen in de ernst van de ziekte en de algehele klinische resultaten bij beide ziekten (bijv. bacteriëmie, onverklaarbare koorts, sterfte). De longitudinale karakterisering van de darmmicrobiële gemeenschappen door sequentiëring van de volgende generatie zal het mogelijk maken om sequentiële microbiële veranderingen te detecteren die samenvallen met waargenomen klinische veranderingen. de ontdekking van significante veranderingen in het microbioom die herhaaldelijk worden waargenomen met een bepaald klinisch resultaat, zal leiden tot een beter mechanistisch begrip van de pathofysiologie en toekomstige diagnostische en preventieve benaderingen informeren.

Hypothese #5: We veronderstellen dat immuunontregeling geassocieerd met een breed scala aan aandoeningen de immuunrespons op vaccins zal veranderen, waardoor de vatbaarheid voor infectieziekten in deze populaties toeneemt. In het bijzonder kunnen ontvangers van HCT- en solide-orgaantransplantaten, evenals patiënten met een actieve of recente geschiedenis van maligniteit of auto-immuunziekten, een verminderde T- en B-celrespons op SARS-CoV-2-vaccinatie hebben als gevolg van het effect van ziektepathofysiologie of behandelingsregimes op immuun functie. Uitgebreide serologische analyse, flowcytometrie met hoge parameters en T- en B-cel-RNA-sequencing zullen longitudinale analyse mogelijk maken van neutraliserende antilichaamtiters en antigeenspecifieke T- en B-celexpansie, fenotype, diversiteit en overleving na vaccinatie in deze patiëntenpopulaties, evenals in gerelateerde en niet-gerelateerde gezonde controles. Deze gegevens zullen mechanistisch inzicht verschaffen in hoe immuunstoornissen bij deze aandoeningen bijdragen aan slechte reacties op infecties. aangezien SARS-CoV-2 een ziekteverwekker is waarvoor een groot deel van de bevolking naïef blijft, biedt dit een unieke kans om de immuunrespons op een nieuwe uitdaging bij immuungecompromitteerde individuen te bestuderen. Bovendien zullen deze bevindingen de volksgezondheidsrichtlijnen informeren over hoe maatregelen ter bescherming van kwetsbare bevolkingsgroepen tegen vermijdbare ziekten kunnen worden verbeterd.

Doelstellingen:

Specifiek doel #1: De mechanismen identificeren die specifiek zijn voor IBD en GI acute GVHD en deze afbakenen van andere inflammatoire aandoeningen.

Doelstelling 1: Voer flowcytometrie, TCR deep sequencing en volledige transcriptoomanalyse uit op T-cellen die zijn gezuiverd uit GI-weefselmonsters van patiënten die endoscopie ondergaan voor vermoedelijke GI GVHD, inflammatoire darmziekte (IBD) en functionele gastro-intestinale ziekte (FGID).

Doelstelling 2: Voer flowcytometrie, TCR deep sequencing en transcriptoomanalyse uit op T-cellen uit het perifere bloed op het moment van endoscopie bij patiënten met de diagnose GI GVHD, IBD en FGID.

Specifiek doel #2: Karakteriseer de immunologische ontregeling die verantwoordelijk is voor IBD, acute GVHD, chronische GVHD en defecten in beschermende immuniteit bij patiënten die HCT ondergaan.

Doelstelling 1: Voer longitudinale immuunanalyse uit op T-cellen en B-cellen die zijn gezuiverd van patiënten met IBD en patiënten die allogene HCT ondergaan. Voor transplantatiepatiënten zullen we T- en B-celimmuniteit vergelijken bij patiënten die acute en chronische GVHD, terugval en infectieuze complicaties ontwikkelen na transplantatie en vergelijken met patiënten zonder deze complicaties.

Doelstelling 2: Longitudinaal microbioomanalyse uitvoeren bij patiënten met IBD en patiënten die HCT ondergaan om de impact van microbioomveranderingen op de ontwikkeling van complicaties na transplantatie te bepalen.

Specifiek doel #3: Identificeer de moleculaire en cellulaire immunologische mechanismen die betrokken zijn bij het bepalen van de klinische respons op cellulaire therapieën en onderscheid paden die cruciaal zijn voor een succesvolle antitumorrespons van die welke betrokken zijn bij bijwerkingen.

Doelstelling 1: Karakteriseer het cellulaire product voorafgaand aan toediening en volg de distributie, kinetiek, persistentie en functie longitudinaal in vivo in het perifere bloed van de patiënt en, indien van toepassing, beenmerg, CSF en andere weefsels, met behulp van op qPCR gebaseerde transgene detectie (indien van toepassing). flowcytometrie, massacytometrie, TCR deep sequencing en volledige transcriptoomanalyse op T-cellen en andere immuuncellen in het cellulaire product.

Doelstelling 2: Longitudinaal het samenspel van cellulaire therapie met het endogene immuunsysteem onderzoeken en de rol van de endogene immuunrespons in de werkzaamheid, persistentie en toxiciteit van cellulaire therapie afbakenen, met behulp van flowcytometrie, massacytometrie, TCR deep sequencing, volledige transcriptoomanalyse op endogene immuuncellen en analyse van oplosbare factoren en antilichamen.

Specifiek doel #4: Karakteriseer de antigeenspecifieke adaptieve immuunrespons op SARS-CoV-2-vaccinatie bij patiënten met immuunontregeling als gevolg van kanker, transplantatie of auto-immuunziekte en identificeer mechanismen die ten grondslag liggen aan een verminderde generatie van duurzame immuniteit.

Doelstelling 1: Uitgebreide longitudinale analyse uitvoeren van serologische immuniteit vóór en na vaccinatie, inclusief boostervaccins, bij patiënten en gezonde controles, inclusief beoordeling van SARS-CoV-2-specifieke antilichaamniveaus en neutraliserende antilichaamtiters.

Doelstelling 2: gebruik flowcytometrie met hoge parameters, single cell RNA sequencing (scRNAseq) en analyse van het T- en B-celrepertoire om de longitudinale ontwikkeling van antigeenspecifiek T- en B-celgeheugen tot SARS-CoV-2 na vaccinatie en daaropvolgende boostervaccins te karakteriseren bij patiënten en gezonde controles.

Doelstelling 3: Beoordeel het vermogen van sera en gekloonde antilichamen van patiënten om te reageren op het binden en neutraliseren van virale varianten, in vergelijking met dat van gezonde controles.

Achtergrond en betekenis:

IBD: Inflammatoire darmaandoening (IBD), die de ziekte van Crohn (CD) en colitis ulcerosa (UC) omvat, is een chronische complexe gastro-intestinale (GI) auto-immuunziekte die 1,4 miljoen mensen in de Verenigde Staten treft1. De incidentie en prevalentie van zowel CD als UC neemt in de loop van de tijd toe en omvat grotere delen van de wereld1,2. Bovendien omvat pediatrische IBD 25% van alle gediagnosticeerde IBD, waardoor het kind een leven lang last heeft van gastro-intestinale aandoeningen en blootstelling aan immunosuppressie, vooral tijdens een periode die bedoeld is voor groei en ontwikkeling. Ondanks lopend onderzoek naar de pathogenese en genetische afwijkingen, wordt het mechanisme achter de ontwikkeling en progressie van IBD niet goed begrepen. Standaardtherapieën zijn nog steeds afhankelijk van steroïden, andere niet-specifieke immunosuppressie (zoals methotrexaat en azathioprine) en anti-TNF-biologische middelen. Hoewel er nieuwere therapieën in opkomst zijn, zoals middelen die cytokines en de handel in leukocyten blokkeren, zijn er geen universeel succesvolle behandelingen geïdentificeerd. Aldus blijven recidiverende vormen van IBD leiden tot systemische compromissen in het voedingsabsorptievermogen, bloedarmoede en vaak tot de noodzaak van chirurgische ingrepen. Het ontcijferen van de mechanismen die de unieke subtypes van IBD aandrijven (zelfs binnen CU en CD) en vervolgens het optimaliseren van de behandeling op basis van de onderliggende systemische ontregeling is een kritieke onvervulde behoefte in het veld. Hoewel het onderliggende immuunmechanisme van IBD onbepaald blijft, zijn er significante gegevens die suggereren dat IBD een ongepaste immuunrespons kan vertegenwoordigen tegen eigen antigenen en commensale microbiota in een genetisch gevoelige gastheer3. Colitismodellen bij muizen suggereren dus dat mucosale ontsteking het gevolg is van pathologische T-helper-(Th)-celreacties, samen met regulerende celdefecten. Deze gegevens zijn voortgekomen uit experimenten met IL-2-deficiënte muizen4, IL-10-deficiënte muizen5, TGF-beta6 en TGF-betaGRII dominante negatieve transgene muizen7. De pathogenese omvat ook een overdrijving van effectorcelresponsen, die naar voren zijn gekomen uit experimenten met Stat4-transgene muizen8 en TNFARE-mutante muizen9. Meer recentelijk suggereert menselijke cytokine-analyse dat ondanks klinische overeenkomsten elk subtype van IBD onderscheidende cytokineprofielen vertoont. Hoewel initiële onderzoeken zijn begonnen om zich te richten op specifieke effector-T-celroutes11, staat de toepassing van transcriptomics van doelorganen nog in de kinderschoenen en zijn individuele targetbare routes nog ongrijpbaar.

HCT: Allogene HCT is een effectieve behandeling voor patiënten met kwaadaardige en niet-kwaadaardige hematologische aandoeningen. Deze behandeling is echter ingewikkeld met hoge morbiditeit en mortaliteit die de bredere toepassing ervan beperken. De belangrijkste oorzaken van morbiditeit en mortaliteit na transplantatie zijn acute en chronische GVHD, terugval en infectieziekte. Het doel van de PREDICT-studie is om een ​​systeembenadering toe te passen om inzicht te krijgen in de mechanismen die deze complicaties veroorzaken, zodat evidence-based behandelingsstrategieën kunnen worden ontwikkeld.

Acute GVHD: Acute GVHD wordt gemedieerd doordat van donor afkomstige allo-reactieve T-cellen worden geactiveerd en resulteren in cytotoxiciteit tegen gastheercellen12,13 evenals door cytokine gemedieerde weefselbeschadiging. Matige tot ernstige acute GVHD kan voorkomen bij tot 60% van de patiënten die HCT ondergaan en de meer ernstige vormen zijn in verband gebracht met sterftecijfers >50%14-17. De meest voorkomende plaatsen van immuungemedieerde weefselbeschadiging zijn de lever, de huid en het maagdarmkanaal (GI). GI GVHD komt voor bij 40-50% van de HCT-patiënten en is de belangrijkste oorzaak van morbiditeit en mortaliteit door deze ziekte17.

De diagnose van GI GVHD is afgeleid van klinische en histopathologische bevindingen. GVHD kan voorkomen in zowel het bovenste als het onderste deel van het maagdarmkanaal, wat leidt tot symptomen van diarree, buikpijn, misselijkheid, braken en/of anorexia12. Histopathologische diagnostische criteria voor GI GVHD omvatten identificatie van apoptose van cryptecellen, vernietiging van crypten en/of ontbloten van slijmvliezen18. Helaas is de ernst van GVHD op histologie slecht gecorreleerd met het klinische beloop van de ziekte.

Hoewel GI GVHD een veel voorkomende complicatie is na HCT, blijven er veel belemmeringen voor een consistente en nauwkeurige diagnose. Ten eerste is de diagnose afhankelijk van geschikte weefselbemonstering. Zichtbare laesies zijn vaak afwezig19 en endoscopische bevindingen kunnen diffuus en niet-specifiek zijn. Er is ook geen consensus over de optimale locatie van het maagdarmkanaal voor biopsieën of het aantal biopsieën dat nodig is om een ​​diagnose te stellen. Er is ook vaak onenigheid tussen biopsiespecimens van het bovenste en onderste deel van het maagdarmkanaal20. Ten tweede kunnen patiënten die zich vroeg in de loop van GVHD presenteren, subtiele histopathologische bevindingen hebben die gemist of nog niet aanwezig kunnen zijn. Bij het begin van GVHD kunnen weinig apoptotische cellen worden gezien en kan er nog crypteverlies en slijmvliesbeschadiging zijn opgetreden18. Ten slotte zijn er ook verstorende factoren die kunnen leiden tot een verkeerde diagnose van GVHD, waaronder conditioneringsregime-gerelateerde toxiciteit, bijkomende infecties en medicijnen die allemaal een focale ontsteking van het maagdarmkanaal kunnen veroorzaken. In de eerste 20 dagen na een myeloablatief conditioneringsregime kan diffuse apoptose worden gezien die acute GVHD nabootst21. Clostridium difficile- en cytomegalovirusinfecties kunnen ook vergelijkbare klinische en histopathologische presentaties hebben22. Het gebruik van mycofenolaatmofetil23 en protonpompremmers24 is ook in verband gebracht met apoptose van het maagdarmkanaal, wat ten onrechte kan worden gediagnosticeerd als GVHD. Al deze factoren leiden tot de hoge mate van variabiliteit tussen waarnemers bij de histologische diagnose van GVHD18,25 en een slechte correlatie met de klinische waarnemingen, wat de behoefte aan meer gevoelige en specifieke diagnosemethoden illustreert.

Er zijn recente vorderingen gemaakt bij de identificatie van biomarkers in GVHD die diagnostische en prognostische betekenis hebben. IL-8, IL-2-receptor-alfa, tumornecrosefactor-receptor-1 (TNF-1), hepatocytgroeifactor (HGF), elafin, regenererende van eilandje afgeleide 3-alfa (reg-3alpha), TIM3, IL-6 , ST2, B-cel activerende factor (BAFF), IL-33, CXCL10 en CXCL11 blijken allemaal nuttig te zijn bij het voorspellen van de ontwikkeling van GVHD26-28. Hoewel deze biomarkers zijn geïdentificeerd, zijn ze nog niet uitgebreid gevalideerd en moeten ze nog klinisch worden toegepast als richtlijn om de behandeling te veranderen. Bovendien zijn de tot nu toe ontdekte biomarkers vaak het resultaat van verstoringen in het stroomafwaartse pad en het ontdekken van de stroomopwaartse ontregeling die eerder in het verloop van de ziekte optreedt, kan waardevol zijn bij het ontwikkelen van diagnostische of prognostische modellen die kunnen leiden tot proeven gericht op het veranderen van het natuurlijke verloop van de ziekte. de ziekte.

Onze groep heeft eerder aangetoond dat we door gebruik te maken van geavanceerde immunologische analyse, waaronder flowcytometrie en volledige transcriptoomanalyse, voorheen niet-herkende moleculaire routes die actief zijn in GVHD29-31 kunnen identificeren. We verwachten dat we door gebruik te maken van een systeemimmunologische benadering bij patiënten met acute GVHD, paden kunnen identificeren die diagnostische en prognostische waarde hebben. Dit kan onze diagnostische capaciteit vergroten en, belangrijker nog, ons in staat stellen om de behandeling van patiënten te individualiseren op basis van hun specifieke immunologische profielen.

Chronische GVHD: CGVHD komt voor bij 40-60% van de transplantatiepatiënten32-35 waarbij de incidentie van deze ziekte in de afgelopen 2 decennia is gestegen36 chronische GVHD veroorzaakt een aanzienlijke mortaliteit, en bij de patiënten die overleven, kan dit leiden tot ingrijpende gevolgen voor de kwaliteit van leven37 -40. Ondanks de toegenomen frequentie van chronische GVHD, ontbreekt het nog steeds aan een nauwkeurige diagnose en evidence-based therapie. Dus hoewel er chronische GVHD-biomarkers zijn geïdentificeerd, zijn er nog geen die in aanmerking komen voor klinische toepassing41. Bovendien vertegenwoordigen deze biomarkers vaak verstoringen in het eindstadium van het pad en kunnen ze het gevolg zijn van niet-specifieke ontsteking en weefselbeschadiging, evenals contraregulerende mechanismen. Naast de uitdagingen bij de diagnose zijn er ook aanzienlijke behandelingsuitdagingen: de behandeling van chronische GVHD is de afgelopen decennia dus niet significant veranderd. Eerstelijnstherapie blijft corticosteroïden met of zonder calcineurineremmers (CNI's)42-44 en helaas zal ongeveer 50% van de patiënten falen en tweedelijnsbehandeling nodig hebben45,46 waarbij de faalvrije overleving na 2 jaar na tweedelijnstherapie slechts 25% is 47. Deze gegevens onderstrepen de aanzienlijke onvervulde behoeften op dit gebied, zowel voor moleculaire diagnostiek als voor evidence-based behandelingsparadigma's.

Beschermende immuniteit: Naast de uitdagingen van acute en chronische GVHD, worden patiënten die HCT ondergaan en patiënten met IBD ook geconfronteerd met andere toxiciteiten, waarvan vele verband houden met disfunctionele immuunreconstitutie na transplantatie. Hoewel de fenomenologie van de vele defecten in beschermende immuniteit (zowel tegen infectieuze pathogenen als tegen terugval van leukemie) goed gedocumenteerd is, blijven de oorzakelijke moleculaire mechanismen onbekend. Om deze vragen te beantwoorden, zijn onze groep en anderen begonnen met het uitvoeren van gedetailleerde beoordelingen van immunologische reconstitutie na HCT, inclusief de toepassing van nieuwe T-celreceptor (TCR) en B-celreceptor (BCR) deep-sequencing-technologieën30,48-54. Deze technologieën maken het mogelijk om de breedte en diepte van immuunreconstitutie na transplantatie te onderzoeken op een niveau van moleculair detail dat voorheen niet mogelijk was, en houden de belofte in om ons begrip van de impact van infectieuze pathogenen op de wereldwijde immuungezondheid en immuunreconstitutie te verdiepen. De wijdverbreide toepassing van deze technologieën, en hun kruising met gedetailleerde beoordeling van het fenotype en de functie van het immuunsysteem, kan nieuwe inzichten opleveren over de toestand van de immuungezondheid bij transplantatiepatiënten, en houdt de belofte in om patiënten te identificeren die nieuwe interventies nodig hebben om hun post-transplantatie te verbeteren. immuun reconstitutie.

Het doel van de PREDICT-studie is om een ​​systeembiologische benadering toe te passen om nauwkeurige diagnostiek mogelijk te maken voor de belangrijkste immunologische uitkomsten na transplantatie. Deze aanpak zal ons begrip van de moleculaire mechanismen die de meest dodelijke complicaties na transplantatie veroorzaken, verdiepen en dienen als een cruciaal platform waarop we evidence-based behandelingsparadigma's voor transplantatiepatiënten kunnen ontwerpen.

Cellulaire therapie: nieuwe adoptieve celtherapieën worden steeds vaker in klinische onderzoeken opgenomen en zijn beschikbaar als door de FDA goedgekeurde biologische geneesmiddelen, waardoor ze een therapeutische optie bieden voor voorheen refractaire patiënten. Dit brede en opwindende gebied omvat chimere-antigeenreceptor (CAR)-T-cellen gericht tegen een verscheidenheid aan antigenen55, T-cellen die genetisch gemodificeerd zijn om TCR's tot expressie te brengen56,57, cytokine-gestimuleerde NK-cellen58, evenals benaderingen van tumorvaccins met endogene, bestraalde tumorcellen. monsters59 of immuuncellen gepulseerd met tumorantigeen.60 Chimere antigeen-receptor-T-cellen hebben geleid tot dramatische reacties, vooral bij patiënten met CD19+ B-cel maligniteiten61-64, wat heeft geleid tot FDA-goedkeuring van verschillende producten. Hoewel aanvankelijk ongekende klinische remissies kunnen worden bereikt, wordt de aanpak vaak beperkt door de duurzaamheid van de respons en CAR T-celpersistentie met een EFS van 50% 12 maanden na infusie61, tumorontsnappingsmechanismen65 en significante toxiciteit met cytokine-afgiftesyndroom, neurologische toxiciteit66 . In de context van CAR T-celtherapie zijn sleutelfactoren voor succesvolle toepassing geïdentificeerd, waaronder de integratie van een co-stimulerend signaleringsmechanisme67,68, associatie van in vivo CAR T-celuitbreiding met respons69 en bijdrage van fenotypische T-celsubgroepen met het vermogen om te prolifereren en langdurig aanhouden70. Bovendien zijn belangrijke inzichten verkregen in de rol van IL-6 en IL-1 bij het cytokine-afgiftesyndroom en neurotoxiciteit71,72 en de bijdrage van een pan-T-celinfiltraat en hoge cytokineniveaus in het CZS als mediatoren van neurotoxiciteit73. onze groep en anderen. Er is echter een aanzienlijke onvervulde behoefte aan een systematische aanpak waarbij de determinanten van een succesvolle respons, toxiciteit, interactie met het endogene immuunsysteem en korte- en langetermijneffecten van interventies gericht op het verminderen van toxiciteit, zoals toediening van de IL6R- antagonist Tocilizumab of IL-1 blokkade74.

In deze studie willen we systematisch de kenmerken van celtherapieproducten, evolutie na toediening in vivo en gedrag in verschillende compartimenten zoals perifeer bloed, beenmerg, CZS en indien van toepassing weefsels en hun wisselwerking met het endogene immuunsysteem onderzoeken. Single cell transcriptomics, gekoppeld aan TCR-sequencing (indien van toepassing BCR-sequencing) en fenotypische karakterisering van overgedragen en endogene immuuncellen, evenals analyse van uitgescheiden immuunfactoren zoals cytokines, chemokines en antilichamen in het plasma zullen worden gebruikt en gecorreleerd met klinische reacties . Deze onbevooroordeelde, systematische precisie-diagnostische benadering zal de identificatie mogelijk maken van kritieke paden die gemeenschappelijk of verschillend zijn, afhankelijk van de aard van de celtherapeutische benadering, doel- en ziekte-entiteiten en geassocieerd of gescheiden van ongewenste toxiciteiten. Dit zal het toekomstige rationele ontwerp van cellulaire therapieën kritisch informeren en mogelijke therapeutische interventies informeren na toediening van celtherapie.

Vaccinreacties: Een veelvoorkomend thema bij ontvangers van stamceltransplantaten en solide-orgaantransplantaties, patiënten met huidige of eerdere maligniteiten en patiënten met auto-immuun- of reumatologische aandoeningen, waaronder IBD, is verminderde immuunregulatie, die vaak wordt verergerd door het effect van immuunmodificerende behandelingen , inclusief bestraling, chemotherapie en langdurige immunosuppressie. 15% van de ontvangers van solide-orgaantransplantaten wordt in de eerste vijf jaar na transplantatie in het ziekenhuis opgenomen met een door vaccinatie te voorkomen ziekte, ondanks maatregelen om deze patiënten te immuniseren (Feldman et al., 2019). deze patiënten (Madan et al., 2008; Mazzone et al., 2004). HCT-ontvangers reageren in wisselende mate op vaccinatie, maar vertonen niet dezelfde mate van respons als bij gezonde controles, en kunnen verder gewijzigde reacties hebben als ze ook GVHD hebben (Avetisyan et al., 2008; Shalabi et al., 2019). Van patiënten met reumatologische of auto-immuunziekte is ook aangetoond dat ze een verminderde respons hebben op bepaalde vaccins, vooral als ze immunomodulerende middelen gebruiken zoals TNFalpha-blokkade (Dell' Era et al., 2011). Studies van overlevenden van kinderkanker suggereren dat immuunstoornissen kunnen aanhouden na het verdwijnen van de ziekte; overlevenden van pediatrische leukemie die geen HCT krijgen, hebben een verminderde humorale en adaptieve immuniteit bij voltooiing van de behandeling (Perkins et al., 2017; Top et al., 2020), en sommige patiënten reageren niet, en andere kunnen een afnemende immuniteit hebben (Nilsson et al. ., 2002; Top et al., 2020) ondanks hervaccinatiepogingen. Naarmate immunisatie-inspanningen tegen SARS-CoV-2 wijdverbreid worden, zal inzicht in de vaccinrespons bij immuungecompromitteerde patiënten van cruciaal belang zijn voor het informeren van effectievere strategieën om deze populatie te beschermen tegen ernstige COVID-19, die kunnen worden geëxtrapoleerd naar andere ziekteverwekkers die door vaccins kunnen worden voorkomen.

In deze studie stellen we voor om een ​​systematische benadering te gebruiken om humorale en antigeenspecifieke T- en B-celresponsen longitudinaal te profileren na SARS-CoV-2-vaccinatie bij patiënten met een breed scala aan immuunmodificerende ziekten. Bloedmonsters van patiënten zullen voorafgaand aan en met regelmatige tussenpozen na vaccinatie worden afgenomen. We zullen de duurzaamheid en omvang van langetermijnantilichaamresponsen beoordelen met behulp van isotype-specifieke ELISA's en neutraliserende antilichaamtesten. High-parameter flowcytometrie en scRNAseq zullen fenotypering met hoge resolutie van antigeenspecifieke T- en B-celgeheugencellen mogelijk maken, evenals repertoire-analyse, wat de waarschijnlijkheid van immuunontsnapping bij gevaccineerde patiënten kan beïnvloeden. Ten slotte zal deze studie ons in staat stellen om te bepalen of gekloonde antilichamen of serum van patiënten met immuundisregulatie minder goed in staat zijn om virale varianten te neutraliseren, wat inzicht geeft in de vraag of verminderde klonale diversiteit bij patiënten kan resulteren in minder bescherming tegen virale varianten.