Уровни адипонектина плазмы и связь с цитокинами у детей с острой ревматической лихорадкой

Всего в исследование было включено 33 ребенка (возрастной диапазон: 5-17 лет; 15 мужчин и 18 женщин) с диагнозом ОРЛ на кафедре детской кардиологии медицинского факультета Университета Эскишехир Османгази. Протокол исследования был одобрен Этическим комитетом медицинского факультета Университета Эскишехир Османгази (Решение № 41 от 4 июня 2008 г.). Родители участников исследования были проинформированы о цели и методе исследования, и были получены письменные согласия.

У участников исследования диагноз ОРЛ был поставлен в соответствии с модифицированными критериями Джонса (4) и было начато соответствующее лечение. По клиническим данным пациенты были разделены на три группы. В 1-ю группу вошли больные только с хореей, во 2-ю — с артритом и кардитом, в 3-ю — только с кардитом. Группа только с артритом не устанавливалась, так как больные с изолированным артритом обычно наблюдаются в учреждения первичной и вторичной медицинской помощи, а не направлять этих пациентов в наш центр третичной медицинской помощи.

Отбор проб венозной крови Следующие тесты были проанализированы с использованием образцов венозной крови, взятых у пациентов и здоровых контрольных субъектов; общий анализ крови, СОЭ, нефелометрический СРБ и иммунотурбидиметрический вчСРБ, уровни общего холестерина, триглицеридов, ЛПНП и ЛПВП методом ферментативной колоксиметрии, а также уровни ФСГ и ЛГ и общего тестостерона (для мужчин) и эстрадиола (для женщин) с помощью хемолюминесцентного анализа. Образцы плазмы и сыворотки брали на содержание адипонектина, TNF-α, IL-6 и IL-8. Образцы крови брали для анализа реагентов острой фазы на 2-й, 5-й, 10-й и 15-й дни и на 8-й неделе для оценки ответа на лечение, в то время как образцы крови одновременно брали для анализа адипонектина, TNF-α, IL-6 и уровни ИЛ-8.

Измерение адипонектина в плазме Образцы венозной крови добавляли в центрифужные пробирки с ЭДТА, центрифугировали при 3000 об/мин, 4°С в течение 15 минут и полученные образцы плазмы хранили при -80°С. Образцы плазмы разводили (1:300) в соответствии с инструкцией по применению набора перед проведением анализа. Образцы, взятые для определения уровней адипонектина в плазме, анализировали с использованием набора ELISA для адипонектина человека, набора High Sensitivity (BioVendor Research and Diagnostic Products, Modrice, Чешская Республика) с методом твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA). Поглощение считывали при 450 нм. Результаты выражали в нг/мл и конвертировали в мкг/мл путем деления на 1000.

Измерения TNF-α, IL-6 и IL-8 в сыворотке Образцы венозной крови добавляли в центрифужные пробирки, не содержащие антикоагулянт, для измерения уровней TNF-α, IL-6 и IL-8 в сыворотке. Образцы центрифугировали при 3000 об/мин, 4°С в течение 15 минут, а полученные образцы сыворотки хранили при -80°С. Образцы, взятые для измерения уровней TNF-, IL-6 и IL-8 в сыворотке, анализировали методом ELISA с использованием наборов ELISA для TNF-α человека, ELISA для IL-6 человека, ELISA для человеческого IL-8/NAP-1 (Bender MedSystems, Вена, Австрия). Поглощение считывали при 450 нм. Результаты выражали в пг/мл.