Plazmatické hladiny adiponektinu a vztahy s cytokiny u dětí s akutní revmatickou horečkou

Do studie bylo zařazeno celkem 33 dětí (věkové rozmezí: 5 - 17 let; 15 mužů a 18 žen), u kterých byla diagnostikována ARF na Klinice dětské kardiologie Lékařské fakulty Univerzity Eskişehir Osmangazi. Protokol studie byl schválen Etickou komisí Lékařské fakulty Univerzity Eskişehir Osmangazi (rozhodnutí č. 41 ze dne 4. června 2008). Rodiče účastníků studie byli informováni o cíli a způsobu studie a byly získány písemné souhlasy.

U zkoumaných subjektů byla diagnostika ARF provedena podle Modifikovaných Jonesových kritérií (4) a byla zahájena vhodná léčba. Pacienti byli rozděleni do tří skupin podle klinických nálezů. Skupina 1 zahrnovala pacienty pouze s choreou, zatímco pacienti s artritidou a karditidou byli zařazeni do skupiny 2 a pacienti pouze s karditidou byli zařazeni do skupiny 3. Skupina pouze s artritidou nebyla stanovena, protože pacienti s izolovanou artritidou jsou obvykle sledováni v primární a sekundární zdravotnická zařízení, spíše než aby tyto pacienty odkazovali do našeho centra terciární zdravotní péče.

Odběr vzorků žilní krve Následující testy byly analyzovány pomocí vzorků žilní krve odebraných pacientům a zdravým kontrolním subjektům; kompletní krevní obraz, ESR, nefelometrické CRP a imunitní turbidimetrické hsCRP, hladiny celkového cholesterolu, triglyceridů, LDL-C a HDL-C enzymatickou koloxrimetrickou metodou a hladiny FSH a LH a celkového testosteronu (u mužů) a estradiolu (u žen) chemoluminiscenčním testem. Vzorky plazmy a séra byly odebrány pro adiponektin, TNF-a, IL-6 a IL-8. Vzorky krve pro analýzu reaktantů akutní fáze byly odebrány v den 2., 5., 10. a 15. den a v 8. týdnu za účelem vyhodnocení odpovědi na léčbu, zatímco vzorky krve byly současně odebírány pro analýzu adiponektinu, TNF-α, IL-6 a Hladiny IL-8.

Měření adiponektinu v plazmě Vzorky žilní krve byly přidány do centrifugačních zkumavek s EDTA, centrifugovány při 3000 otáčkách za minutu, 4 °C po dobu 15 minut a výsledné vzorky plazmy byly skladovány při -80 °C. Vzorky plazmy byly před provedením analýzy zředěny (1:300) podle pokynů pro použití soupravy. Vzorky odebrané na plazmatické hladiny adiponektinu byly analyzovány pomocí Human Adiponectin ELISA, High Sensitivity kit (BioVendor Research and Diagnostic Products, Modřice, Česká republika) s metodou ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay). Absorbance byla odečítána při 450 nm. Výsledky byly vyjádřeny jako ng/ml a převedeny na ug/ml jejich dělením 1000.

Měření sérového TNF-a, IL-6 a IL-8 Vzorky žilní krve byly přidány do centrifugačních zkumavek neobsahujících antikoagulant pro měření hladin TNF-a, IL-6 a IL-8 v séru. Vzorky byly centrifugovány při 3000 rpm, 4 °C po dobu 15 minut a výsledné vzorky séra byly skladovány při -80 °C. Vzorky odebrané pro měření hladin TNF-, IL-6 a IL-8 v séru byly analyzovány metodou ELISA za použití souprav Human TNF-α ELISA, Human IL-6 ELISA, Human IL-8/NAP-1 ELISA (Bender MedSystems, Vídeň, Rakousko). Absorbance byla odečítána při 450 nm. Výsledky byly vyjádřeny jako pg/ml.