Plasman adiponektiinitasot ja suhteet sytokiiniin lapsilla, joilla on akuutti reumakuume

Kaikkiaan 33 lasta (ikähaarukka: 5-17 vuotta; 15 miestä ja 18 naista) otettiin mukaan tutkimukseen, joille diagnosoitiin ARF Eskişehir Osmangazin yliopiston lääketieteellisen tiedekunnan lastenkardiologian osastolla. Tutkimusprotokollan hyväksyi Eskişehir Osmangazin yliopiston lääketieteellisen tiedekunnan eettinen komitea (päätös nro 41, 4. kesäkuuta 2008). Tutkimukseen osallistuneiden vanhemmille tiedotettiin tutkimuksen tavoitteesta ja menetelmästä sekä hankittiin kirjalliset suostumukset.

Tutkimushenkilöillä ARF-diagnoosi tehtiin Modified Jones -kriteerien (4) mukaisesti ja aloitettiin asianmukainen hoito. Potilaat jaettiin kolmeen ryhmään kliinisten löydösten perusteella. Ryhmään 1 kuuluivat potilaat, joilla oli vain korea, kun taas niveltulehdusta ja sydäntulehdusta sairastavat potilaat olivat mukana ryhmässä 2 ja potilaat, joilla oli vain sydäntulehdus, ryhmään 3. Ryhmää, jolla oli vain niveltulehdus, ei vahvistettu, koska potilaita, joilla oli eristetty niveltulehdus, seurataan yleensä perusterveydenhuollon ja toissijaisen terveydenhuollon laitoksia sen sijaan, että ohjattaisiin nämä potilaat korkea-asteen terveydenhuoltokeskukseemme.

Laskimoverinäytteenotto Seuraavat testit analysoitiin käyttämällä potilailta ja terveiltä kontrollihenkilöiltä otettuja laskimoverinäytteitä; täydellinen verenkuva, ESR, nefelometrinen CRP ja immuuniturbidimetrinen hsCRP, kokonaiskolesteroli-, triglyseridi-, LDL-C- ja HDL-C-tasot entsymaattisella kolokserimetrisellä menetelmällä sekä FSH- ja LH- ja kokonaistestosteronitasot (miesten koehenkilöillä) ja estradiolitasot (naishenkilöillä) kemoluminesenssianalyysillä. Plasma- ja seeruminäytteet otettiin adiponektiinille, TNF-a:lle, IL-6:lle ja IL-8:lle. Verinäytteet otettiin akuutin vaiheen reaktanttien analysoimiseksi 2., 5., 10. ja 15. päivänä sekä viikolla 8 hoitovasteen arvioimiseksi, kun taas verinäytteitä otettiin samanaikaisesti adiponektiinin, TNF-α:n, IL-6:n ja IL-6:n analysoimiseksi. IL-8 tasot.

Plasman adiponektiinin mittaus Laskimoverinäytteet lisättiin sentrifugiputkiin EDTA:lla, niitä sentrifugoitiin nopeudella 3000 rpm, 4 °C 15 minuuttia ja tuloksena saadut plasmanäytteet säilytettiin -80 °C:ssa. Plasmanäytteet laimennettiin (1:300) sarjan käyttöohjeiden mukaisesti ennen analyysin suorittamista. Plasman adiponektiinitasojen määrittämiseksi otetut näytteet analysoitiin käyttämällä Human Adiponektiini ELISA, High Sensitivity Kit (BioVendor Research and Diagnostic Products, Modrice, Tšekki) entsyymi-immunosorbenttimääritysmenetelmällä (ELISA). Absorbanssi luettiin 450 nm:ssä. Tulokset ilmaistiin ng/ml:nä ja muutettiin µg/ml:ksi jakamalla ne 1000:lla.

Seerumin TNF-a-, IL-6- ja IL-8-mittaukset Laskimoverinäytteet lisättiin sentrifugiputkiin, jotka eivät sisältäneet antikoagulanttia seerumin TNF-a-, IL-6- ja IL-8-tasojen mittaamiseksi. Näytteitä sentrifugoitiin nopeudella 3000 rpm, 4 °C 15 minuuttia ja tuloksena saadut seeruminäytteet säilytettiin -80 °C:ssa. Seerumin TNF-, IL-6- ja IL-8-tasojen mittaamiseen otetut näytteet analysoitiin ELISA-menetelmällä käyttämällä ihmisen TNF-α ELISA-, ihmisen IL-6 ELISA-, ihmisen IL-8/NAP-1 ELISA-pakkauksia (Bender MedSystems, Wien, Itävalta). Absorbanssi luettiin 450 nm:ssä. Tulokset ilmaistiin pg/ml.