염증성 장 질환, 세포 치료 및 이식에서의 정밀 진단(The PREDICT 시험) (PREDICT)

가설:

가설 #1: 조사관은 염증성 장 질환(IBD) 및 위장관(GI) 급성 GVHD의 원인이 되는 분자 메커니즘을 정의할 수 있고 유세포 분석, TCR 딥 시퀀싱 및 전사체학을 포함한 고급 면역학적 분석을 사용하여 다른 염증성 장애와 구별할 수 있다는 가설을 세웁니다. .

가설 #2: 조사관은 종적 시스템 기반 면역학적 분석이 보호 면역의 이식 후 결함뿐만 아니라 급성 및 만성 GVHD뿐만 아니라 IBD의 분자 진화에 대한 환자별 결정을 가능하게 하고 어떤 경로가 교란되면 임상 질환을 일으킬 수 있습니다. 이러한 경로의 발견은 향상된 진단, 예후 및 치료 접근 방식과 조혈 줄기 세포 이식(HCT)을 받는 환자를 위한 개인화된 치료 의사 결정으로 이어질 것입니다.

가설 #3: 우리는 세포 치료와 관련된 효능, 수명 및 독성을 포함하여 입양 세포 치료의 뚜렷한 결정 요인과 관련된 분자 메커니즘, 표현형 및 기능적 면역학적 특성을 정의할 수 있다는 가설을 세웁니다. 유세포 분석법, 질량 분석법, TCR 딥 시퀀싱 및 단일 세포 전사체학을 포함한 고급 면역학적 분석을 사용하여 유도하는 세포 치료제 및 내인성 면역 반응의 세로 특성화는 효능 및 독성에 중요한 경로를 식별 및 구별하고 후속 치료 변조를 가능하게 합니다.

가설 #4: 우리는 IBD 환자와 HCT 수혜자의 장내 마이크로바이옴의 차이가 두 질병(예: 균혈증, 설명할 수 없는 열, 사망률). 차세대 시퀀싱에 의한 장내 미생물 군집의 종단 특성화는 관찰된 임상적 변화와 일치하는 순차적인 미생물 변화의 검출을 허용할 것입니다. 특정 임상 결과와 함께 반복적으로 관찰되는 마이크로바이옴의 중요한 변화의 발견은 병리생리학에 대한 더 나은 기계론적 이해로 이어지고 미래의 진단 및 예방 접근법을 알려줄 것입니다.

가설 #5: 우리는 광범위한 장애와 관련된 면역 조절 장애가 백신에 대한 면역 반응을 변화시켜 이러한 집단에서 전염병에 대한 감수성을 악화시킬 것이라는 가설을 세웁니다. 특히, HCT 및 고형 장기 이식 수혜자뿐만 아니라 활동성 또는 최근 악성 종양 또는 자가면역 질환의 병력이 있는 환자는 질병 병태생리학 또는 치료 요법의 영향으로 인해 SARS-CoV-2 백신 접종에 대한 T 및 B 세포 반응이 감소할 수 있습니다. 면역 기능. 포괄적인 혈청학적 분석, 높은 매개변수 유세포 분석, T 및 B 세포 RNA 염기서열 분석을 통해 중화 항체 역가, 항원 특이적 T 및 B 세포 확장, 표현형, 다양성 및 이러한 환자 집단에서 백신 접종 후 생존에 대한 종적 분석이 가능할 뿐만 아니라 관련 및 관련 없는 건강한 통제에서. 이러한 데이터는 이러한 장애의 면역 손상이 감염에 대한 불량한 반응에 어떻게 기여하는지에 대한 기계론적 통찰력을 제공할 것입니다. SARS-CoV-2는 많은 인구가 순진한 상태로 남아 있는 병원체이므로 면역이 약화된 개인의 새로운 도전에 대한 면역 반응을 연구할 수 있는 독특한 기회를 나타냅니다. 또한, 이러한 발견은 예방 가능한 질병으로부터 취약한 인구를 보호하기 위한 조치를 개선하는 방법에 대한 공중 보건 지침을 알려줄 것입니다.

목표:

특정 목표 #1: IBD 및 GI 급성 GVHD에 특정한 메커니즘을 확인하고 다른 염증성 질환과 구분합니다.

목표 1: 추정 GI GVHD, 염증성 장질환(IBD) 및 기능성 위장병(FGID)에 대해 내시경 검사를 받는 환자로부터 채취한 GI 조직 샘플에서 정제한 T 세포에 대해 유세포 분석, TCR 딥 시퀀싱 및 전체 전사체 분석을 수행합니다.

목표 2: GI GVHD, IBD 및 FGID로 진단된 환자의 내시경 검사 시 말초 혈액의 T 세포에 대한 유세포 분석, TCR 딥 시퀀싱 및 전사체 분석을 수행합니다.

특정 목표 #2: HCT를 받는 환자의 IBD, 급성 GVHD, 만성 GVHD 및 보호 면역 결함의 원인이 되는 면역 조절 장애를 특성화합니다.

목적 1: IBD 환자 및 동종 HCT를 받는 환자로부터 정제된 T 세포 및 B 세포에 대한 종적 면역 분석을 수행합니다. 이식 환자의 경우 급성 및 만성 GVHD, 재발, 이식 후 감염성 합병증이 발생하는 환자의 T 및 B 세포 면역을 비교하고 이러한 합병증이 없는 환자와 비교할 것입니다.

목표 2: IBD 환자와 HCT를 받는 환자에서 종단적으로 미생물군 분석을 수행하여 이식 후 합병증 발생에 있어 미생물군 변화의 영향을 확인합니다.

특정 목표 #3: 세포 치료에 대한 임상 반응을 결정하는 데 관련된 분자 및 세포 면역학적 메커니즘을 식별하고 성공적인 항종양 반응에 중요한 경로를 부작용과 관련된 경로와 구별합니다.

목적 1: 투여 전에 세포 제품을 특성화하고 qPCR 기반 도입유전자 검출(해당되는 경우)을 사용하여 환자의 말초 혈액 및 해당되는 경우 골수, CSF 및 기타 조직에서 생체 내 분포, 동역학, 지속성 및 기능을 세로로 추적합니다. 세포 제품에 포함된 T 세포 및 기타 면역 세포에 대한 유세포 분석, 질량 세포 분석, TCR 딥 시퀀싱 및 전체 전사체 분석.

목표 2: 세포 치료와 내인성 면역 체계의 상호 작용을 종단적으로 조사하고 유세포 분석법, 질량 세포 분석법, TCR 딥 시퀀싱, 전체 전사체 분석을 사용하여 세포 치료의 효능, 지속성 및 독성에서 내인성 면역 반응의 역할을 기술합니다. 내인성 면역 세포에 대한 분석 및 가용성 인자 및 항체 분석.

특정 목표 #4: 암, 이식 또는 자가면역 질환으로 인한 면역 조절 장애가 있는 환자의 SARS-CoV-2 백신 접종에 대한 항원 특이적 적응 면역 반응을 특성화하고 내구성 면역 생성 장애의 기본 메커니즘을 식별합니다.

목표 1: SARS-CoV-2 특정 항체 수준 및 중화 항체 역가 평가를 포함하여 환자 및 건강한 대조군에서 추가 백신을 포함하여 백신 접종 전후의 혈청학적 면역에 대한 종합적인 종적 분석을 수행합니다.

목표 2: 높은 매개변수 유세포 분석법, 단일 세포 RNA 시퀀싱(scRNAseq), T 및 B 세포 레퍼토리 분석을 사용하여 백신 접종 및 후속 추가 백신 후 SARS-CoV-2에 대한 항원 특이적 T 및 B 세포 기억의 종적 발달을 특성화합니다. 환자와 건강한 대조군에서.

목표 3: 건강한 대조군과 비교하여 바이러스 변이체에 결합하고 중화하는 데 반응하는 환자의 혈청 및 복제 항체의 능력을 평가합니다.

배경 및 의의:

IBD: 크론병(CD) 및 궤양성 대장염(UC)을 포함하는 염증성 장 질환(IBD)은 미국에서 140만 명의 사람들을 괴롭히는 만성 복합 위장관(GI) 자가면역 상태입니다1. CD와 UC 모두의 발병률과 유병률은 시간이 지남에 따라 증가하고 있으며 전 세계적으로 더 넓은 지역을 포괄하고 있습니다1,2. 또한, 소아 IBD는 모든 진단된 IBD의 25%를 차지하며, 소아는 특히 성장 및 발달을 위한 기간 동안 위장병 및 면역억제에 노출되어 평생을 보내게 됩니다. 병인 및 유전적 이상에 대한 지속적인 연구에도 불구하고 IBD 발생 및 진행의 ​​기전은 잘 알려져 있지 않습니다. 표준 요법은 여전히 ​​스테로이드, 기타 비특이적 면역억제(예: 메토트렉세이트 및 아자티오프린) 및 항TNF 생물학적 제제에 의존합니다. 사이토카인 및 백혈구 밀매를 차단하는 제제와 같은 새로운 치료법이 등장하고 있지만 보편적으로 성공적인 치료법은 확인되지 않았습니다. 따라서, IBD의 재발성 형태는 계속해서 영양 흡수 능력, 빈혈, 그리고 종종 외과적 개입의 필요성에 대한 전신적인 손상을 초래합니다. IBD의 고유한 하위 유형(UC 및 CD 내에서도)을 구동하는 메커니즘을 해독한 다음 근본적인 전신 조절 장애를 기반으로 치료를 최적화하는 것은 현장에서 중요한 미충족 요구입니다. IBD의 기본 면역 메커니즘은 아직 밝혀지지 않았지만, IBD가 유전적으로 민감한 숙주의 자기 항원과 공생 미생물총에 대한 부적절한 면역 반응을 나타낼 수 있음을 시사하는 중요한 데이터가 있습니다3. 따라서 쥐의 대장염 모델은 점막 염증이 조절 세포 결함과 함께 병리학적 T 헬퍼-(Th) 세포 반응의 결과임을 시사합니다. 이러한 데이터는 IL-2 결핍 마우스4, IL-10 결핍 마우스5, TGF-베타6 및 TGF-베타GRII 우성 음성 형질전환 마우스7의 실험에서 나타났습니다. 병인은 또한 Stat4 트랜스제닉 마우스8 및 TNFARE 돌연변이 마우스9의 실험에서 나타난 이펙터 세포 반응의 과장을 포함합니다. 보다 최근의 인간 사이토카인 분석은 임상적 유사성에도 불구하고 IBD의 각 하위 유형이 독특한 사이토카인 프로파일을 보인다고 제안합니다10. 특정 이펙터 T 세포 경로를 표적으로 하는 초기 연구가 시작되었지만11, 표적 장기 전사체학의 적용은 초기 단계에 있으며 개별 표적 경로는 여전히 파악하기 어렵습니다.

HCT: 동종 HCT는 악성 및 비악성 혈액 질환 환자에게 효과적인 치료법입니다. 그러나 이 치료법은 높은 이환율과 사망률로 인해 복잡하여 광범위한 적용이 제한됩니다. 이식 후 이환율과 사망률의 주요 원인에는 급성 및 만성 GVHD, 재발 및 전염병이 포함됩니다. PREDICT 시험의 목표는 이러한 합병증을 유발하는 메커니즘을 이해하기 위해 시스템 접근 방식을 적용하여 증거 기반 치료 전략을 고안할 수 있도록 하는 것입니다.

급성 GVHD: 급성 GVHD는 기증자 유래 동종 반응성 T 세포가 활성화되어 숙주 세포12,13에 대한 세포 독성과 사이토카인 매개 조직 손상을 초래함으로써 매개됩니다. 중등도에서 중증 급성 GVHD는 HCT를 받는 환자의 최대 60%에서 발생할 수 있으며 더 심각한 형태는 사망률 >50%14-17와 관련이 있습니다. 면역 매개 조직 손상의 가장 흔한 부위는 간, 피부 및 위장관(GI)입니다. GI GVHD는 HCT 환자의 40-50%에서 발생하며 이 질병으로 인한 이환율과 사망률의 주요 원인입니다17.

GI GVHD의 진단은 임상 및 조직병리학적 소견에서 도출됩니다. GVHD는 설사, 복통, 메스꺼움, 구토 및/또는 식욕 부진의 증상으로 이어지는 상부 및 하부 위장관 모두에서 발생할 수 있습니다12. GI GVHD에 대한 조직병리학적 진단 기준에는 소낭 세포 세포 사멸, 소낭 파괴 및/또는 점막 박리의 식별이 포함됩니다18. 불행하게도, 조직학에 대한 GVHD의 중증도는 질병의 임상 경과와 거의 관련이 없습니다.

GI GVHD는 HCT 다음의 일반적인 합병증이지만 일관되고 정확한 진단에는 많은 장벽이 남아 있습니다. 첫째, 진단은 적절한 조직 샘플링에 달려 있습니다. 눈에 보이는 병변은 종종 결석하고19 내시경 소견은 확산되고 비특이적일 수 있습니다. 생검을 위한 위장관의 최적 위치 또는 진단을 확보하는 데 필요한 생검 수에 대한 합의도 없습니다. 상부 위장관과 하부 위장관의 생검 표본 간에도 불일치가 자주 발생합니다20. 둘째, GVHD 과정 초기에 나타나는 환자는 놓치거나 아직 나타나지 않을 수 있는 미묘한 조직병리학적 소견을 가질 수 있습니다. GVHD가 시작될 때 세포사멸 세포가 거의 보이지 않을 수 있으며 소실 및 점막 손상이 아직 발생하지 않았을 수 있습니다18. 마지막으로, 컨디셔닝 요법 관련 독성, 수반되는 감염 및 모두 위장관의 국소 염증을 유발할 수 있는 약물을 포함하여 GVHD의 오진으로 이어질 수 있는 교란 요인도 있습니다. myeloablative 컨디셔닝 요법 후 처음 20일 동안 미만성 세포사멸이 급성 GVHD21을 모방하는 것을 볼 수 있습니다. Clostridium difficile 및 cytomegalovirus 감염도 유사한 임상 및 조직병리학적 양상을 보일 수 있습니다22. 마이코페놀레이트 모페틸23 및 양성자 펌프 억제제24의 사용도 GVHD로 오진될 수 있는 위장관 세포사멸과 관련이 있는 것으로 밝혀졌습니다. 이러한 모든 요인은 GVHD18,25의 조직학적 진단에서 높은 수준의 관찰자 간 가변성과 임상 관찰과의 낮은 상관관계로 이어져 보다 민감하고 구체적인 진단 방법이 필요함을 보여줍니다.

GVHD에서 진단 및 예후적 의미를 갖는 바이오마커의 식별에 최근 발전이 있었습니다. IL-8, IL-2 수용체-알파, 종양 괴사 인자 수용체-1(TNF-1), 간세포 성장 인자(HGF), 엘라핀, 재생 섬 유래 3-알파(reg-3alpha), TIM3, IL-6 , ST2, B-세포 활성화 인자(BAFF), IL-33, CXCL10 및 CXCL11은 모두 GVHD26-28의 발달을 예측하는 데 유용한 것으로 밝혀졌습니다. 이러한 바이오마커가 확인되었지만 광범위하게 검증되지는 않았으며 아직 치료를 변경하기 위한 지침으로 임상적으로 채택되지 않았습니다. 더욱이, 지금까지 발견된 바이오마커는 종종 하류 경로 교란의 결과이며, 질병 과정 초기에 발생하는 상류 조절 장애를 발견하는 것은 질병의 자연적 과정을 변경하기 위한 시험으로 이어질 수 있는 진단 또는 예후 모델을 개발하는 데 유용할 수 있습니다. 질병.

우리 그룹은 이전에 유세포 분석 및 전체 전사체 분석을 포함한 고급 면역학적 분석을 사용하여 GVHD29-31에서 활성화된 이전에 인식되지 않은 분자 경로를 식별할 수 있음을 보여주었습니다. 우리는 급성 GVHD 환자에서 시스템 면역학 접근법을 활용함으로써 진단 및 예후 가치가 있는 경로를 식별할 수 있을 것으로 기대합니다. 이것은 우리의 진단 능력을 향상시킬 수 있으며 가장 중요한 것은 환자의 특정 면역학적 프로필에 따라 환자 관리를 개별화할 수 있다는 것입니다.

만성 GVHD: CGVHD는 이식 환자의 40-60%에서 발생하며32-35 지난 20년 동안 이 질병의 발병률이 증가했습니다. -40. 만성 GVHD의 빈도 증가에도 불구하고 정확한 진단과 증거 기반 치료는 여전히 부족합니다. 따라서 만성 GVHD 바이오마커가 확인되었지만 아직 임상 적용 자격이 있는 것은 없습니다41. 또한, 이러한 바이오마커는 종종 말기 경로 교란을 나타내며 비특이적 염증 및 조직 손상뿐만 아니라 역조절 메커니즘으로 인해 발생할 수 있습니다. 진단 문제 외에도 중요한 치료 문제도 있습니다. 따라서 만성 GVHD의 치료는 지난 수십 년 동안 크게 변하지 않았습니다. 1차 요법은 칼시뉴린 억제제(CNI)42-44를 포함하거나 포함하지 않는 코르티코스테로이드로 남아 있으며 불행하게도 약 50%의 환자가 실패하고 2차 요법45,46이 필요하며 2차 요법 후 2년 무실패 생존율은 25%에 불과합니다. 47. 이러한 데이터는 분자 진단 및 증거 기반 치료 패러다임 모두에 대해 이 분야에서 충족되지 않은 중요한 요구 사항을 강조합니다.

보호 면역: 급성 및 만성 GVHD의 문제 외에도 HCT를 받는 환자와 IBD 환자는 다른 독성에도 직면하며, 그 중 다수는 이식 후 기능 장애 면역 재구성과 관련이 있습니다. 그러나 보호 면역(감염성 병원균과 백혈병 재발 모두에 대한)의 많은 결함에 대한 현상학은 잘 문서화되어 있지만 원인이 되는 분자 메커니즘은 아직 알려지지 않았습니다. 이러한 질문을 해결하기 위해 우리 그룹과 다른 사람들은 새로운 T 세포 수용체(TCR) 및 B 세포 수용체(BCR) 딥 시퀀싱 기술의 적용을 포함하여 HCT 후 면역학적 재구성에 대한 자세한 평가를 수행하기 시작했습니다30,48-54. 이러한 기술을 통해 이전에는 불가능했던 분자 세부 수준에서 이식 후 면역 재구성의 폭과 깊이를 조사할 수 있으며 감염성 병원체가 전 세계 면역 건강 및 면역 재구성에 미치는 영향에 대한 이해를 심화시킬 수 있습니다. 이러한 기술의 광범위한 적용과 면역 표현형 및 기능에 대한 자세한 평가와의 교차점은 이식 환자의 면역 건강 상태에 대한 새로운 통찰력을 제공할 수 있으며 이식 후 개선을 위해 새로운 개입이 필요한 환자를 식별할 수 있는 가능성을 제공합니다. 면역 재구성.

PREDICT 시험의 목표는 시스템-생물학 접근 방식을 적용하여 이식 후 주요 면역학적 결과에 대한 정밀 진단을 가능하게 하는 것입니다. 이 접근법은 가장 치명적인 이식 후 합병증을 유발하는 분자 메커니즘에 대한 이해를 심화하고 이식 환자를 위한 증거 기반 치료 패러다임을 설계하는 중요한 플랫폼 역할을 할 것입니다.

세포 요법: 새로운 입양 세포 요법이 임상 시험에 점점 더 많이 진입하고 있으며 FDA 승인 생물학적 제제로 이용 가능하므로 이전에 불응성인 환자에게 치료 옵션을 제공합니다. 이 광범위하고 흥미로운 분야에는 다양한 항원에 대한 키메라-항원 수용체(CAR) T 세포55, TCR을 발현하도록 유전적으로 변형된 T 세포56,57, 사이토카인으로 자극된 NK 세포58, 내인성 방사선 조사 종양에 대한 종양 백신 접근법이 포함됩니다. 샘플59 또는 종양 항원으로 펄스된 면역 세포.60 키메라 항원-수용체 T 세포는 특히 CD19+ B 세포 악성종양61-64 환자에서 극적인 반응을 일으켜 여러 제품에 대한 FDA 승인을 받았습니다. 처음에는 전례 없는 임상적 관해가 달성될 수 있지만, 주입 후 12개월에 EFS가 50%인 CAR T 세포 지속성과 반응의 지속성61, 종양 탈출 기전65 및 사이토카인 방출 증후군, 신경학적 독성66을 포함하는 상당한 독성66으로 인해 접근 방식이 자주 제한됩니다. . CAR T 세포 치료의 맥락에서 성공적인 적용을 위한 핵심 요소가 확인되었으며 여기에는 동시자극 신호 메커니즘의 통합67,68, 생체 내 CAR T 세포 확장과 반응69의 연관성69, 증식 능력이 있는 T 세포 표현형 하위 그룹의 기여 및 장기간 지속70. 또한, 사이토카인 방출 증후군 및 신경독성71,72에서 IL-6 및 IL-1의 역할에 대한 중요한 통찰과 신경독성73의 매개체로서 CNS에서 범T 세포 침윤 및 높은 사이토카인 수준의 기여에 대한 중요한 통찰을 얻었습니다. 우리 그룹과 다른 사람들. 그러나 성공적인 반응의 결정요인, 독성, 내인성 면역 체계와의 상호작용, 독성 감소를 목표로 하는 개입의 단기 및 장기 효과(예: IL6R- 길항제 Tocilizumab 또는 IL-1 봉쇄74.

이 연구에서 우리는 세포 치료제의 특성, 생체 내 투여 후 진화, 말초 혈액, 골수, CNS 및 해당되는 경우 조직과 같은 다양한 구획에서의 행동과 내인성 면역 체계와의 상호 작용을 체계적으로 조사하는 것을 목표로 합니다. TCR 시퀀싱(적용 가능한 경우 BCR 시퀀싱)과 결합된 단일 세포 전사체학 및 전이된 내인성 면역 세포의 표현형 특성화뿐만 아니라 혈장 내 사이토카인, 케모카인 및 항체와 같은 분비된 면역 인자의 분석이 채택되고 임상 반응과 연관됩니다. . 이 공정하고 체계적인 정밀 진단 접근법은 세포 치료 접근법, 표적 및 질병 실체의 특성에 따라 공통적이거나 구별되는 중요한 경로를 식별하고 바람직하지 않은 독성과 연관되거나 분리될 수 있게 합니다. 이것은 세포 치료제의 미래 합리적인 설계를 비판적으로 알리고 세포 치료제 투여 후 가능한 치료 개입을 알릴 것입니다.

백신 반응: 줄기 세포 및 고형 장기 이식 수혜자, 현재 또는 이전에 악성 종양이 있는 환자, IBD를 포함한 자가 면역 또는 류마티스 질환 환자 사이의 공통 주제는 종종 면역 조절 치료의 효과에 의해 악화되는 면역 조절 장애입니다. , 방사선, 화학 요법 및 장기 면역 억제를 포함합니다. 고형 장기 이식 수혜자의 15%는 이식 후 처음 5년 동안 예방접종을 위한 조치에도 불구하고 백신으로 예방할 수 있는 질병으로 입원합니다(Feldman et al., 2019). 이러한 환자들(Madan et al., 2008; Mazzone et al., 2004). HCT 수혜자는 백신 접종에 대해 다양한 정도로 반응하지만 건강한 대조군과 동일한 수준의 반응을 나타내지 않으며 GVHD도 있는 경우 반응이 더 변경될 수 있습니다(Avetisyan et al., 2008; Shalabi et al., 2019). 류마티스 또는 자가면역 질환이 있는 환자는 특히 TNF알파 차단제와 같은 면역조절제를 사용하는 경우 특정 백신에 대한 반응이 손상된 것으로 나타났습니다(Dell' Era et al., 2011). 소아암 생존자에 대한 연구는 면역 손상이 질병 해결 이후에도 지속될 수 있음을 시사합니다. HCT를 받지 않은 소아 백혈병 생존자는 치료 완료 시 체액성 및 적응성 면역이 손상되었으며(Perkins et al., 2017; Top et al., 2020) 일부 환자는 반응하지 않으며 다른 환자는 면역이 약화될 수 있습니다(Nilsson et al. ., 2002; Top et al., 2020) 재접종 시도에도 불구하고. SARS-CoV-2에 대한 예방 접종 노력이 널리 퍼짐에 따라 면역 약화된 환자의 백신 반응에 대한 통찰력은 백신으로 예방할 수 있는 다른 병원체로 추정할 수 있는 중증 COVID-19로부터 이 인구를 보호하기 위한 보다 효과적인 전략을 알리는 데 중요합니다.

이 연구에서 우리는 광범위한 면역 변형 질환이 있는 환자에서 SARS-CoV-2 백신 접종 후 체액성 및 항원 특이적 T 및 B 세포 반응을 종단적으로 프로파일링하기 위한 체계적인 접근 방식을 사용할 것을 제안합니다. 환자의 혈액 샘플은 백신 접종 전과 백신 접종 후 정기적으로 수집됩니다. 우리는 isotype-specific ELISAs 및 중화 항체 분석을 사용하여 장기 항체 반응의 내구성과 크기를 평가할 것입니다. 고 매개변수 유세포분석 및 scRNAseq는 항원 특이적 T 및 B 세포 기억 세포의 고해상도 표현형 분석과 백신 접종 환자의 면역 탈출 가능성에 영향을 미칠 수 있는 레퍼토리 분석을 가능하게 합니다. 마지막으로, 이 연구를 통해 면역 조절 장애가 있는 환자의 복제된 항체 또는 혈청이 바이러스 변이체를 중화할 수 있는지 여부를 결정할 수 있으므로 환자의 클론 다양성 감소로 인해 바이러스 변이체에 대한 방어력이 떨어질 수 있는지 여부에 대한 통찰력을 얻을 수 있습니다.