Livelli plasmatici di adiponectina e relazioni con le citochine nei bambini con febbre reumatica acuta

Complessivamente, 33 bambini (fascia di età: 5-17 anni; 15 maschi e 18 femmine) sono stati arruolati nello studio a cui è stata diagnosticata l'IRA presso il Dipartimento di Cardiologia Pediatrica, Facoltà di Medicina, Università Eskişehir Osmangazi. Il protocollo dello studio è stato approvato dal Comitato Etico della Facoltà di Medicina, Università Eskişehir Osmangazi (Decisione n. 41 del 4 giugno 2008). I genitori dei partecipanti allo studio sono stati informati sullo scopo e sul metodo dello studio e sono stati ottenuti i consensi scritti.

Per i soggetti dello studio, la diagnosi di ARF è stata effettuata secondo i criteri Modified Jones (4) ed è stato avviato un trattamento appropriato. I pazienti sono stati divisi in tre gruppi in base ai risultati clinici. Il gruppo 1 includeva pazienti con solo corea, mentre i pazienti con artrite e cardite erano inclusi nel gruppo 2 e i pazienti con solo cardite erano inclusi nel gruppo 3. Non è stato istituito un gruppo con solo artrite poiché i pazienti con artrite isolata sono solitamente seguiti a strutture sanitarie primarie e secondarie piuttosto che indirizzare quei pazienti al nostro centro sanitario terziario.

Prelievo di sangue venoso I seguenti test sono stati analizzati utilizzando campioni di sangue venoso prelevati da pazienti e soggetti sani di controllo; emocromo completo, VES, CRP nefelometrica e hsCRP immuno turbidimetrica, livelli di colesterolo totale, trigliceridi, LDL-C e HDL-C mediante metodo colossimetrico enzimatico e livelli di FSH e LH e testosterone totale (per i soggetti di sesso maschile) ed estradiolo (per le soggetti di sesso femminile) mediante analisi chemioluminescente. Sono stati prelevati campioni di plasma e siero per adiponectina, TNF-α, IL-6 e IL-8. Sono stati prelevati campioni di sangue per l'analisi dei reagenti della fase acuta al giorno 2, 5, 10 e 15 e alla settimana 8 per valutare la risposta al trattamento, mentre contemporaneamente sono stati prelevati campioni di sangue per l'analisi di adiponectina, TNF-α, IL-6 e Livelli di IL-8.

Misurazione dell'adiponectina nel plasma I campioni di sangue venoso sono stati aggiunti alle provette da centrifuga con EDTA, sono stati centrifugati a 3000 rpm, 4 °C per 15 minuti ei campioni di plasma risultanti sono stati conservati a -80 °C. I campioni di plasma sono stati diluiti (1:300) come indicato nelle istruzioni per l'uso del kit, prima che fosse condotta l'analisi. I campioni prelevati per i livelli plasmatici di adiponectina sono stati analizzati utilizzando il kit ELISA per adiponectina umana, High Sensitivity (BioVendor Research and Diagnostic Products, Modrice, Repubblica Ceca) con il metodo ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay). L'assorbanza è stata letta a 450 nm. I risultati sono stati espressi in ng/ml e convertiti in µg/ml dividendoli per 1000.

Misurazioni sieriche di TNF-α, IL-6 e IL-8 I campioni di sangue venoso sono stati aggiunti a provette da centrifuga non contenenti anticoagulanti per misurare i livelli sierici di TNF-α, IL-6 e IL-8. I campioni sono stati centrifugati a 3000 rpm, 4 °C per 15 minuti e i campioni di siero risultanti sono stati conservati a -80 °C. I campioni prelevati per la misurazione dei livelli sierici di TNF-, IL-6 e IL-8 sono stati analizzati con il metodo ELISA utilizzando i kit Human TNF-α ELISA, Human IL-6 ELISA, Human IL-8/NAP-1 ELISA (Bender MedSystems, Vienna, Austria). L'assorbanza è stata letta a 450 nm. I risultati sono stati espressi come pg/ml.