Naudanlihan vaikutus aineenvaihduntaan ja tulehduksiin

Tämän tutkimuksen lähestymistapa on rekisteröidä terveiden yksilöiden populaatio (n = 10; 5 miestä ja 5 naista) kaksoissokkoutetussa, kaksikätisessä (luonnonmukaisella ruokinnolla ja tavanomaisesti ruokitulla), satunnaistetulla, risteävällä tutkimuksella, jossa jokainen yksittäinen osallistuja toimii omana kontrollinaan vertaillakseen aterian jälkeisiä seerumin sappihappovasteita pihviaterioiden välillä, joista toinen on luonnonmukaisesti ruokittu (OGF) ja toinen tavanomaisesti ruokittu (CONVF). Osallistujat syövät 6 unssin pihviaterian, joka on grillattu USDA:n suosittelemassa lämpötilassa 158 °F:ssa. Satunnaistettu crossover-malli, jossa puolet osallistujista aloittaa OGF-haarassa ja toinen puoli alkaa CONVF-haarassa, eliminoi mahdolliset tilausvaikutukset. Lohkojen satunnaistaminen kahdella lohkolla (yhteensä 5 per lohko) luodaan. Kun jokainen henkilö toimii omana kontrollinaan crossover-kokeissa, eliminoi yksilöiden välisen vaihtelun vaikutuksen. MSU Nutrition Research -ryhmällä on laaja kokemus aterian jälkeisistä testausprotokollista ja ruokavalion manipuloinnista, ja se hyödyntää tätä kokemusta ehdotetun protokollan suorittamisessa asianmukaisella testausta edeltävällä standardoinnilla, aterioiden valmistuksen yhtenäisyydellä, tarkalla verenkeräyksen ajoituksella ja vakiintuneilla prosessointi- ja analysointimenettelyillä. verinäytteitä. Sappihapot, mukaan lukien kaikki primaariset ja sekundaariset muodot, analysoidaan näytteistä, jotka on kerätty ennen ateriaa ja 30 minuutin välein 4 tunnin ajan aterian jälkeen. MSU:n proteomiikan, metabolomiikan ja massaspektrometrian laitoksessa vakiintuneita menetelmiä käytetään kokonais- ja yksittäisten sappihappojen vertaamiseen OGF- ja CONVF-olosuhteiden välillä.

Toimenpiteet:

Vierailun 1 aikana osallistujat saavat tietoisen suostumuksen, heitä pyydetään täyttämään sarja kirjallisia kyselylomakkeita ja antropometrisiä mittauksia. Juuri ennen vierailua 2 on vähintään 72 sisäänajojakso, jonka aikana osallistujia pyydetään noudattamaan tiettyjä ruokavalion ohjeita, kuten punaista lihaa. Toinen (käynti 2) ja kolmas (käynti 3) kestävät kumpikin noin 5 tuntia, ja kukin niistä sisältää yhteensä 9 verenottoa näytekatetrin kautta, ja jokaisella näytteellä kerätään noin 2-3 teelusikallista verta. Veri otetaan ennen tarjottua pihviateriaa ja 30 minuutin välein 4 tunnin ajan aterian jälkeen. Käyntien 1 ja 2 välillä on vähintään 72 tuntia ja käyntien 2 ja 3 välillä 7 päivää. Tämän vähintään 72 tunnin ja 7 päivän jakson aikana osallistujia pyydetään noudattamaan annettuja ruokavalio- ja fyysisiä ohjeita. Lisäksi osallistujia pyydetään täyttämään kuukauden ruokavaliohistoriakysely ja 24 tunnin ruokavalion muistutus.

Ruokavalio: Lihatieteen asiantuntija valitsee ja valmistaa pihvit, jotka annetaan osallistujille. Osallistujia pyydetään nauttimaan 158 °F:n lämpötilaan kypsennetty 6 unssin naudanlihapihvi, joka on joko OGF tai CONVF, mutta se on koodattu ja merkitty sokaisemisen varmistamiseksi.

Kinetiikkaa (mittaa ajan kuluessa) ja kohdentamatonta ja kohdennettua metabolomiikkaa (edistynyt analyyttinen tekniikka, jolla mitataan 1000 molekyyliä yhdestä näytteestä) käytetään työkaluna erillisten ateriatestien mahdollisten terveysvaikutusten erottamiseen luomuruohon vaikutuksen tutkimiseksi. ruokittu naudanliha verrattuna perinteisesti ruokitun naudanlihan kulutukseen terveiden aikuisten paasto- ja aterianjälkeisten vasteiden perusteella. Tutkijat odottavat tunnistavansa joukon metabolisia eroja naudanlihanäytteiden välillä ja tunnistavansa näiden erojen tunnetut vaikutukset terveyteen tarjotakseen merkittävän vertailun ja perustan tulevalle tutkimukselle.

Metabolinen ja lipidominen analyysi: Kun kaikki näytteet on kerätty, seeruminäytteet sulatetaan ja metaboliittifraktio uutetaan. Uuton jälkeen näytteet tutkitaan massaspektrometrialla. Ensimmäinen kohdennettu analyysi keskittyy sappihappoihin, lipideihin ja aminohappoihin. Kohdennettujen analyytien määrä määritetään käyttämällä standardikäyriä ja tuloksena saatuja pitoisuuksia verrataan käyttämällä useita tilastollisia analyysityökaluja. Metaboliittinäytteet analysoidaan käyttämällä Waters Synapt G2Si QTOF -laitetta (Waters Corporation). Tällä instrumentilla on ionien liikkuvuuskyky ja se pystyy erottamaan läheisesti sukua olevat yhdisteet, kuten sappihapot, monimutkaisissa seoksissa niiden poikkileikkausalan ja massan perusteella. Suuri herkkyys ja lukuisat skannaustilat tekevät Synapt QTOF:stä optimaalisen valinnan monimutkaisten biologisten näytteiden kohdistamattomaan analysointiin.

Ruokavalion analyysi: Tässä tutkimuksessa käytetään uusinta versiota (2018) verkkopohjaisesta ruokavalion historiakyselystä (DHQ III), joka on 19-vuotiaille ja sitä vanhemmille aikuisille suunniteltu ruokatiheyskysely, jonka on kehittänyt Risk Factor Monitoring and Methods Branchin henkilökunta ( RFMMB) NIH National Cancer Institutesta. DHQ III:n tuotokset sisältävät hiilihydraattiaineosia, karotenoideja ja tokoferoleja, ravinnon aineosia ravintolisistä, rasvoja, rasvahappoja ja kolesterolia, makroravinteita ja energiaa, kivennäisaineita, proteiiniaineosia ja vitamiinit ovat ravinnon ainesosia ja ruokaryhmiä, jotka ovat saatavilla DHQ III -tulostiedostoissa. . Lisäksi akuutti ruokavalion kulutus määritetään käyttämällä ilmaista, verkkopohjaista Automated Self-Administred 24-hour (ASA24®) -kyselylomaketta.